甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为REV核酸疫苗免疫佐剂的研究

为了研究甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为禽网状内皮组织增生症病毒(REV)核酸疫苗免疫佐剂对雏鸡免疫功能的影响,试验利用REV特异性抗原基因gp90与真核表达载体pTT5构建重组质粒pTT5-gp90,提取蕨麻多糖并测定其多糖含量,利用傅里叶红外光谱对甘露糖化碳纳米管进行检测,然后采用CCK-8法测定鸡巨噬细胞(HD11)活性,确定重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖及甘露糖化碳纳米管使用的质量浓度;将80只未感染REV的1日龄雌性三黄鸡分为对照组、重组质粒pTT5-gp90组、质粒与多糖PAP-gp90组、混合物PAP-gp90@M-M组,分别进行免疫接种、攻毒,免疫后第0,7,14,21天采集血液,检测白细胞介素-4(IL-4)与γ干扰素(IFN-γ)质量浓度、REV抗体效价;攻毒后第7,14,21天饲喂前称量体重并统计累计死亡率,解剖后取脾脏和肝脏,计算脏器指数。结果表明:重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖、甘露糖化碳纳米管质量浓度分别为100,500,30μg/mL时,HD11细胞活性较高;免疫后第7,14,21,28天,与对照组比较,混合物PAP-gp90@M-M组血清IL-4与IFN-γ质量浓度及REV抗体效价明显上调;攻毒后第3,10天雏鸡体重升高,累计死亡率降低;肝脏指数低于重组质粒pTT5-gp90组,高于对照组,但均差异不显著(P>0.05);脾脏指数显著低于重组质粒pTT5-gp90组(P<0.05),高于对照组(P>0.05)。说明甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖可作为REV核酸疫苗的免疫佐剂,该佐剂可通过增强雏鸡免疫力、诱导免疫应答、降低死亡率来提高REV核酸疫苗的免疫效果。

蕨麻多糖对小鼠淋巴细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

为探讨蕨麻多糖(Potentilla anserine polysaccharide,PAP)免疫调节的作用机理,观察了PAP对小鼠脾淋巴细胞体外增殖和分泌一氧化氮的影响.结果显示,50 mg/L PAP配合ConA 或LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)能使小鼠脾淋巴细胞在体外显著增殖(P<0.05);100、200及400 mg/L PAP配合ConA或LPS可使小鼠脾淋巴细胞在体外极显著增殖(P<0.01);与对照组相比,PAP以不同浓度(50～400 mg/L)处理小鼠脾淋巴细胞后一氧化氮分泌量均显著升高(P<0.05).试验结果表明,蕨麻多糖能明显促进体外培养的小鼠脾淋巴细胞增殖和分泌一氧化氮,与ConA或LPS有协同作用.

蕨麻多糖对小鼠血清中三种细胞因子水平的影响

通过给小鼠腹腔注射100mg/kg环磷酰胺,建立免疫抑制模型,观察了100、200、400mg/kg剂量蕨麻多糖配合应用后对小鼠血清中细胞因子IL-6、IFN-γ和TNF-α水平的影响。结果表明,蕨麻多糖能明显升高正常小鼠血清中的IL-6水平,呈剂量依赖关系;能升高正常小鼠血清中的IFN-γ水平,而对TNF-α水平无明显影响。环磷酰胺能降低小鼠血清中IL-6、IFN-γ和TNF-α水平,蕨麻多糖能拮抗环磷酰胺的免疫抑制,升高小鼠血清中IL-6、IFN-γ和TNF-α水平,提高机体的免疫功能。

响应面法优化蕨麻多糖的提取工艺

采用水提醇沉法对蕨麻多糖进行提取,并对提取工艺条件进行了研究。在单因素实验的基础上,以多糖提取率为评价指标,选取液料比、浸提时间、浸提温度三个因素作为响应因子,用Box-Behnken中心组合试验设计原理优化蕨麻多糖的提取工艺。最后得到蕨麻多糖热水浸提的最佳工艺条件为:液料比20.3∶1,浸提时间4.37 h,浸提温度82℃。在此条件下蕨麻多糖的实际提取率可达到24.53±0.24%。

