基于网络药理学和分子对接技术探讨“桑白皮-茯苓皮-香加皮”治疗心力衰竭的作用机制

目的:基于网络药理学方法探讨“桑白皮-茯苓皮-香加皮”治疗心力衰竭(心衰)的作用机制。方法:利用中药系统药理学技术平台数据库(TCMSP)获取桑白皮、香加皮主要化学成分及作用靶点,利用PubChem数据库、SwissTarget Prediction数据库获取茯苓皮作用成分及靶点;基于利用UniProt数据库对获取的作用靶点进行规范化处理;通过GeneCards、OMIM、DisGeNET、TTD、DrugBank、HERB、MalaCards数据库获取心衰相关靶点;利用Venny 2.1.0绘图网站构建Venn图,得到“桑白皮-茯苓皮-香加皮”与心衰的交集靶点;应用STRING平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;通过Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,使用微生信网站绘制结果气泡图,相关结果采用Cytoscape 3.7.2软件进行可视化研究及网络拓扑结构分析。使用AutoDock Tools 1.5.6进行分子对接研究。结果:经过数据库分析共筛选出“桑白皮-茯苓皮-香加皮”活性成分62个,潜在作用靶点404个,其中涉及治疗心衰的靶点99个。通过GO功能富集分析得到1 639个生物进程条目、124条分子功能条目及57类细胞成分条目。通过KEGG通路富集分析得到175条与心衰相关的通路。分子对接结果显示槲皮素、山柰酚与核心靶点前列腺素内环氧化物合成酶2(PTGS2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素-1β(IL-1β)均有较强的氢键作用。结论:通过“中药-成分-疾病靶点-通路”网络显示,槲皮素、山柰酚、三萜类化合物是“桑白皮-茯苓皮-香加皮”治疗心衰的主要活性成分,其对应的核心靶点如PTGS2、IL-6、TNF、VEGFA、IL-1β等可能协同作用于脂质与动脉粥样硬化信号通路、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路及核转录因子κB(NF-κB)通路等治疗心衰。分子对接结果进一步验证了主要化合物与核心靶点的结合活性较好,为“桑白皮-茯苓皮-香加皮”通过多成分、多靶点和多通路发挥治疗心衰的作用提供了理论依据。

茯苓皮三萜类物质抗氧化活性研究

以茯苓皮三萜甲醇提取物为材料,熊果酸为对照,通过化学发光法和比色法评价其体外抗氧化活性。结果表明:茯苓皮三萜能有效清除超氧阴离子自由基(O-2)、羟自由基(.OH)和过氧化氢(H2O2),半数抑制率(IC50)分别为1.01、0.91、0.87mg/mL,且清除率与质量浓度存在剂量依赖关系;进一步体外抗氧化实验表明,茯苓皮三萜具有抑制家鸡红细胞溶血作用,对小鼠肝脂质过氧化产生的丙二醛(MDA)有较好的清除效果。

茯苓皮中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的方法学研究

目的建立茯苓皮药材中三萜酸类成分的HPLC指纹图谱。方法采用HPLC法,以甲醇超声法提取样品,流动相:乙腈-0.5%磷酸水溶液(梯度洗脱);检测波长:242nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min。分析了10批不同产地的茯苓皮药材,采用计算机辅助相似性评价系统进行了评价,建立共有模式,计算10批样品的指纹图谱与其共有模式的相似度值。结果不同产地、不同批次的茯苓皮药材其成分含量存在较大差异。结论所建立的指纹图谱具有稳定、重现性好的特点,该研究将有助于茯苓皮药材的标准化种植、质量控制。

不同加工方法对茯苓及茯苓皮中茯苓酸含量的影响

目的:考察不同加工方法对茯苓及茯苓皮中茯苓酸含量的影响。方法:采用高效液相色谱法测定各种不同茯苓加工品中茯苓酸的含量,采用Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相,流速:1.0 ml·min-1,检测波长:210 nm,柱温:30℃。结果:茯苓皮中茯苓酸的含量>茯苓,且经蒸制后两者的含量均明显降低,其中生切品>传统法蒸品>高压蒸品。结论:茯苓酸对热压不稳定,茯苓经过蒸制后,其含量降低。本研究可为茯苓饮片的规范化加工炮制和质量控制提供参考。

