小鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小鼠背神经上皮和背根神经节中的表达

KCTD10蛋白是一个TNF-α诱导表达的蛋白,能与DNA聚合酶δ的小亚基和PCNA相互作用。但其具体功能尚不清楚。为了研究KCTD10的功能,用小鼠KCTD10融合蛋白免疫新西兰大白兔获得兔抗鼠KCTD10多克隆抗体。由于小鼠KCTD10蛋白与小鼠PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白有较高的蛋白序列相似性,KCTD10抗体同PDIP1蛋白、TNFAIP1蛋白有抗体交叉反应。将同源蛋白PDIP1和TNFAIP1的部分降解片段与抗KCTD10血清在4℃下孵育3h从而消除非特异性抗体,成功地消除了KCTD10多克隆抗体对PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白的交叉反应。用此抗体做小鼠胚胎及胚胎切片的免疫组化,发现KCTD10蛋白在E12.5d的小鼠胚胎背根神经节以及神经管神经上皮中有明显的表达。该结果提示KCTD10可能在小鼠的神经管神经上皮和背根神经节发育中发挥作用。

KCTD-12抑制胃间质瘤细胞体外增殖、侵袭的实验研究

目的:研究过表达钾通道四聚化结构域-12蛋白(KCTD-12)对胃间质瘤细胞体外增殖、侵袭的影响。方法:培养胃间质瘤细胞株GIST-T1并随机分为KCTD-12过表达组和NC过表达组,分别转染KCTD-12过表达质粒及阴性对照质粒。转染后24小时,检测细胞中增殖基因、凋亡基因、PI3K及p38MAPK信号通路分子、侵袭基因的表达量。结果:KCTD-12过表达组细胞中Ki-67、SCIN、Bcl-2、pPI3K、p-AKT、p-p38MAPK、CD146、PAR-2、SDF-1、CXCR4的表达量显著低于NC过表达组,Bax、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、p-FOXO1的表达量显著高于NC过表达组。结论:KCTD-12能够抑制胃间质瘤细胞的体外增殖、侵袭。

KCTD11对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及分子机制

目的探讨含钾通道四聚结构域蛋白11(KCTD11)对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及分子机制。方法利用数据库比较KCTD11在宫颈癌组织及正常组织中的表达,并分析KCTD11表达与宫颈癌级别的关系。利用短发夹RNA载体构建技术,敲低KCTD11的表达,并利用MTT试验、流式细胞术检测KCTD11敲低对HeLa细胞增殖的影响。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测下调KCTD11对细胞周期蛋白mRNA及蛋白水平的影响。同时,利用染色质免疫沉淀技术(ChIP)对其分子机制进行分析。结果KCTD11在宫颈癌组织中的表达水平显著高于其在正常组织中的表达水平(P<0.05)。生长曲线及细胞周期分析结果表明,敲低KCTD11后,细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),细胞增殖速率降低(P<0.001)。并导致细胞周期相关蛋白(Myc、CDK2、CDK4、CDK6、CCND3及CCNE2)的mRNA及蛋白水平均下调(P<0.001)。数据库分析结果表明,多个细胞周期蛋白的表达与KCTD11的表达呈正相关。而ChIP分析结果表明,KCTD11能够结合到原癌基因Myc启动子上。结论KCTD11能够通过转录激活原癌基因Myc的表达,上调细胞周期相关蛋白的表达,从而促进宫颈癌细胞的增殖。

