白花前胡甲素对豚鼠心室肌单细胞迟发性外向钾电流的影响

用全细胞膜片钳制方法观察了中药白花前胡有效成分白花前胡甲素（Ｐｄ一Ｉａ）对豚鼠·Ｃ室肌单细胞迟发性外向钾电流（Ｉｋ）的影响。Ｐｄ一Ｉａ以剂量依赖的方式增加Ｉｋ，其阈浓度接近ｌｎｍｏｌ·Ｌ－１，ＥＣ５０约０．２μｍｏｌ·Ｌ－１，最大效应浓度约１μｍｏｌ·Ｌ－１增加Ｉｋ２．５±０．５倍（Ｐ＜０．０１），Ｐｄ一１３的此种作用通过冲洗可部分消退。从电流一电压关系可知：人的激活电压接近４０ｍＶ，ｌｐｍｏｌ·Ｌ－１ｐｄ一Ｉａ使Ｖ１／２最大左移７ｍＶ，曲线的斜率改变－０．６５ｍＶ，经比较无统计学意义，提示Ｐｄ一Ｉａ对Ｉｋ的激活动力学过程无明显影响。以上结果表明，Ｐｄ一Ｉａ能促进Ｋ＋通道开放。

线粒体ATP敏感钾通道开放剂对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪（DE）对肺缺血-再灌注损伤（L／R）的保护作用。方法建立大鼠肺I／R模型，随机设立假手术（sham）组、I／R组、DE组、线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基葵酸（5-HD）组，每组10只，观察各组肺组织病理形态学变化，测定肺湿／干质量比，检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与sham组比较，I／R组肺组织出现明显损伤性病理形态学变化，肺湿／干质量比明显增加（P〈0．05），肺组织MPO活性显著增高、MDA含量显著增加和SOD活性显著降低（P〈0．05）。与I／R组比较，DE组肺组织损伤明显减轻，肺湿／干质量比降低（P〈0．05），肺组织MPO活性降低、MDA含量减少、SOD活性增高（P〈0．05）。5-HD组各观察指标与I／R组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论线粒体ATP敏感钾通道开放剂DE可通过抑制中性粒细胞聚集、减少自由基产生、增强抗氧化能力对大鼠肺缺血-再灌注损伤产生明显保护作用，该保护作用可被线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-HD所拮抗。

水杨酸钠与细胞外钾离子对豚鼠单离外毛细胞外向钾电流和静息电位的影响

摘要:目的探讨单独使用水杨酸钠或在细胞外液中先加入氯化钾再加入水杨酸钠后,豚鼠单离外毛细胞(OHC)钾电流(IK)和静息电位(RP)的变化,分析水杨酸钠和K+对OHC生理功能影响的特点及其相互关系。方法应用膜片钳全细胞记录技术,测试单独使用1mmol/L水杨酸钠以及在细胞外液中先加入10mmol/L氯化钾再加入1mmol/L水杨酸钠后IK和RP的变化。结果水杨酸钠具有使IK先增加后降低的双相时-效药理作用;细胞外液中加入氯化钾后,水杨酸钠对IK的作用减弱。水杨酸钠有降低RP的作用,但时-效关系不明显;细胞外液中加入氯化钾后,RP升高,然后回降至用药前水平。结论水杨酸钠对OHC生理功能的影响与K+有关,可影响OHC侧膜的K+电导和细胞内外K+分布,并通过对IK和RP的影响而改变OHC的兴奋性和机械活动特性,这些作用有可能是水杨酸影响OHC功能的耳蜗机制之一。

