茯苓酸改善多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的研究茯苓酸对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗的改善作用及机制。方法将126只雌性大鼠按随机数字表法分为空白组、PCOS组、茯苓酸低剂量组(8.33 mg/kg)、茯苓酸高剂量组(33.32 mg/kg)、炔雌醇环丙孕酮组(阳性对照组,0.34 mg/kg)、重组大鼠高迁移率族蛋白B1蛋白(rHMGB1)组(8μg/kg)和茯苓酸高剂量+rHMGB1组(33.32 mg/kg茯苓酸+8μg/kg rHMGB1),每组18只。除空白组外,其余各组大鼠均通过灌胃来曲唑混悬液的方式构建PCOS模型。建模成功后,每天给药1次,持续4周。给药结束后,检测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测大鼠血清中促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及卵巢组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,计算大鼠卵巢系数,观察大鼠卵巢组织病理变化,检测大鼠卵巢组织中HMGB1、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达情况。结果与空白组比较,PCOS组大鼠卵巢组织病理损伤严重,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数升高,血清中LH和T水平升高、FSH水平降低,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与PCOS组比较,茯苓酸低、高剂量组和炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢组织病理损伤减轻,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数降低,血清中LH和T水平降低、FSH水平升高,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);rHMGB1组大鼠对应指标的变化趋势与上述给药组相反(P<0.05)。与茯苓酸高剂量组比较,茯苓酸高剂量+rHMGB1组大鼠的上述指标变化均被显著逆转(P<0.05)。结论茯苓酸可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路改善PCOS大鼠胰岛素抵抗并抑制其炎症反应。

柱前衍生-气相色谱-质谱联用法同时测定茯苓中的可溶性糖与三萜酸

[目的]通过建立柱前衍生-气相色谱-质谱(GC-MS)法实现茯苓(Poria cocos)各成分的快速高效分离检测,为茯苓有效成分的分析提供新方法并为茯苓原料品质判断提供参考.[方法]采用超声辅助提取法,以反油酸为内标物,甲氧胺(MOX)和N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺[含1%(质量分数)三甲基氯硅烷](MSTFA+1%TMCS)为肟化-硅烷化衍生试剂,采用GC-MS同时检测茯苓中的果糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、茯苓酸、茯苓新酸A和茯苓新酸B.[结果]优化后的衍生条件为:200μL茯苓的甲醇提取液氮气吹干后,加入50μL MOX,于40℃反应2 h,然后加入250μL(MSTFA+1%TMCS),于40℃下反应30 min.衍生后的目标化合物在40 min内完成分离分析,线性关系良好,相关系数均在0.9935以上,该方法的定量限为0.008~1.000μg/mL,检测限为0.003~0.300μg/mL.茯苓样品加标回收率为82.0%~122.4%,相对标准偏差为1.05%~4.43%.[结论]本方法样品用量少,结果稳定且灵敏度高,可用于检测茯苓样品中可溶性糖和微量的三萜酸类化合物,同时也为检测其他样品中的三萜酸类化合物提供更多的选择.

不同干燥方式对茯苓药材中三萜类及茯苓酸含量的影响

采用不同干燥方式(自然晒干、60℃烘干、80℃烘干、105℃烘干、冻干)对茯苓(Poria cocos)鲜品进行干燥,测定干燥后的茯苓三萜类及茯苓酸含量,比较不同干燥方式对其三萜类及茯苓酸含量的影响。结果表明,茯苓三萜类及茯苓酸含量均为冻干>105℃烘干>80℃烘干>60℃烘干>自然晒干,冻干工艺下茯苓三萜及茯苓酸含量分别高达8.95%、6.89%,自然晒干下的茯苓三萜类及茯苓酸含量均最低。确定了茯苓药材的最佳干燥方式,为茯苓药材后期加工工艺的选用提供参考。

