猪细小病毒SD-68株NS1基因的克隆与序列分析

对猪细小病毒(PPV)SD-68株NS1基因进行了克隆和序列测定,结果表明SD-68株NS1基因全长1989bp,编码662个氨基酸组成的多肽。该序列与PPVSY-99株、Kresse株、NADL-2(5075)和NADL-2(4973)株的NS1基因比较,核苷酸的同源性分别为99.9%、99.9%、99.7%、98.1%,氨基酸的同源性分别为99.7%、99.5%、99.5%、96.7%。PPVSD-68株与MVM(i)、MEV(Abashiri)、CPV、FPV、BPV3、GPVNS1的进化树分析表明:PPVSD-68株NS1与MVM(i)NS1亲缘关系最近,与BPV3NS1的亲缘关系最远;在Thr435和Ser473位点PPVSD-68株与MVM(i)完全一致,表明Thr435和Ser473是PPVSD-68株NS1潜在的磷酸化位点。

猪细小病毒SD-68株vp2基因的克隆及序列分析

对猪细小病毒(PPV)SD-68 株 vp2 基因进行的克隆和序列测定表明:SD-68 株 VP2 基因全长 1740bp,编码 579 个氨基酸残基组成的多肽;PPV SD-68 株与 Kresse 株、SY-99 株、NADL-2(5075)株、NADL-2(4973)株、US-1 株的 VP2 基因比较,核苷酸的同源性在 99%以上,氨基酸的同源性在 96%以上。进化树分析表明 SD-68株与 kresse 株的亲缘关系最近;在决定毒株组织嗜性的关键氨基酸位点上(378,383 及 436),SD-68 株与 kresse株的差异最小,据此推测 SD-68 株的组织嗜性与 Kresse 株相似,即 SD-68 株属皮炎型 PPV; 而比较弱毒株NADL-2、SD-68 和强毒株 kresse VP2 的氨基酸差异后发现,215、378 和 383 可能是决定 PPV 致病性强弱的关键位点。

PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。

豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对PPVN株弱毒苗的抗体反应。结果 4种不同剂量和 3个不同批次的PPVN株弱毒苗接种豚鼠后第 14天均产生抗体反应 ,其PPVHI效价在 1∶16～ 1∶6 4之间 ,0 .1ml和 1ml剂量接种豚鼠产生的PPVHI抗体水平相近 ,抗体持续长达 12个月以上。在 4℃保存 0天、12个月和 - 2 0℃保存 2年、3年的PPVN株弱毒苗接种豚鼠 ,其PPVHI价在 1∶16～ 1∶32之间 ,说明该苗在 4℃至少能保存 12个月 ,- 2 0℃能保存 3年以上。比较了不同批次疫苗接种猪和豚鼠所产生的抗体反应 ,结果两者相似。用 3批引起豚鼠产生抗体反应的PPVN株弱毒苗接种 76 8头后备母猪 ,共产仔 7136头 ,其中健活仔 6 5 75头 ,平均每窝产健活仔 8.5 6头 ,产死仔仅 0 .73头。证明豚鼠是监测PPV弱毒苗抗体的首选实验动物。