右美托咪定抑制离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩

目的观察右美托咪定对离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩的影响,并探讨其机制。方法健康家兔,♂♀不拘,击晕并分离十二指肠,将肠段与张力换能器相连并置于氧饱和的Krebs-Henseleit(K-H)液中。采用BL-420F生物信号采集处理系统记录离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩的幅度(amplitude,AM)和频率(frequency,FR)。累加给药法观察不同浓度右美托咪定对离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩的影响。K-H液中,预先孵育格列苯脲(glibenclamide,Gli)后再加入右美托咪定,研究其作用机制;无钙K-H中预先加入右美托咪定后再分别加入CaCl_2和雷诺丁(Rynodine),进一步研究其作用机制。结果 1右美托咪定剂量依赖性地抑制离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩的幅度(P<0.05,P<0.01),但对频率无影响(P>0.05);2 Gli(P<0.05)可部分阻断右美托咪定对离体家兔十二指肠平滑肌自发收缩的抑制作用;3无钙K-H液中,右美托咪定可分别抑制由CaCl_2(P<0.05)外钙增加和Rynodine(P<0.05)内钙释放所诱发的收缩。结论右美托咪定抑制离体家兔十二指肠平滑肌的自发收缩,其作用可能是通过兴奋ATP敏感性钾通道(K_(ATP))以及同时抑制外钙内流、内钙释放实现的。

定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰

目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验。结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力。定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带。结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰。然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究。

IQ_(23)对豚鼠心室肌细胞复极和延迟整流钾电流两种成分的作用(英)

采用膜片钳全细胞记录技术，研究了具有抗心律失常作用的苄基异喹啉衍化物IQ23对豚鼠心室肌单细胞动作电位（AP）和钾电流的作用。结果表明：IQ_23在10，30，100μmol·L^-皇呈浓度依赖性的减慢AP复极，APD_90分别延长15％，28％和31％，此效应不依赖细胞外Ca^2+。电压钳制下记录延迟整流钾电流，IQ_23对其两种成分，即I_ks和I_kr，都有阻断作用，30和100mol·L-1IQ_23阻断I_ks达21％和26％，对Ikr为67％和86％。即使在100mol·L-1,IQ_23也不影响内向整流钾电流（Ikl）。本实验表明，IQ23能浓度依赖性的延长心室肌细胞动作电位时程（APD），此效应与胞外Ca2+无关。1Q23对Iks和Ikr两种成分都有阻断作用，无明显的选择性。

IQ23对豚鼠心室肌细胞复极和延迟整流钾电流两种成分的作用（英）

采用膜片钳全细胞记录技术，研究了具有抗心律失常作用的苄基异喹啉衍化物IQ23对豚鼠心室肌单细胞动作电位（AP）和钾电流的作用。结果表明：IQ23在10，30，100μmol·L-皇呈浓度依赖性的减慢AP复极，APD90分别延长15％，28％和31％，此效应不依赖细胞外Ca2+。电压钳制下记录延迟整流钾电流，IQ23对其两种成分，即Iks和Ikr，都有阻断作用，30和100mol·L-1IQ23阻断Iks达21％和26％，对Ikr为67％和86％。即使在100mol·L-1,IQ23也不影响内向整流钾电流（Ikl）。本实验表明，IQ23能浓度依赖性的延长心室肌细胞动作电位时程（APD），此效应与胞外Ca2+无关。1Q23对Iks和Ikr两种成分都有阻断作用，无明显的选择性。

转录因子Sp1调控H9C2心肌细胞Kv2.1钾通道的研究

目的观察转录因子特异性蛋白1(specific protein 1,Sp1)对心肌细胞Kv2.1钾通道蛋白及电流的影响。方法构建Sp1基因的表达质粒pEGFP-N2-Sp1,转染H9C2心肌细胞。Western blot检测转染前后Kv2.1钾通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测转染前后Kv2.1电流密度和电流特性的变化。结果与对照组相比,Sp1能明显增强Kv2.1钾通道蛋白表达(P<0.05),增大Kv2.1电流密度(P<0.05)。同时,Sp1减少Kv2.1钾通道的激活时间常数,加快该通道的激活,但半失活最大电压V1/2和斜率因子k值均无明显变化(均P>0.05)。结论Sp1增强Kv2.1钾通道电流,加快该通道的激活。