不同产地茯苓皮药材红外光谱的识别

采用红外光谱、二阶导数光谱和二维相关红外光谱对大别山地区和云南省两大道地主产区的茯苓皮进行鉴别分析。结果表明，不同产地茯苓皮的红外光谱都有1149，1079和1036 cm -1等表征糖类成分的特征吸收峰，其中大别山产区（湖北省、安徽省）的茯苓皮中1619，1315和780 cm -1等表征草酸钙的特征吸收峰比较显著，云南产区的茯苓皮中797，779，537和470 cm -1等表征硅酸盐的特征吸收峰更加明显。比较450～1650 cm-1波数范围内的二阶导数红外光谱可知，两个产区茯苓皮所含糖类物质有所不同。在二维相关红外光谱中，不同产地茯苓皮所含糖类物质的差异更加直观显著。红外光谱法直观、简单、方便、快速，可以作为鉴别不同产地茯苓皮，诠释产地与药效之间关联性的一种有效准确的新方法。

茯苓皮三萜抑制酪氨酸酶机理研究

为明确茯苓皮中天然的三萜化合物抑制酪氨酸酶的保健功效,增强茯苓皮在生产加工中的应用,提高其附加价值,采用体外生化酶学法研究茯苓皮三萜化合物对酪氨酸酶活性的抑制作用,初步探究茯苓皮三萜对酪氨酸酶的抑制的机理。结果表明氯仿萃取物对酪氨酸酶的抑制效果最好,氯仿是良好的萃取剂;茯苓皮三萜对酪氨酸酶的抑制属于不可逆抑制。

茯苓皮中茯苓多糖的提取工艺优化

目的利用响应表面实验设计优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法和工艺条件。方法利用单因素实验优化茯苓皮中茯苓多糖的提取方法,在单因素实验的基础上利用响应表面实验设计考察碱法提取过程中碱浓度、提取时间、料液比对多糖提取量的影响。结果茯苓皮中多糖的最佳提取方法为碱法提取,其提取条件可用回归方程Y=7.89+15.249X1-35.4X12+8.375X2-0.885X22+7.333X1X2描述。结论最佳提取方法为碱法,最佳提取工艺条件为:NaOH浓度0.84mol/L,时间8.89 h,料液比1∶150。

超临界CO2萃取茯苓皮中三萜类成分

以茯苓皮为原料,建立超临界CO2萃取茯苓皮中总三萜类化合物的最佳工艺条件。采用超临界CO2萃取技术和有机溶剂提取法对比。设计正交试验考察夹带剂（95%乙醇）用量、萃取压强、萃取温度和萃取时间对萃取率的影响。超临界萃取最佳工艺条件为夹带剂用量按每克茯苓皮2.0mL、压强35MPa、温度65℃、时间60min,总三萜化合物萃取率为2.06%;有机溶剂提取法得总三萜化合物萃取率1.39%。优选出的萃取工艺稳定可靠、简便易行,较有机溶剂提取法萃取率高出48.2%。

UPLC-代谢组学技术应用于茯苓皮与有氧运动对高脂血大鼠改善作用

目的基于UPLC-代谢组学技术研究茯苓皮结合有氧运动对高脂血症大鼠的影响。方法雄性SD大鼠,分为5组,每组8只。高脂饲料喂饲大鼠4周,同时进行4周的茯苓皮、有氧运动、茯苓皮结合有氧运动治疗。实验第1天和第2周末尾静脉取血,第4周后处死动物,采用UPLC-代谢组学方法推测高脂血症模型是否成功。比较血清TG、TC、HDL-C及LDL-C含量,同时测定血清CAT、GSH-Px、MDA和SOD的浓度。结果在4周时间,代谢组学和生化指标证明高脂血模型成功建立,不同时间段产生不同的损伤程度且明确了高脂血症模型的时间进展轨迹。生化指标显示茯苓皮和有氧运动均可显著降低大鼠血清TG、TC和LDL-C提高、HDL-C水平;茯苓皮结合有氧运动能显著升高大鼠血清GSH-Px、SOD、CAT水平,同时降低MDA的水平,脂质过氧化产物水平显著降低。结论(1)代谢组学结果显示高脂血症模型已成功建立;(2)茯苓皮结合有氧运动可治疗高脂血症大鼠血脂异常,并有较明显的抗脂质过氧化作用;(3)代谢组学可以作为有氧运动治疗疾病程度及效果的一个新的判断方法。