含钾通道四聚化结构域15基因多态性与冠心病的关系及意义

目的探讨含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs11084753与冠心病的遗传易感性的关系。方法确诊的冠心病患者426例(男216例,女210例)为病例组,非冠心病患者及正常体检者436例(男224例,女212例)作为对照组,利用聚合酶链式反应(PCR)分析技术及DNA直接测序技术,对2组EDTA抗凝血KCTD15基因rs11084753(A/G)多态位点进行分型,按该位点等位基因A和G的出现情况将基因型分为AA、AG、GG三种类型。采用因素回归分析统计该多态位点与冠心病易感性的关系。检测所有研究对象的血脂水平。结果病例组血脂指标中TC、TG、LDL-C与对照组比较明显升高,而HDL-C则明显低于对照组;病例组患者吸烟、饮酒及阳性家族史的比例均高于对照组(P均<0.05)。AA、AG、GG基因型在病例组中的分布频率分别为52.4%、32.6%和15.0%,在对照组中分别是76.1%、18.4%和5.5%,2组基因型频率分布差异有统计学意义(χ2=8.174,P=0.0098)。多因素分析显示,携带rs11084753(A/G)多态位点G变异等位基因与冠心病的遗传易感性有明显相关关系(OR=5.94,95%CI=3.02～22.31,P<0.01)。结论 KCTD15基因rs11084753(A/G)多态位点与河北地区汉族人冠心病遗传易感有关。

钾通道四聚结构域17在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的:利用生物信息学分析钾通道四聚结构域17(KCTD17)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及临床意义,并探究相关机制。方法:结合癌症基因图谱数据库,分析KCTD17在ccRCC肿瘤和癌旁组织中转录水平差异及其与临床病理特征相关性。通过Kaplan-Meier和Cox回归分析KCTD17表达与ccRCC总体生存期和无进展生存期的临床关系。利用通路分析KCTD17在ccRCC中参与的机制。CIBERSORT数据库分析KCTD17表达与免疫细胞浸润及免疫检查点基因的相关性。结果:KCTD17在ccRCC癌组织中表达升高(癌比癌旁组织为3.08±0.89比2.49±0.87,t=4.034,P<0.001),其表达与临床分期(Ⅲ期比Ⅰ期为3.220±0.888比2.998±0.897,t=2.298,P=0.01,Ⅲ期比Ⅱ期为3.220±0.888比2.724±1.348,t=2.539,P<0.05,Ⅳ期比Ⅰ期为3.402±0.832比2.998±0.897,t=3.755,P=0.001,Ⅳ期比Ⅱ期为3.402±0.832比2.724±1.348,t=3.371,P<0.01)、分级(G4比G1为3.678±0.67比3.237±0.454,t=3.058,P=0.007;G4比G2为3.678±0.67比2.922±0.943,t=7.572,P<0.001;G4比G3为3.678±0.67比3.102±0.920,t=5.716,P<0.001)、肿瘤分期(T3期比T1期为3.283±0.857比3.008±0.896,t=3.271,P<0.001;T3期比T2期为3.283±0.857比2.767±1.264,t=3.127,P<0.01;T4期比T1期为3.925±0.997比3.008±0.896,t=2.865,P<0.05;T4期比T2期为3.925±0.997比2.767±1.264,t=3.308,P<0.01)、淋巴结转移(转移比非转移为4.018±0.593比3.054±1.027,t=5.777,P<0.001)和远处转移(转移比非转移为3.375±0.791比3.027±0.979,t=3.408,P<0.01)显著正相关。KCTD17高表达患者总体生存率(P<0.01)和无进展生存率(P<0.001)均低于低表达患者,且KCTD17是ccRCC患者总体生存期[风险比(HR):1.408,95%可信区间(CI):1.162~1.705,P<0.001]和无进展生存期(HR:1.609,95%CI:1.308~1.980,P<0.001)的独立预测因素。通路分析显示KCTD17可能通过上皮间质转化(P<0.001)、凝血(P<0.001)、缺氧(P<0.001)、补体(P<0.001)、白细胞介素(IL)-6/酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号(P<0.005)及脂肪酸代谢(P<0.05)及肿瘤免疫微环境相关通路[免疫反应调节(P<0.001)、淋巴细胞活化正向调节(P<0.001)、B细胞受体信号调节(P<0.001)、免疫效应过程调节(P<0.001)、补体激活调节(P<0.001)、经典补体激活途径(P<0.001)和免疫球蛋白受体结合(P<0.001)]参与ccRCC发生发展及导致不良预后。KCTD17高表达组的浆细胞(高表达组比低表达组为0.029±0.020比0.026±0.025,t=1.702,P<0.05)、CD8 T细胞(高表达组比低表达组为0.116±0.102比0.085±0.082,t=3.806,P<0.001)、休眠记忆CD4 T细胞(高表达组比低表达组为0.079±0.059比0.063±0.048,t=3.357,P=0.001)、激活记忆CD4 T细胞(高表达组比低表达组为0.006±0.002比0.004±0.003,t=9.023,P<0.001)、滤泡辅助性T细胞(高表达组比低表达组为0.019±0.014比0.015±0.013,t=3.409,P<0.001)、调节性T细胞(高表达组比低表达组为0.012±0.010比0.009±0.006,t=4.191,P<0.001)、休眠NK细胞(高表达组比低表达组为0.013±0.004比0.010±0.002,t=10.930,P<0.05)、激活NK细胞(高表达组比低表达组为0.033±0.025比0.027±0.020,t=2.732,P<0.05)、M0巨噬细胞(高表达组比低表达组为0.023±0.012比0.016±0.010,t=7.297,P<0.001)、M1巨噬细胞(高表达组比低表达组为0.040±0.029比0.030±0.022,t=4.742,P<0.001)、M2巨噬细胞的浸润(高表达组比低表达组为0.207±0.100比0.155±0.082,t=6.542,P<0.001)丰度升高。KCTD17表达水平与常见免疫检查点基因PD1[相关系数(cor)=0.404,P<0.001]、TIGIT(cor=0.403,P<0.001)、CTLA4(cor=0.398,P<0.001)、LAG3(cor=0.397,P<0.001)、MIF(cor=0.169,P<0.001)显著正相关。结论:KCTD17在ccRCC中高表达并提示预后不佳,可能与肿瘤微环境免疫抑制相关。