茯苓多糖组分对复合乳酸菌的冻干保护作用及机理

为探究茯苓多糖(Poria cocos polysaccharide,PCP)组分对复合乳酸菌冷冻干燥的保护效果,制备茯苓多糖纯化组分,并对其结构进行表征,研究其对复合乳酸菌冷冻干燥的保护效果及作用机理。结果表明,茯苓多糖经分离纯化后得到总糖含量为(96.21±0.39)%的PCP-1,PCP-1的重均分子质量为11732 Da;主要由葡萄糖和葡萄糖醛酸组成,其摩尔比为0.989∶0.011;PCP-1中存在羟基,同时含有α-糖苷键和β-糖苷键。在基础保护剂中添加PCP-1相较于添加PCP使复合乳酸菌的冻干存活率增加了11.29%。通过扫描电镜观察到添加PCP-1的乳酸菌粉表面更加致密;添加PCP-1后复合乳酸菌的Na^(+)-K^(+)-ATP酶和乳酸脱氢酶的活力比起添加PCP得到显著增强,分别增加了0.66、1.46 U/mg prot;经过碘化丙啶和二乙酸荧光素双重染色后观察到添加PCP-1的复合乳酸菌的细胞膜完整性得到更好的保持。PCP-1可能是通过羟基的存在形成氢键来降低复合乳酸菌的冻干损伤,提高复合乳酸菌的冻干存活率。

茯苓乳酸菌发酵粉的工艺优化研究

对茯苓乳酸菌发酵粉的生产工艺进行优化,得到茯苓乳酸菌发酵粉最优工艺参数为动物双歧杆菌乳亚种(RSQ19)、嗜酸乳杆菌(SSM11)和乳脂乳球菌(RSHN25)按1∶1∶1比例混合,并于(37±1)℃发酵44 h后,再加酵母发酵4 h达到发酵终点,进行干燥、包装。在该工艺条件下,茯苓乳酸菌发酵粉具有较好的风味与酸度,同时游离氨基酸、硫胺素、核黄素、叶酸等营养成分的含量也得到了较大的提升。本研究为开发乳酸菌发酵剂及优良乳酸菌发酵生物医药制品的开发奠定了基础。

茯苓中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的初步研究

目的 :建立茯苓中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的测试方法。方法 :利用RP HPLC、线性梯度洗脱筛选最佳测试条件 ,并应用LC/MS技术指认指纹图谱中的主要色谱峰。结果 :获得了较为理想的茯苓三萜酸类成分HPLC指纹图谱 ,其中 9个色谱峰被指认。结论 :用文中的最佳条件可较全面地反映茯苓中的三萜酸类成分 ,为茯苓药材的质量控制提供有效手段。

全国20个主要产地茯苓质量分析比较研究

目的建立茯苓多糖和茯苓酸的含量测定方法,分析比较全国20个主要产地茯苓中茯苓多糖和茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的质量品质提供依据。方法采用分光光度法测定茯苓多糖的含量,碱提,苯酚-浓硫酸显色,葡萄糖为对照品,检测波长490nm。采用RP-HPLC法测定茯苓酸的含量,Kromasil100-5C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸(80:20),流速1.0mL/min,检测波长242nm。结果葡萄糖在40～200μg/mL范围内线性良好,r=0.9999,平均回收率为99.72%,RSD=0.99%;茯苓酸在0.48～2.40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9997,平均回收率100.26%,RSD=1.26%。不同产地茯苓药材中茯苓多糖和茯苓酸的含量有较大差异,说明药材质量并不一致。结论该方法简便快速、准确可靠,为评价不同产地茯苓药材的质量提供了一种可靠的分析方法。

茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量比较研究

目的建立茯苓酸HPLC含量测定方法,比较茯苓与茯苓皮之间含量差异。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm)。流动相:乙腈-0.5%磷酸水(70∶30);流速为0.8mL.min-1检测波长:242 nm;柱温:30℃。结果茯苓酸在0.362～9.050μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率99.54%,RSD=1.01%。结论该方法稳定,可靠,简便,适于茯苓与茯苓皮药材质量评价。