蕨麻多糖提取纯化及生物活性研究进展

蕨麻为传统中药,且为藏医常用草药,主要分布于我国甘肃、青海、西藏等地。蕨麻多糖是蕨麻的多种活性成分之一,近年来国内外学者对其进行了初步研究,显示其具有抗氧化、抗衰老、抗菌、调节免疫、调节血糖等多种功效。本文对近年蕨麻多糖的提取、纯化、生物活性研究进行综述,为深入研究及开发利用提供思路。

6种西北地区植物多糖对卷烟主流烟气水分含量及pH的影响

为研究沙棘多糖、蕨麻多糖等6种西北地区植物多糖对卷烟质量的影响,使用气相色谱、电位滴定仪分别测定了添加6种植物多糖烟支样品主流烟气水分含量、pH,并与空白及丙二醇样品进行了比较。结果显示:添加植物多糖可显著提高卷烟主流烟气气相、粒相水分含量。其中添加锁阳多糖烟支样品主流烟气中粒相水分分别较丙二醇及空白样品提高31.3%、44.3%。添加植物多糖可显著降低卷烟主流烟气pH,但降低幅度不大。结果表明,沙棘多糖、蕨麻多糖等西北地区植物多糖可显著降低卷烟主流烟气pH及提高卷烟主流烟气中气相、粒相水分含量。

蕨麻多糖对小鼠免疫细胞信号转导相关分子的影响

以50、100、200、400μg/mL的蕨麻多糖对小鼠脾淋巴细胞在体外分别孵育4、8、12、24 h,测定了细胞培养液中一氧化氮(NO)、6-酮-PGF1α及血栓素B2(TXB2)的水平和细胞内cGMP的含量,测定了加入蕨麻多糖后2、5、10 min时细胞内游离钙离子(Ca2+)的浓度。结果显示,蕨麻多糖能明显促进小鼠脾淋巴细胞分泌一氧化氮,显著升高小鼠脾淋巴细胞内cGMP及钙离子的水平,对细胞内TXB2的产生有抑制作用,能够调整花生四烯酸体系向6-酮-PGF1α一端偏移。提示蕨麻多糖能够增强脾淋巴细胞的免疫作用。

蕨麻多糖的提取工艺研究

通过测定样品中蕨麻多糖的含量,比较两种不同的提取方法对蕨麻多糖含量的影响;并通过单因素和正交试验研究蕨麻多糖的最佳提取条件。结果表明,热水浸提法的提取条件为:温度100℃,料液比20倍,时间1h,提取次数3次;采用微波法提取的条件为:功率450W,料液比15倍,时间15min,提取次数1次。通过两种方法的对比,微波法提取蕨麻多糖优于热水浸提法。

蕨麻多糖的提取及其清除自由基的作用

采用热水提取、乙醇沉淀、Sevag法获得蕨麻多糖;通过体外化学模拟试验,观察了该多糖清除自由基的活性。结果,蕨麻多糖得率为3.8%;在体外化学模拟系统反应中,该多糖能显著清除羟自由基、超氧阴离子及体外培养的淋巴细胞产生的过氧化氢;蕨麻多糖对体外亚油酸脂质过氧化无明显影响。

藏药蕨麻多糖的光谱性质及单糖组成分析

本研究对藏药蕨麻多糖进行了分离提纯,并测定其水溶性多糖含量为99.4%;通过紫外光谱与红外光谱分析表明,蕨麻多糖为分子量较小的α-吡喃糖,并含有氨基糖;蕨麻多糖的水解单糖经过NMP衍生后进行毛细管电泳分析,测得其单糖组成为木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、岩藻糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸,含量分别为3.945、77.445、17.568、17.646、3.942、2.165、65.268、13.037μg/mg和33.484μg/mg,与GC-MS的定性分析结果一致。

蕨麻水溶性多糖的提取及其单糖组分的分析

本文采用热水提取、乙醇沉淀、a-淀粉酶法脱淀粉、链酶蛋白酶和Sevag法联合除蛋白,得到蕨麻多糖.对提取的蕨麻多糖进行了总糖含量及糖醛酸含量的测定.粗多糖(P1)总糖含量为41.8%,糖醛酸含量为11.1%.脱淀粉脱蛋白多糖(P2)总糖含量为39.4%,糖醛酸含量为35.9%.经纸层析和高效液相色谱分析,表明该多糖主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,说明蕨麻多糖为酸性杂多糖.