钾通道四聚化结构域5对胰腺癌细胞恶性生物学行为的研究

目的探讨钾通道四聚化结构域5(KCTD5)对胰腺癌细胞的生物学行为的影响。方法生物信息学检测KCTD5在胰腺癌中184例mRNA及211例蛋白质中的表达水平,观察KCTD5的表达对胰腺癌患者预后的影响,进一步对数据库中所得数据进行单因素Cox回归分析。定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹法检测KCTD5在胰腺癌细胞株中的表达水平。转染KCTD5小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中,分为si-NC、si-KCTD5-1、si-KCTD5-2组。细胞计数实验(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。结果生物信息学结果表明KCTD5在胰腺癌中的mRNA及蛋白表达水平显著高于正常组织;单因素分析及生存分析结果表明KCTD5可作为胰腺癌患者一种独立危险因素;qPCR结果表明KCTD5在正常人胰腺导管上皮细胞HPDE中的表达水平为1.10±0.18,在胰腺癌细胞株中的表达水平分别为SW1990(2.44±0.19)、PANC-1(1.65±0.15)、ASPC-1(2.15±0.12),KCTD5在胰腺癌细胞株中的表达水平明显升高(t=12.84,5.76,12.16,P均<0.05);转染后,CCK-8实验表明72 h后si-KCTD5-1、si-KCTD5-2、si-KCTD5-3组吸光度值分别为2.93±0.88、1.76±0.97、3.03±0.99,明显低于对照组(4.20±1.02,t=2.31、4.25、2.02,P均<0.05);降低KCTD5表达后Transwell实验中胰腺癌细胞的迁移能力和侵袭能力明显降低。结论胰腺癌中表达升高的KCTD5可促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低其表达后胰腺癌细胞上述能力降低。