茯苓皮中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的方法学研究

目的建立茯苓皮药材中三萜酸类成分的HPLC指纹图谱。方法采用HPLC法,以甲醇超声法提取样品,流动相:乙腈-0.5%磷酸水溶液(梯度洗脱);检测波长:242nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min。分析了10批不同产地的茯苓皮药材,采用计算机辅助相似性评价系统进行了评价,建立共有模式,计算10批样品的指纹图谱与其共有模式的相似度值。结果不同产地、不同批次的茯苓皮药材其成分含量存在较大差异。结论所建立的指纹图谱具有稳定、重现性好的特点,该研究将有助于茯苓皮药材的标准化种植、质量控制。

茯苓功效成分茯苓酸的研究进展

茯苓是重要的食药同源功能性食品原料,有利水渗湿、健脾宁心等临床功效。除多糖成分外,三萜类物质是茯苓中另一类重要功能性成分,其中的典型功效成分茯苓酸,属羊毛甾-8-烯型三萜,单一纯品为白色粉末,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、镇静催眠等作用。当前,随着人们对茯苓食药两用价值关注度的不断提升,作为主要药效物质的茯苓酸也得到了广泛而深入的研究。本文基于近20年来有关茯苓酸的相关文献,从茯苓酸的提取检测、药理活性、生物合成和茯苓的健康应用等方面对其研究进展进行全面系统的总结,旨在为茯苓酸在食品医药领域的基础和应用研究提供参考。

HPLC法同时测定茯苓中去氢茯苓酸和茯苓酸的含量

目的建立同时测定茯苓药材中去氢茯苓酸和茯苓酸含量的反相高效液相色谱法。方法采用HPLC法。色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,4μm),流动相为乙腈-质量分数为0.1%的磷酸溶液(体积比为75∶25),流速为1.0 mL.min-1,柱温为30℃,检测波长为210 nm。结果在上述色谱条件下去氢茯苓酸和茯苓酸能达到基线分离;去氢茯苓酸和茯苓酸分别在20.4～408.0 mg.L-1和14.4～288.0 mg.L-1内与色谱峰面积之间线性关系良好;二者的平均加样回收率分别为99.4%和100.0%,RSD(n=9)分别为2.2%和1.7%。结论HPLC法可作为茯苓质量控制的一个有效方法。

反相高效液相色谱法测定茯苓中茯苓酸的含量

目的建立茯苓中茯苓酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),HypersilODSC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,乙腈-0.5%磷酸(70∶30)为流动相,流速0.8mL/min,检测波长242nm。结果茯苓酸在0.362～9.050μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率99.54%,RSD=1.01%。3个产地茯苓中茯苓酸的含量依次为:湖北>云南>安徽。结论该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓药材的质量评价。

茯苓中集落刺激因子诱生剂的分离鉴定

目的：研究茯苓中能增强机体自身产生集落刺激因子的四环三萜酸类化合物。方法：采用真空柱层析方法、薄层制备等多种色谱方法进行分离，运用红外光谱、质谱、核磁共振氢谱、碳谱，氢－氢相关谱、碳－氢相关谱等方法鉴定化合物的结构。结果：从茯苓具有集落刺激因子诱生作用的组分中分离鉴定了两个四环三萜酸类成分，分别是猪苓酸Ｃ和茯苓酸。

不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究

目的建立茯苓中茯苓酸含量的测定方法,比较9个不同产地茯苓中茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据。方法采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Kromasil100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.4%乙酸(80:20),流速1.0mL/min,检测波长242nm。结果茯苓酸在0.48～2.40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9997,平均回收率99.96%,RSD=1.85%。9个产地茯苓中茯苓酸的含量有所差异。结论该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓药材中茯苓酸的含量测定。

