杨树对潮霉素的敏感性研究

以山新杨、欧美杨、小黑杨无菌苗的幼叶、叶片分化的不定芽、茎段为外植体,研究了其对潮霉素的敏感性。结果表明:叶片分化时山新杨和欧美杨的潮霉素敏感性为2.0 mg/L,小黑杨为3.0 mg/L;不定芽生长和生根时山新杨和小黑杨的敏感性为2.0 mg/L,欧美杨为1.0 mg/L;茎段生长和生根时山新杨和小黑杨的敏感性为6.0 mg/L,欧美杨为2.0 mg/L。

转基因741杨原生质体游离与纯化研究

以转双抗虫基因741杨无菌苗叶片为材料,对叶片原生质体游离、纯化方法及影响因素等进行了分析研究。结果表明,上部叶片产量和活力均高于其他叶位,在实验的浓度范围之内,Macerozyme R-10(离析酶)、Cellulase Onozuka R-10(纤维素酶)、Driselase(Sigma)(崩溃酶)对原生质体的产量和活力无显著影响。适宜转双抗虫基因741杨叶片原生质体游离与纯化的条件为无菌苗上部叶片为材料,0.7mol/L甘露醇的CPW盐溶液预质壁分离1～1.5hCPW+0.5%Macerozyme R-10+0.25%CellulaseOnozuka R-10+0.025%Driselase(Sigma)+0.5mol/L甘露醇(pH 5.7),酶解温度27℃,酶解时间10h,用"过滤-离心-漂浮法"纯化原生质体。

山新杨转Bt+蜘蛛杀虫肽基因的分析

以山新杨(Populus davidiana Dode×P.bollena Lauche)为受体材料,在筛选遗传转化条件的基础上,利用农杆菌介导叶盘转化法进行了Bt+蜘蛛杀虫肽基因转化研究。结果表明:在叶片转化时,卡那霉素的临界质量浓度为10mg/L;生根筛选培养时卡那霉素的临界质量浓度为15mg/L;利用质量浓度为600mg/L的头孢噻肟钠脱菌,对叶片生长和不定芽形成影响不大。山新杨遗传转化的工程菌菌液浓度以0.1～0.2(OD600)为最佳,其叶片分化率为73%～77%、抗性芽率为20%～23%;浸染时间以2～5min为宜,其叶片分化率和抗性芽率最高。在共培养基中加入200μmol/L的乙酰丁香酮,其叶片分化率和抗性芽率分别比对照提高1.43倍和2.61倍。对转化植株的PCR检测结果呈阳性,初步证明外源基因Bt+蜘蛛杀虫肽导入并整合进了山新杨基因组。

山新杨遗传转化体系的优化及转MnSOD基因植株的鉴定

为建立农杆菌介导的山新杨高效遗传转化体系,对MnSOD基因导入山新杨的遗传转化体系进行了优化,获得的较优转化体系如下：菌液浓度OD600=0.1,浸染2~5 min,共培养时加入200μmol/L乙酰丁香酮,脱菌时加入3 mg/L的AgNO3;对部分抗性植株经PCR及Northern杂交检测,证明MnSOD基因已经整合到山新杨基因组中并能够在转录水平上表达。

山新杨嫁接技术研究

采用正交试验设计方法 ,对山新杨芽接药剂选择及嫁接砧木品种选择进行试验 ,选出较合适的药剂组合及芽接砧木品种。同时在芽接试验的基础上 ,对山新杨劈接砧木品种的选择进行常规嫁接试验 ,拟选出五种以上成活率较高的优良砧木品种 ,为山新杨的大量繁殖提供可靠的科学依据。