目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规...目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规猪免疫程序进行2次基础免疫及1次加强免疫,获得免疫猪血浆,用E玫瑰花环形成抑制试验和淋巴细胞毒试验进行效价检测。结果3批免疫猪血浆的E玫瑰花环形成抑制试验结果均达到1∶1000(花环形成率均小于对照组平均花环形成率的75%),淋巴细胞毒试验结果均达到1∶500(淋巴细胞死亡率均大于20%),效价均达到《中华人民共和国药典》2015版(三部)中生产用免疫猪血浆的效价标准。结论传代人淋巴细胞可作为人T淋巴细胞的替代免疫原进行猪的免疫,获得了效价合格的免疫猪血浆,用于P-ATG的制备。展开更多
目的建立抗人T细胞猪免疫球蛋白(porcine anti-human T cell immunoglobulin,p-ATG)药代动力学检测方法并验证,以检测用药后患者血清总p-ATG浓度。方法采用兔抗猪IgG F(ab′)2包被酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG作为二抗,建立...目的建立抗人T细胞猪免疫球蛋白(porcine anti-human T cell immunoglobulin,p-ATG)药代动力学检测方法并验证,以检测用药后患者血清总p-ATG浓度。方法采用兔抗猪IgG F(ab′)2包被酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG作为二抗,建立人血清p-ATG含量的双抗体夹心ELISA,并验证该方法的标准曲线拟合范围、平行性、精密度、准确度、专属性。用建立的方法对13例患者的不同用药剂量的临床血样进行检测并分析药代动力学。结果从0.44μg/ml起始浓度稀释21~27倍的参考品浓度与吸光度值之间呈现S曲线,决定系数(R2)大于0.99,回收率为89.91%~112.96%;平行性样品斜率与参考品斜率变异系数(coefficient of variation,CV)绝对值<10%,R2>0.99,R2的CV<5%;板间、板内曲线CV<10%;重复性CV<10%,回收率为94.23%~101.80%;加标回收率均在99.87%~104.94%之间;输注p-ATG后患者血清与健康人血清以及输注前患者血清p-ATG浓度间差异有统计学意义(F=1.48,P<0.05)。20、25、30 mg剂量用药患者的血样中,p-ATG半衰期分别为20.6、16.6、16.2 d。结论建立的p-ATG药代动力学检测方法具有良好的重复性、准确度及专属性,可以用于p-ATG临床用药后血清浓度的检测。展开更多
文摘目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规猪免疫程序进行2次基础免疫及1次加强免疫,获得免疫猪血浆,用E玫瑰花环形成抑制试验和淋巴细胞毒试验进行效价检测。结果3批免疫猪血浆的E玫瑰花环形成抑制试验结果均达到1∶1000(花环形成率均小于对照组平均花环形成率的75%),淋巴细胞毒试验结果均达到1∶500(淋巴细胞死亡率均大于20%),效价均达到《中华人民共和国药典》2015版(三部)中生产用免疫猪血浆的效价标准。结论传代人淋巴细胞可作为人T淋巴细胞的替代免疫原进行猪的免疫,获得了效价合格的免疫猪血浆,用于P-ATG的制备。
文摘目的建立抗人T细胞猪免疫球蛋白(porcine anti-human T cell immunoglobulin,p-ATG)药代动力学检测方法并验证,以检测用药后患者血清总p-ATG浓度。方法采用兔抗猪IgG F(ab′)2包被酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG作为二抗,建立人血清p-ATG含量的双抗体夹心ELISA,并验证该方法的标准曲线拟合范围、平行性、精密度、准确度、专属性。用建立的方法对13例患者的不同用药剂量的临床血样进行检测并分析药代动力学。结果从0.44μg/ml起始浓度稀释21~27倍的参考品浓度与吸光度值之间呈现S曲线,决定系数(R2)大于0.99,回收率为89.91%~112.96%;平行性样品斜率与参考品斜率变异系数(coefficient of variation,CV)绝对值<10%,R2>0.99,R2的CV<5%;板间、板内曲线CV<10%;重复性CV<10%,回收率为94.23%~101.80%;加标回收率均在99.87%~104.94%之间;输注p-ATG后患者血清与健康人血清以及输注前患者血清p-ATG浓度间差异有统计学意义(F=1.48,P<0.05)。20、25、30 mg剂量用药患者的血样中,p-ATG半衰期分别为20.6、16.6、16.2 d。结论建立的p-ATG药代动力学检测方法具有良好的重复性、准确度及专属性,可以用于p-ATG临床用药后血清浓度的检测。