不同产地及不同药用部位茯苓的比较研究

目的 :比较研究不同药用部位及不同产地茯苓中茯苓酸的含量。方法 :采用高效液相色谱法对不同药用部位和不同产地茯苓的茯苓酸进行含量测定。结果 :茯苓不同药用部位中 ,茯神中茯苓酸的含量为最高 ;不同产地的茯苓中 ,广西产茯苓的茯苓酸含量为最高。结论 :茯苓的不同药用部位中茯苓酸的含量差异较大 ,说明临床分部位入药具有一定的合理性 ;不同产地茯苓中茯苓酸的含量差别不大 ,其中以河南产茯苓含量略低 ,临床使用时不必区分产地。

茯苓酸性多糖分级提取及其抗肿瘤活性比较

目的：以不同碱度分级提取茯苓酸性多糖，进行抗肿瘤活性比较研究，以期探讨茯苓酸性多糖的构效关系。方法：将茯苓饮片分别用70％乙醇和水提取后的药渣，依次用0．1—1．0mol·L^-1 10个梯度氢氧化钠（NaOH）溶液分级提取，得到10种茯苓酸性多糖组分提取物；采用MTT法测定对HepG2肿瘤细胞抑制率，比较10种分级酸性多糖体外抗肿瘤活性大小。结果：0．9和1．0mol·L^-1 NaOH提取的茯苓酸性多糖对肿瘤细胞抑制率最高。结论：茯苓酸性多糖抗肿瘤活性与其酸性强弱相关。

茯苓总三萜的抗炎作用研究

目的研究茯苓总三萜对急、慢性炎症的抑制作用。方法采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿模型,观察茯苓总三萜的抗炎作用。结果茯苓总三萜(50、150、450 mg.kg-1)灌胃(ig)给药对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和冰醋酸引起的腹腔毛细血管渗出有明显的抑制作用;能明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿。结论茯苓总三萜具有良好的抗炎作用。

HPLC-ELSD法测定不同产地茯苓中茯苓酸的含量

目的:建立茯苓中茯苓酸的含量测定方法,比较12个不同产地茯苓中有效成分茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据。方法:采用反相高效液相色谱蒸发光散射法(HPLC-ELSD),Kromasil 100-5C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸(78:22),流速1.0ml·min^(-1),蒸发光检测器漂移管温度:40℃,压力:3.5bar。结果:茯苓酸在0.488～2.440μg范围内线性关系良好(r=0.999 8),回收率试验平均为100.05%,RSD=0.47%;12个不同产地茯苓中茯苓酸的含量差异较大。结论:该方法简便、稳定、专属、可靠性强,可用于比较不同产地茯苓有效成分茯苓酸的含量,能有效评价各地茯苓药材的质量。

茯苓多糖抗氧化作用研究

比较研究茯苓水溶性多糖、酸性多糖及其不同酸度多糖的抗氧化作用,为茯苓多糖开发应用提供科学依据。采用水和1 mol/LNa OH溶液分别提取得到茯苓水溶性多糖(PWP)及酸性多糖(PAP);取水提取茯苓水溶性多糖后的药渣,依次用0.1 mol/L^1.0 mol/L梯度Na OH溶液分级提取分离10种茯苓酸性多糖组分(PSAP1-PSAP10)。通过对多糖还原能力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率等指标的测定,比较PWP、PAP和10种PSAP1→PSAP10组分的抗氧化活性。研究结果表明,PWP和PAP具有抗氧化作用;PSAP1→PSAP10分级提取的10种多糖组分均具有不同程度的抗氧化作用,其中PSAP8和PSAP9抗氧化作用优于其他组分。综合分析,茯苓多糖具有良好的抗氧化作用,其酸性多糖的抗氧化作用与其酸性强弱相关。

HPLC法测定茯苓中茯苓酸的含量

目的:建立测定茯苓药材中茯苓酸含量的反相高效液相色谱法。方法:采用HPLC法。色谱柱为Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水溶液梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,检测波长为250nm。结果:茯苓酸进样浓度在50～3 000μg/mL之间有良好的线性关系。平均加样回收率为98.53%,RSD(n=6)为2.24%。结论:HPLC法可作为茯苓质量控制的一个有效方法。