RP-HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的含量

目的:建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。方法:采用Dikma Dimonsal C18色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),以0·1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速:1·0mL·min-1,检测波长:243nm,柱温:25℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的含量。结果:测得茯苓酸A和3-表去氢土莫酸的线性范围分别为0·073～0·292g·L-1(r=0·9997)和0·027～0·135g·L-1(r=0·9999);加样回收率分别为102·63%和98·88%。结论:该法能快速、准确地测定茯苓皮中两个活性成分的含量,为茯苓皮的质量控制提供了一个较好的检测方法。

茯苓菌皮中茯苓多糖的提取工艺和结构分析

为探讨提取过程中时间、温度、碱浓度、浸提次数对茯苓皮中茯苓多糖提取量的影响,在提取单因素试验的基础上,利用正交设计优化茯苓皮中茯苓多糖的最佳浸提工艺条件。结果表明,水提法最佳工艺条件为时间30 min,温度60℃,浸提1次;超声波提取法最佳工艺条件为功率350W,时间30 min,水温60℃。水提、碱提和超声波提取3种方法中以0.8 mol·L-1 NaOH浸提的碱提法效果最好。用高效液相色谱仪对茯苓多糖浸提液进行结构分析,结果显示,其中主要含D-葡聚糖和D-木糖。

五苓散合五皮饮加味治疗糖尿病肾病水肿27例

目的:观察五苓散合五皮饮加味治疗糖尿病肾病水肿的临床疗效。方法:将54例2型糖尿病肾病水肿患者随机分为治疗组和对照组,每组27例。对照组给予常规西医对症治疗,治疗组在对照组的基础上加用五苓散合五皮饮加味治疗。结果:治疗组有效率为92.6%,对照组有效率为66.7%,治疗组明显优于对照组(P<0.05);治疗组治疗后体质量明显降低,水肿明显减轻,尿量明显增加,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后血尿素氮、肌酐、24h尿蛋白定量、血浆白蛋白、血尿酸水平均优于对照组(P<0.05)。结论:五苓散合五皮饮加味治疗糖尿病肾病水肿疗效显著。

利水中药泽泻、茯苓、茯苓皮、大腹皮、商陆对小鼠腹膜孔调控作用的实验研究

运用具有利水功效的泽泻、茯苓、茯苓皮、大腹皮、商陆(其中商陆实验失败)对健康小鼠腹膜孔调控作用的观察,经扫描电镜和计算机图像处理与定量分析,结果发现:泽泻组腹膜孔平均孔径、开放密度与对照组比较有显著性差异(P<0.01);茯苓、茯苓皮、大腹皮组与对照组比较,无显著性差异。表明泽泻对腹膜孔调控作用强,茯苓、茯苓皮、大腹皮调控作用不明显。提示了在利水中药中泽泻是治疗腹水的有效药物。

云南不同产地茯苓总三萜含量测定

采用香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定来自云南3个不同地区茯苓中的总三萜含量。结果表明,3个不同地区茯苓中总三萜平均含量为5.96 mg.g-1～9.26 mg.g-1,它们之间没有显著差异。茯苓皮中总三萜平均含量13.44 mg.g-1,显著高于茯苓肉3.37 mg.g-1,并且新鲜茯苓样品中总三萜含量低于干燥样品。

茯苓皮中茯苓聚糖的含量测定及提取工艺优选

目的 :优选茯苓皮中茯苓聚糖的提取工艺 ,测定不同产地茯苓皮中茯苓聚糖的含量。方法 :对来自不同产地的十二个样品进行测定 ,采用苯酚—硫酸法 ,测定茯苓聚糖吸光度。结果 :最佳提取工艺为石油醚提取 2h ,80 %乙醇提取 2h ,碱用量为5 0ml。结论