蕨麻多糖对小鼠免疫功能的调节与体内自由基水平关系的实验察

为观察蕨麻多糖(PAP)对免疫功能低下小鼠免疫器官组织内活性氧自由基和抗氧化能力的影响,用地塞米松(Dex)为免疫抑制剂建立免疫功能低下动物模型,测定了小鼠胸腺和脾脏指数、抗超氧阴离子(O2.-)能力、抑制羟自由基(.OH)能力、胸腺中还原型谷胱甘肽(GSH)含量,血浆中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)水平。结果表明:蕨麻多糖能显著提高免疫功能低下小鼠脾脏指数、胸腺指数、GSH含量、T-AOC、抗O2.-能力、抑制.OH能力,降低免疫功能低下小鼠血浆中MDA水平。表明蕨麻多糖能拮抗地塞米松引起的免疫抑制,可通过调节自由基水平而影响机体免疫系统的功能。

鹅绒委陵菜多糖对荷瘤小鼠细胞因子的影响

[目的]研究鹅绒委陵菜多糖(PAP)对荷瘤小鼠外周血细胞因子白介素-2(TL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。[方法]建立肉瘤S180小鼠动物模型,灌胃给予50、100和200 mg/kg剂量的PAP,以抑瘤率为指标,考察鹅绒委陵菜多糖的体内抗肿瘤活性,测定其抑瘤率;ELISA法测定荷瘤小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TN-α)的水平。[结果]低、中、高3个剂量的PAP对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为46.41%、52.29%和59.48%;其中CY和低剂量的多糖组合抑瘤率与中、高剂量的多糖抑瘤率相当,并明显高于单用环磷酰胺组的抑瘤率;低、中、高3个剂量的PAP能明显提高荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α的水平。[结论]鹅绒委陵菜多糖具有提高荷瘤小鼠细胞免疫的作用。

蕨麻多糖对小鼠免疫功能的影响

摘 要: 用环磷酰胺作为免疫抑制剂小鼠腹腔注射(100mg/kg)建立免疫抑制模型,观察不同剂量蕨麻多糖(50、100、200、400mg/kg)对小鼠脾脏指数、胸腺指数及血清溶菌酶活力的影响。结果显示,蕨麻多糖能明显提高正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及免疫抑制小鼠脾脏指数;增强正常小鼠和免疫抑制小鼠血清溶菌酶活力,尤其在免疫抑制状态下,增强作用更明显。表明该多糖可对抗Cy所致的免疫抑制,明显地增强小鼠免疫功能。

蕨麻多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨蕨麻多糖(PAP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将Wistar雄性大鼠120只,随机分为6组:假手术组、模型组、尼莫地平组(12 mg/kg)和蕨麻多糖高[160 mg/(kg·d)]、中[80 mg/(kg·d)]、低[40 mg/(kg·d)]剂量组。采用线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,从术前7 d开始,每天1次,再灌注后1 h给药1次。再灌注结束后进行神经功能缺失症状评分;分别用化学比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺失症状明显,模型组大鼠脑组织SOD、GSH-Px、IL-10含量明显降低,MDA、TNF-α、IL-1β含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,蕨麻多糖各剂量组大鼠神经功能缺失症状明显改善,蕨麻多糖能降低脑组织MDA、TNF-α和IL-1β含量,升高SOD、GSH-Px和IL-10含量(P<0.05);并且这种影响与蕨麻多糖剂量存在对应关系。结论蕨麻多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用,其机制可能与其提高脑组织抗氧化能力、抑制炎症因子有关。

蕨麻多糖的功能研究

综述了蕨麻的主要化学成分及其多糖功能的研究进展.查阅近几十年来有关蕨麻的研究性文献,进行分析、归纳和总结.研究结果表明,蕨麻中所含的多糖成分具有抗氧化、抗缺氧、保肝和免疫调节等多种功能.蕨麻多糖是蕨麻的主要活性成分之一,具有多种医疗保健功能,而且我国蕨麻资源丰富,值得进一步探讨和开发利用.