KCTD15基因在肥胖人群脂肪组织中的表达及其临床意义

目的探讨含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因在人群脂肪组织中表达水平与临床指标的相关性,分析KCTD15的潜在作用及机制。方法收集2022年6-9月陆军军医大学第二附属医院骨科及普通外科39例手术患者的脂肪组织,根据体质指数(BMI)将受试者分为超重肥胖组(n=22)和正常体重组(n=17)两组。采用RT-PCR法测定两组共39例患者脂肪组织中KCTD15 mRNA表达,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的A值作为内参照,计算KCTD15/GAPDH的相对表达量,分析KCTD15表达量与临床指标的相关性。结果超重肥胖组BMI、腰围、收缩压、舒张压、肌酐均高于正常体重组(t=13.059、9.781、2.185、2.323、2.148),血清钾离子浓度明显低于正常体重组(t=-4.582),差异均有统计学意义(P均<0.05);超重肥胖组脂肪组织中KCTD15 mRNA水平明显低于正常体重组,差异有统计学意义(P<0.01)。KCTD15 mRNA水平与BMI、腰围、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、直接胆红素成负相关(r=-0.417、-0.468、-0.398、-0.396、-0.420,P均<0.05),与血清钾离子浓度成正相关(r=0.401,P<0.05)。结论脂肪组织中的KCTD15 mRNA的表达量与BMI、腰围、胆红素成负相关,与血清钾离子成正相关,提示KCTD15基因可能在肥胖的病理生理机制中发挥一定作用。

黑素皮质素受体4和含钾通道四聚化结构域15基因变异与2型糖尿病及其相关性状的关联分析

目的 评价中国汉族人群黑素皮质素受体4（MC4R）基因和含钾通道四聚化结构域15（KCTD15）基因单核苷酸多态性（SNP）位点rs17782313和rs11084753与2型糖尿病、肥胖及其相关性状的关系.方法 研究对象来自北京居住的社区人群和北京大学人民医院门诊患者,2型糖尿病患者1177例（男性504例,女性673例）,非糖尿病正常对照1113名（男316名,女797名）.从正常对照人群中选择体质指数（BMI） ≥28.0 kg/m2归为肥胖组（210名）,BMI为18.5 ～ 23.9 kg/m2者归为体重正常组（389名）.采用飞行时间质谱分析法对rs17782313及rs11084753进行基因分型.各组间率的比较采用卡方检验.结果 调整年龄、性别和BMI后,在隐性、显性及相加遗传模式下,MC4R-rs17782313和KCTD-rs11084753与2型糖尿病均无相关性（均P＞0.05）.调整性别和年龄后,rs17782313在显性遗传模式下基因型与肥胖的发病相关,OR值为1.43（95％ CI 1.01 ～2.02）,P=0.042,而在相加模式和隐性模式下均未发现基因型与肥胖相关.rs11084753在三种遗传模式下与肥胖的发病均无相关性（均P ＞0.05）.正常糖耐量人群中,rs17782313和rs11084753三种基因型间年龄、BMI、腰臀比、空腹血糖、口服糖耐量试验2h血糖和空腹胰岛素差异均无统计学意义（均P＞0.05）.结论 中国汉族人群中,MC4R基因SNP位点rs17782313和KCTD15基因SNP位点rs11084753与2型糖尿病无相关性,MC4R基因SNP位点rs17782313可能与中国汉族人群肥胖相关.

抗GABABR抗体和抗KCTD16抗体双阳性自身免疫性脑炎(附1例报告及文献复习)

目的提高和拓展对抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)抗体和抗钾离子通道四聚体结构域蛋白16(KCTD16)抗体双阳性自身免疫性脑炎的认识。方法收集1例抗GABABR抗体和抗KCTD16抗体双阳性的自身免疫性脑炎患者的临床资料,总结诊断、治疗经过等临床特点,结合文献复习进行分析和讨论。结果患者男性,50岁,亚急性起病,表现为精神行为异常、记忆障碍和癫痫发作。脑脊液蛋白增高(1.10g·L^-1),细胞数正常,血清和脑脊液抗GABABR抗体阳性。头颅磁共振检查示双侧海马信号增高。诊断为抗GABABR脑炎。对糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白、血浆置换治疗反应良好,但经历多次复发。随访过程中,患者血清中检测到抗KCTD16抗体阳性。发病1年后,患者全身正电子发射计算机断层显像示右肺近肺门软组织结节,远端阻塞性炎症,氟代脱氧葡萄糖代谢异常增高,行肺结节穿刺未见异形细胞,支气管镜未见出血及新生物。后续随访患者肺部结节进一步增大,最终病理活检证明为小细胞肺癌。结论抗KCTD16抗体可存在于抗GABAbR脑炎患者中,且与小细胞肺癌密切相关。