酵母发酵虎杖提取白藜芦醇技术初步研究

对酵母发酵虎杖(Polygonum cuspidatum)提取白藜芦醇的原料预处理方式、发酵工艺及提取方法等进行初步研究。结果表明,酵母固态厌氧发酵能有效地提高虎杖白藜芦醇的提取得率,适量添加纤维素酶和木聚糖酶能在一定程度上提高虎杖白藜芦醇得率。较佳的虎杖生物发酵提取白藜芦醇的工艺条件为:虎杖原料粉碎过10目筛,发酵体系含水的质量分数为65%,添加糖化酶Ⅱ和SADY酵母的量分别占虎杖原料质量的0.18%和0.34%,厌氧发酵5 d,发酵后采用体积分数为95%的乙醇水溶液提取。

虎杖中大黄素的超声波提取工艺优化

虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)含有多种生物活性成分,具有独特的药理功效。其中的大黄素具有抗菌、止咳、抗肿瘤、降压等作用,且含量较高,故常利用虎杖根提取大黄素。研究通过单因素和正交试验优化了虎杖大黄素的超声波提取工艺,最佳提取工艺为80%(乙醇+丙酮)、1∶20(g∶m L)料液比、超声提取30 min、提取温度为70℃,测定虎杖药材中大黄素的得率为1.40%。

种植密度对虎杖种苗生长发育的影响

分析不同种植密度对一年生虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)幼苗生长发育的影响及二年生苗在5 cm×5 cm种植密度下的生长发育情况。结果表明,不同种植密度对一年生虎杖幼苗茎粗有影响,对茎分枝数无显著影响。二年生虎杖种苗在5 cm×5 cm的种植密度下根系多、主根长、地上茎高、芽头数多,且茎粗≥(0.74±0.15)mm,芽头≥2个。这可能是虎杖种子种苗在生长过程中,种植密度、年限与虎杖种苗地下根茎长度、茎粗生长呈正相关,需要进一步深入研究。

2002—2022年国内外虎杖研究态势的文献计量分析

虎杖是国内外广泛分布的重要中草药和工业原料植物,准确把握其研究现状和发展态势对虎杖种植和利用有重要指导意义。该研究以2002—2022年CNKI中文期刊数据库、Web of Science核心数据库检索文献为基础数据,应用CiteSpace和VOSviewer软件系统分析了虎杖研究现状、动态和前沿热点。2002年以来国内外对虎杖研究关注程度总体呈上升趋势,影响力最大的研究机构为中国科学院、中国农业科学院、四川大学等。从国际范围看,中国是虎杖研究合作影响力最高国家,发文量占全球的44.8%。国内外虎杖研究热点主题分别形成17个聚类,国内热点包括其药用价值、生长特性、离体培养,白藜芦醇、虎杖苷、大黄素、绿原酸、总蒽醌等功能成分提取、药效和利用等。国际热点包括蒽醌类、白藜芦醇等功能成分提取分析及其抗氧化、抑制细胞增生等医药健康用途、新活性物质鉴定、作用分子机理、合成生物学、能源和农药利用、生物入侵和生物控制等。研究确证了中国研究单位和研究者的优势和影响力,为深化虎杖研究提供了方向指导。

虎杖PcPKS1基因RNAi载体的构建

虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKS1的功能,分别选取Pc PKS1基因的编码区保守序列(574 bp)和3′端非编码区特异序列(209 bp)作为干扰片段。将选定的干扰片段,分别以正向和反向插入到p YLRNAi载体中GUS基因内含子的两侧,以形成hp RNA表达盒,成功构建了以组成型Ca MV35S为启动子,以潮霉素抗性为筛选标记的RNA干扰表达载体p YLRNAi-CDS和p YLRNAi-UTR,并将载体导入农杆菌LBA4404中。

虎杖种子大田育苗技术研究

结合湖北省房县虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc)种植发展情况和问题,从贮种、选地整地、播种、田间管理、病虫害防治、采挖等各个生产环节介绍了虎杖种子大田育苗技术。

虎杖基因PcMYB1真核表达载体构建及遗传转化

在虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)叶片中获得了1个R2R3-MYB转录因子基因,命名为PcMYB1。推测其在苯丙烷代谢中起负调控作用。为了探索PcMYB1的的功能,构建了PcMYB1基因的真核过量表达载体,通过农杆菌介导,利用花絮浸染法转化拟南芥,转化效率为0.11%。经潮霉素筛选和PCR鉴定,结果表明PcMYB1成功转入拟南芥中。

虎杖PcMYB1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测虎杖(Polygonum cuspidatum)转录因子PcMYB1基因表达的方法,将PcMYB1基因的ORF片段亚克隆于pUC19载体,得到重组质粒pUC19-PcMYB1,再以pUC19-PcMYB1作为标准样品,建立目的基因的标准曲线,优化qRT-PCR反应体系与反应条件,分析qRT-PCR的灵敏度。结果表明,在qRT-PCR体系中,退火温度为54.1℃时检测结果最好;构建的目的基因标准曲线,其循环阈值与模板拷贝数对数值呈良好的线性关系,扩增效率为92.3%;该方法最低可检测101copies/μL的目的基因。

虎杖对人外周血单个核细胞炎症因子基因表达的影响

目的:观察虎杖提取物对人外周血单个核细胞炎症因子基因的影响,以期阐明虎杖提取物抗痛风性关节炎的作用机制。方法:分离与培养人外周血单个核细胞,台盼蓝测细胞活力为95%以上,RT-PCR检测人外周血单个核细胞IL-1βmRNA、IL-8mRNA的表达。结果:虎杖提取物1000mg/L,100mg/L组IL-1βmRNA和IL-8 mRNA表达与空白对照组比较有显著性差异(P﹤0.01)。地塞米松磷酸钠组表达与空白对照组比较有显著性差异(P﹤0.01)。结论:虎杖提取物能抑制人外周血单核细胞炎症因子基因的表达,可能是其治疗急性痛风性关节炎的作用机制之一。

虎杖酶解液中白藜芦醇萃取工艺初步研究

为了对虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)酶解液中白藜芦醇的萃取工艺进行研究,以白藜芦醇的含量和萃取率为考察指标,筛选虎杖酶解液中白藜芦醇的萃取溶剂,对pH值、液-液比、萃取次数进行考察,采用正交试验优化白藜芦醇的萃取工艺。结果得出,在pH值为6、液-液比为1∶3、萃取3次,白藜芦醇得率达到90.54%。该优化工艺适用于虎杖酶解液中白藜芦醇的萃取。

响应面法优化虎杖中防晒成分微波辅助提取工艺

防晒产物是日化美容业的研究热点之一。本研究以虎杖中防晒成分的权重紫外吸光度值为指标,设计单因素实验,分别考察了乙醇浓度、提取时间、微波功率和料液比对虎杖中防晒成分提取效果的影响。在此基础上,采用响应面法优化了虎杖中防晒成分的微波辅助提取工艺。结果表明,虎杖中防晒成分微波辅助提取最佳工艺条件为以59%乙醇为提取剂,在微波功率455 W,料液比1∶69(g/mL)的条件下,提取80 s,在该工艺条件下,虎杖中防晒成分的加权吸光度为0.659。虎杖中含有防晒成分,具有较强的广谱防晒能力。本研究以虎杖中防晒成分的紫外加权吸光度值为指标,采用响应面法优化虎杖中防晒成分微波辅助提取工艺,为虎杖防晒成分的开发利用提供理论依据和实验支持。