下丘脑室旁核小电导钙激活钾通道过表达降低慢性心衰大鼠肾交感神经兴奋性

目的:研究下丘脑室旁核小电导钙激活钾通道亚型2(SK2)过表达对慢性心衰大鼠心率、血压和肾交感神经活性的影响,揭示心衰大鼠下丘脑室旁核对交感系统的调节机制。方法:构建SK2重组腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP-rKCNN2。采用SD大鼠,手术组用左冠状动脉前降支结扎术制作慢性心衰模型,假手术组大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎,术后6周用超声心动图测定心功能。心衰组和假手术组分别在室旁核微量注射SK2腺病毒pDC316-mCMV-EGFP-rKCNN2和对照腺病毒pDC316-mCMV-EGFP,7 d后通过超声心动图检测心功能的改变;运用免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting方法检测SK2重组腺病毒转染情况及表达。室旁核微量注射SK通道阻滞剂apamin,通过PowerLab 8/30系统采集信号记录心率、血压和肾交感神经活性的变化。结果:心衰大鼠SK2表达较假手术组减少,下丘脑室旁核微量注射SK2腺病毒导致心衰大鼠肾交感神经兴奋性明显降低,下丘脑室旁核微量注射对照腺病毒对假手术大鼠交感神经兴奋性的改变不明显。结论:SK通道蛋白在心衰状态下表达降低并可能导致其功能减弱,进而促成由SK2通道介导的中枢负性交感调节通路的降低,增加了交感神经兴奋性,从而加重心衰的发展。SK2过表达减弱了心衰大鼠的肾交感神经活性,为治疗心衰提供了新的方向。

中华绒螯蟹眼柄端髓X器官神经分泌细胞钙激活钾通道研究

采用膜片钳的内面向外式记录了中华绒螯蟹眼柄端髓X器官(MTXO)神经内分泌细胞钙激活钾通道活动。结果表明,在对称性高钾溶液中(200mmol.L-1),钙激活钾通道的单通道活动为快速开放的矩形方波,时程长短不一,通道电导为(213.4±11.2)pS。在-80^+80mV钳制电压下,通道电流幅度及开放概率呈现明显的电压依赖性;随浴液游离Ca2+浓度的增加,通道的开放概率和开放数目增加,表现出明显的钙敏感性。药物敏感试验结果显示,80mmol.L-1四乙胺(TEA)可完全阻断通道活动。表明中华绒螯蟹眼柄端髓X器官(MTXO)神经分泌细胞钙激活钾通道(BKCa)具有大电导、电压依赖性、Ca2+敏感性和四乙胺(TEA)敏感性等特征。

脂多糖激活所致大鼠抑郁样行为及对海马神经细胞钾电流变化的影响

采用细胞因子刺激剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为免疫激活手段,研究LPS诱导的免疫激活产生的抑郁样行为及对海马神经细胞电压依赖钾电流变化的影响。应用膜片钳技术对海马神经细胞钾电流进行全细胞记录,比较抑郁样行为大鼠与正常大鼠钾离子通道电流密度和激活特性的变化。结果发现,与生理盐水对照组相比,一次LPS注射后2hr,实验组动物产生抑郁样行为,同时急性观察的海马神经细胞的钾离子通道的电流密度呈现显著升高(p<0.01);而一次LPS注射后24hr,动物的抑郁样行为消失,且急性观察的海马神经细胞的钾离子通道与对照组相比较,其电流密度和激活曲线没有显著性变化。结论:LPS诱导的抑郁样行为,与LPS诱导的海马神经细胞电压依赖钾电流的上调在时程上同步,提示钾离子通道可能参与免疫激活所致的抑郁样行为。