茯苓皮总三萜物质的提取工艺研究

目的优选茯苓皮总三萜的最佳提取工艺。方法采用紫外分光光度法测定总三萜物质的含量,以茯苓皮总三萜的提取率为指标,正交优选最佳提取工艺。结果茯苓皮总三萜最佳提取工艺为6倍量、90%乙醇提取2次、每次1h。结论该工艺操作简单、稳定、可行,具有良好的应用前景。

茯苓皮中总三萜超声波辅助提取工艺优化

为探讨茯苓[Poria cocos(Schw.)Wolf]皮中总三萜的超声波辅助提取工艺,考察了液固比、超声波功率、提取时间、提取温度和茯苓皮干粉粒度对茯苓皮总三萜提取率的影响,并对部分工艺参数采用正交试验设计进行优化。结果表明,以50%乙醇为提取溶剂、超声波功率500 W、液固比15∶1(V/m,mL∶g)、干粉粒度0.150 mm、提取温度50℃、提取时间20 min为最优提取参数组合,验证试验的提取率为2.6%,正交试验的优化结果可信。

超临界CO2萃取茯苓皮中三萜类化合物的分离纯化、鉴定

对茯苓皮中三萜化合物进行分离纯化及结构鉴定，采用超临界CO2法提取茯苓皮中的三萜化合物，通过溶剂萃取、柱层析色谱等现代分离分析手段对提取物进行分离纯化：采用紫外吸收光谱（UV）、红外吸收光谱（IR）、液质联用（LC-MS）技术对提取纯化物进行了结构解析，初步鉴定出16种茯苓三萜类化合物。

基于PLC的茯苓自动去皮机控制系统设计

针对传统茯苓去皮人工劳动强度大、成本高、过程复杂导致去皮效率较低等问题,设计研发基于PLC的茯苓自动去皮机控制系统,完成控制系统的总体设计方案。该设备使用DOP-B07SS441触摸屏进行人机交互界面设计,灵活分配PLC控制系统的I/O地址并对系统的主要软硬件进行分析。以响应速度、运行平稳性、去皮工作效率以及损失率作为评价指标进行试验验证。结果表明:基于PLC的茯苓自动去皮机控制系统响应速度快、运行平稳,误差保持在0.03 s内,去皮损失率为9.92%,满足产地去皮加工要求;与人工去皮相比,简化去皮工序,去皮工作效率提升31.2%。本研究对促进茯苓去皮机智能化发展、提高茯苓去皮工作效率具有重要意义,具有较大的推广应用价值。

茯苓皮水提物对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的改善作用

目的:研究茯苓皮水提物(PWE)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的改善作用。方法:将84只大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、模型对照组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片,0.75 g/kg)和PWE低、中、高剂量组(0.9、1.8、3.6 g/kg,以生药计),每组12只。除空白对照组与溶剂对照组(ip植物油)外,其余各组大鼠均ip CCl_4-植物油溶液复制肝纤维化模型。造模成功后,各给药组大鼠ig相应药物,其余3组大鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续4周。给药结束后,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、羟脯氨酸(Hyp)和肝组织中还原性谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量,苏木精-伊红染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理变化。结果:与空白对照组比较,溶剂对照组大鼠各指标均无明显变化(P>0.05);模型对照组大鼠血清中AST、ALT、LN、HA、Hyp含量和肝组织中MDA含量显著升高(P<0.05),肝组织中GSH、SOD含量显著降低(P<0.05),且肝组织发生明显纤维化病变。与模型对照组比较,PWE中、高剂量组大鼠血清中AST、ALT、LN、HA、Hyp含量和肝组织中MDA含量显著降低(P<0.05),肝组织中GSH、SOD含量显著升高(P<0.05),肝组织纤维化程度明显减轻。结论:PWE对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化具有良好的改善作用,其机制可能与抑制机体脂质过氧化有关。