养殖三疣梭子蟹体内哈维氏弧菌的分离与致病性鉴定

养殖的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)秋、冬季常发生非典型症状的死亡.本研究取濒死的三疣梭子蟹内脏及体腔液进行细菌分离,经纯化传代获得1株优势菌HY.HY菌的革兰氏染色呈阴性,菌体呈杆状、弧形或逗点状,无荚膜,无芽孢,极生单鞭毛,运动性强.生长特性和生化试验表明该菌生长需盐,最适生长的NaCl含量为30 mg/cm3;28℃下生长旺盛,能利用葡萄糖产酸但不产气,可以利用麦芽糖、蔗糖等糖类.测定了HY菌约930bp的16S rDNA序列,分类进化树显示其与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)XC08001聚为一簇.综合形态、生化和16S rDNA序列分析结果确定HY菌为哈维氏弧菌.以2×106cfu/只(蟹)的HY菌悬液注射健康梭子蟹成蟹(平均体重为400±25 g/只),致死率为35%;菌液浸泡感染梭子蟹仔蟹的半数致死剂量(LC50)为8.25×105cfu/cm3.上述结果表明分离的哈维氏弧菌对三疣梭子蟹具有致病性.

三疣梭子蟹抗乳化病相关基因的初步研究

在梭子蟹疾病高发季节,从宁波市梅山岛养殖场分别采集了三疣梭子蟹幼蟹得乳化病即将死亡个体10只和健康个体8只,用RAPD技术对此18个个体的进行了检测。从20个随机引物中筛选出6个,对每只梭子蟹的DNA进行扩增。结果表明,每个引物扩增出2～8条清晰可辨且重复性强的条带,并在引物S96对2组蟹的检测结果中,从得病组里得到了1条分子量在847bp左右的特异性条带,进而推测此条带应与抗乳化病能力的强弱有关。

低盐胁迫下三疣梭子蟹γ-氨基丁酸及其A型受体相关蛋白对渗透压调节的影响

为探究低盐胁迫下γ-氨基丁酸(GABA)及其A型受体相关蛋白(GABARAP)在三疣梭子蟹渗透压调节过程中起到的作用,实验检测了低盐度10条件下,三疣梭子蟹在0, 3, 6, 9, 12, 24, 36,48 h的血清渗透压、血清氯离子(Cl-)浓度等指标,同时对鳃组织的GABA量以及GABARAP基因表达量变化进行测定.结果显示,血清渗透压和血清Cl-浓度在12 h内显著下降(P<0.05), 12 h后趋于稳定;相对0 h,血清Cl-浓度降低17.93%,血清渗透压降低24.46%,与外界海水渗透压的差值维持在(183.21±9.51)mOsm·kg^(-1). GABA量及GABARAP基因表达量波动上升, 12 h后基本维持稳定.研究结果表明,三疣梭子蟹对低盐度条件的适应性调节在12 h内进行,之后基本维持稳定,GABA量以及GABARAP基因表达量在此过程中呈现显著的正相关关系,对血清Cl-浓度的调节起到了重要作用,使得12 h后血清渗透压与外界海水渗透压维持在(183.21±9.51)mOsm·kg^(-1),保证各项生理活动的正常进行.