K~＋通道开放剂和阻滞剂对持续缺氧大鼠肺血管收缩效应的影响

模拟５０００ｍ高原持续缺氧引起大鼠肺动脉高压模型，研究缺氧性肺血管收缩反应（ＨＰＶ）。结果表明缺氧１０，２０ｄ大鼠肺动脉收缩压、舒张压升高。缺氧２０ｄ后，离体肺动脉灌注压（ＰＡＰＰ）和肺血管阻力（ＰＶＲ）增加。缺氧组对ＫＣｌ１０，１５ｍｍｏｌ／Ｌ引起ＰＡＰＰ和ＰＶＲ升高的反应增强。与正常组比较，缺氧２０ｄ后大鼠离体肺动脉环对ＫＣｌ１０，１５ｍｍｏｌ／Ｌ引起的收缩反应增强，对去甲肾上腺素的反应无改变。Ｋ＋通道阻滞剂ＣｓＣｌ２０ｍｍｏｌ／Ｌ可使正常大鼠肺动脉环对ＫＣｌ１０，１５ｍｍｏｌ／Ｌ引起的收缩反应加强，而缺氧大鼠则不受影响。Ｋ＋通道开放剂克罗卡林、尼可地尔可抑制ＫＣｌ引起ＰＭＰ和ＰＶＲ升高，并可抑制ＫＣｌ引起的肺动豚环收缩。提示持续缺氧会影响Ｋ＋通道，可能引起Ｋ＋通道部分阻滞，参与肺动脉高压的形成。此外，Ｋ＋通过开放剂可抑制ＨＰＶ，可能在治疗肺动脉高压中有意义。

UK-78282的合成

对甲氧基肉桂酸经LiAlH4还原、溴代得到3-(4-甲氧基苯基)溴丙烷,与4-哌啶甲酸乙酯反应得到的1-[3-(4-甲氧基苯基)丙基]哌啶-4-甲酸乙酯经还原后与二苯甲醇醚化,得到钾离子通道阻断剂UK-78282,总收率58%。

慢性栓塞性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道蛋白mRNA表达的变化

目的 建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,研究肺动脉结扎对大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道蛋白Kv1.5和Kv2.1 mRNA表达的影响,探讨疾病发生发展的机制.方法 将雄性SD大鼠运用左肺动脉结扎法建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,随机分为正常对照2周组、左肺动脉结扎2周组、假手术2周组和正常对照5周组、左肺动脉结扎5周组、假手术5周组,每组5只.直接右心测压法测6组大鼠右心室收缩压及平均压;取心脏称质量测定右心室肥厚指数;HE染色观察肺组织和肺血管结构的变化,测肺动脉相对中膜厚度（PAMT）、管壁面积/管总面积（WA/rA）;实时荧光定量PCR检测肺动脉平滑肌组织Kv1.5和Kv2.1 mRNA的表达.结果 左肺动脉结扎组2周及5周后大鼠右心室收缩压、平均压、右心室肥厚指数均较正常对照组和假手术组明显升高（均P＜0.05）.2周和5周后结扎组PAMT和WA/TA值均较正常对照组和假手术组显著增高（均P＜0.05）,即远端肺小动脉平滑肌层较其他两组明显增厚,管腔狭窄,肺血管重塑.肺动脉结扎可降低远端肺动脉平滑肌Kv1.5和Kv2.1 mRNA的相对表达量,结扎后2周及5周大鼠肺动脉平滑肌Kv1.5 mRNA相对表达量为（67.56±12.23）％和（55.98±6.84）％,Kv2.1 mRNA相对表达量为（59.71±6.25）％和（49.07±3.51）％,均低于同时间正常对照组和假手术组（均P＜0.05）.结论 用左肺动脉结扎法成功建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,左肺动脉结扎可能通过下调大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道Kv1.5、Kv2.1 mRNA的表达参与慢性栓塞性肺动脉高压的发生发展.

白藜芦醇甙增强大鼠心室肌细胞内向整流钾通道电流(英文)

本研究旨在应用全细胞膜片钳技术观察白藜芦醇甙(polydatin)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流(Ito)、稳态外向钾通道电流(Iss)和内向整流钾通道电流(IK1)的影响。结果显示:(1)白藜芦醇甙(10μmol/L以上浓度)可通过非浓度依赖性方式增加心室肌细胞IK1。(2)白藜芦醇甙对心室肌细胞Ito无影响,对Ito的激活、失活和失活后的恢复动力学亦无影响。(3)白藜芦醇甙对心室肌细胞Iss无明显影响。以上结果提示,白藜芦醇甙对大鼠心室肌细胞IK1具有激活作用,可增加IK1,但对Ito和Iss无明显影响;白藜芦醇甙对IK1的作用可能是其抗心律失常作用的离子机制之一。