人实体瘤BUdR离体标记BUdR/DNA双参数FCM测定Tpot的初步研究

目的 :探索人实体瘤标本BUdR离体标记BUdR/DNA双参数FCM测定Tpot的方法。方法 :选用头颈肿瘤活检标本及直肠癌手术标本行离体溴脱氧尿嘧啶核苷 (bromodeoxyuridine ,BUdR)标记双参数流式细胞术(flowcytometry ,FCM )测定肿瘤潜在倍增时间 (Potentialdoublingtime,Tpot)。 结果 :头颈肿瘤活检标本标记结果为阴性 ,直肠癌手术标本离体标记结果与文献报道的在体标记的结果有较大的差异。结论 :Tpot测定应尽可能采用在体BUdR标记 。

脑胶质瘤SHG-44细胞动力学特征的实验研究

目的 探讨脑胶质瘤潜在倍增时间 (Tpot)实验条件。方法 采用荷脑瘤动物模型 ,溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR)掺入法测定Tpot。结果 所建立的Wistar脑胶质瘤大鼠模型实用、可靠。在体潜在倍增时间、有效倍增时间 (Teff)分别为 8.15天和 18.4 6天。BudR掺入率、细胞标记指数 (LI)均在BudR掺入后 8h达最高 ,>6Gy辐射其潜在倍增时间明显缩短。结论 在体、离体BudR掺入标记率存在明显差异。辐射吸收剂量 >12Gy,其实际倍增时间、潜在倍增时间、有效倍增时间降至最低点。提示脑胶质瘤放疗过程中存在细胞加速再增殖 。

鼻咽癌细胞潜在性倍增时间的流式细胞计量术研究

目的研究目前文献中常用的计算方法和５－溴脱氧尿苷（ＢｒｄＵ）标记方法对不同生长状态肿瘤细胞潜在性倍增时间（Ｔｐｏｔ）检测结果的影响。方法应用ＢｒｄＵ／ＤＮＡ双参数流式细胞分析和相对运动法对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ进行研究。结果ＢｒｄＵ标记浓度１０～１００μｍｏｌ／Ｌ、标记时间５～３０ｍｉｎ和相对运动时间１．５～８．５ｈ对Ｔｐｏｔ检测结果无显著影响（Ｐ＜０．０５）；平台期ＣＮＥ细胞未能被ＢｒｄＵ标记，而指数生长期ＣＮＥ细胞和平台期ＣＮＥ细胞换新鲜培养液后ＢｒｄＵ标记指数分别为４８．８％和３３．６％。结论本方法适宜于今后的临床应用，有助于解释临床上肿瘤加速再增殖发生的时间问题。

Evaluation of sperm mitochondrial function using rh123/PI dual fluorescent staining in asthenospermia and oligoasthenozoospermia

Objective：The recent advent of flow cytometry（FCM）,coupled with fluorescent dyes,has been successfully applied to assess mitochondrial function.The aim of this study was to investigate the feasibility and clinical significance of detecting sperm mitochondrial function and to evaluate sperm mitochondrial function by using Rhodamine 123/propidium（Rh123/PI）dual fluorescent staining and FCM in asthenospermia and oligoasthenozoospermia.Methods：Twenty-five fertile men（with normal sperm parameters）and 230 infertile patients were examined.Fifty-five patients of the above 230 patients were selected for idiopathic infertility samples and were divided into two groups：asthenospermia（n=30）and oligoasthenozoospermia（n=25）.Rh123/PI dual fluorescent staining and FCM were carried out to examine sperm mitochondrial function.Results：Significant differences were found between the normal and abnormal semen samples（P0.05）when Rh123＋/PI-,Rh123-/PI＋and Rh123-/PI-sperm were examined by FCM,but there was no significant difference between the asthenospermia（P=0.469） and oligoasthenozoospermia group（P=0.950）when Rh123＋/PI-and Rh123-/PI＋sperm were then examined;however,a significant difference was found between the 2 groups（P=0.003）when Rh123-/PI-sperm were examined.There was no correlation between Rh123-/PI-sperm and semen parameters in the normal group,but there was a significant negative correlation between the sperm concentration and Rh123-/PI-sperm in asthenospermia and oligoasthenozoospermia patients（r=-0.509,-0.660;P=0.018,0.038）.Conclusion：Rh123/PI dual fluorescent staining and FCM can provide reliable information to assess the quality of sperm and reveal differences in mitochondrial membrane potential in asthenospermia and oligoasthenozoospermia.

BUdR标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪测定肿瘤潜在倍增时间的方法学研究

目的探讨溴脱氧尿嘧啶核苷（ＢＵｄＲ）标记ＢＵｄＲ／ＤＮＡ双参数流式细胞仪（ＦＣＭ）测定肿瘤潜在倍增时间Ｔｐｏｔ的方法，比较ＢＵｄＲ在体（ｉｎｖｉｖｏ）、离体（ｉｎｖｉｔｒｏ）标记结果的差异。材料与方法实验采用人鼻咽癌裸小鼠移植瘤模型分别进行ＢＵｄＲ在体、离体标记；离体标记时分别将样本制成组织块和细胞悬液在０．５ｍＭ、０．１ｍＭＢＵｄＲ的含２０％胎牛血清ＲＰＭＩ１６４０培养基、５％ＣＯ２、３７℃、ＣＯ２孵箱中开放培养不同时间后收集样本。在体标记：腹腔注射ＢＵｄＲ０．１ｍｇ／ｇ体重，６小时后处死小鼠取瘤剪碎，在７０％的冷乙醇固定冰箱保存；全部样本用ＦＩＴＣＰＩ染色后行ＦＣＭ测定。结果（１）本实验室的ＢＵｄＲ离体培养条件下，组织块标记较理想。（２）用ＢＵｄＲ在体标记法测定不同大小的肿瘤（直径０．３～１．２ｃｍ），结果表明：直径＜０．５ｃｍ的肿瘤的标记效果比较理想。（３）相同体积的肿瘤在体（ｎ＝９）、离体（ｎ＝７）标记两种不同标记方法的结果显示，相同体积的肿瘤用ＢＵｄＲ离体标记法时ＬＩ比在体标记低５３％，其它各项细胞动力学参数两者均有明显差异，但离体标记法的组内变异很小。结论本实验室成功建立了在体ＢＵｄＲ标记ＢＵ?

不同粒径纳米氧化铝对体外培养神经细胞凋亡的影响

[目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测细胞活力,用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法观察细胞死亡的形态学,采用Rhodamine123染色方法检测线粒体膜电位变化情况,间接反映早期凋亡变化,应用流式细胞仪测定各染毒组细胞凋亡。[结果]纳米粒子超声后,静置前后相比,电镜下可见纳米粒子均匀分布,且粒径小于100nm符合实验要求;AO/EB染色后,细胞形态学发生明显改变;罗丹明测线粒体膜电位,随着纳米氧化铝粒径的减小,膜电位逐渐降低;应用流式细胞术检测凋亡,随着纳米氧化铝粒径的减小,凋亡率逐渐增加。[结论]氧化铝颗粒能够引起原代培养的神经细胞凋亡,且粒径能够影响细胞凋亡率。