蕨麻多糖对小鼠淋巴细胞花生四烯酸代谢的影响

目的:探讨蕨麻多糖(PAP)对小鼠脾淋巴细胞内花生四烯酸(AA)代谢产物的影响。方法:用放射免疫方法检测了血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)在细胞内的含量。结果:不同蕨麻多糖浓度组,6-K-PGF1α含量达到高峰的时间段各不相同;与对照组相比较,100μg/mlPAP组TXB2的含量明显偏低,而其它各组在同一时间段TXB2含量与多糖浓度呈剂量依赖关系;并且PGF1α/TXB2比值也随PAP浓度递增而升高。结论:PAP能调节小鼠脾淋巴细胞AA代谢水平和机体PGF1α/TXB2平衡状态,影响机体免疫机能。

蕨麻多糖对缺氧损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制

目的探讨蕨麻多糖对缺氧损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制。方法将培养好的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926随机分为常氧对照组、缺氧模型组、复方丹参对照组及蕨麻多糖高、中、低浓度组,除常氧对照组外,其余5组构建缺氧损伤模型,同时复方丹参对照组加复方丹参片提取物(终浓度0.1 mg/m L),蕨麻多糖高、中、低浓度组加终浓度分别为0.1、0.05、0.025 mg/m L的蕨麻多糖,均培养2 h。采用MTT法检测细胞活力,采用台盼蓝染色法测算细胞存活率,光学显微镜下观察细胞形态变化,用比色法测定细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)水平,ELISA法测定培养基中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、内皮素1(ET-1)水平,比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,RT-PCR技术测定细胞内i NOS、e NOS mRNA表达。结果蕨麻多糖各浓度组、复方丹参组与缺氧模型组比较细胞形态均有不同程度改善。与缺氧模型组比较,蕨麻多糖各浓度组、复方丹参组细胞活力及存活率升高,细胞LDH外漏量下降,i NOS和ET-1水平降低,e NOS和NO水平升高,SOD水平升高,MDA水平降低,细胞e NOS mRNA表达升高,i NOS mRNA表达降低(P均<0.05)。结论蕨麻多糖可能通过提高缺氧损伤EA.hy926细胞的抗氧化活性、调控ET-1与NO的动态平衡发挥保护作用。

鹅绒委陵菜多糖抗肿瘤作用研究

目的探讨鹅绒委陵菜多糖(PAP)的抗肿瘤作用。方法采用MTT法研究PAP对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;并将S180荷瘤小鼠随机分组,灌胃给予50,100,200 mg·kg-1剂量的PAP,研究PAP对荷瘤小鼠的抑瘤率和免疫功能的影响。结果体外实验结果显示PAP对SMMC-7721细胞的体外增殖有显著抑制作用,400 mg·L-1 PAP组抑制率最高,为43.57%;PAP对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用呈剂量依赖性,拟合曲线呈线性相关。动物实验结果显示低、中、高3个剂量的PAP对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为46.41%,52.29%和59.48%,其中环磷酰胺和低剂量的多糖组合抑瘤率与中、高剂量的多糖抑瘤率相当,并显著高于单用环磷酰胺组的抑瘤率;同时PAP能够显著提高T-淋巴细胞和巨噬细胞吞噬率。结论 PAP具有抗肿瘤活性和增强免疫的功能。

蕨麻多糖组分抑制过氧化氢诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的作用

分离提取蕨麻多糖组分(Potentilla anserine polysaccharide fraction,PAPF),进行理化性质检测、红外光谱和气相色谱分析。用过氧化氢(H2O2)建立小鼠体外淋巴细胞凋亡模型,通过形态学、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法研究不同浓度的PAPF对H2O2介导的小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。结果表明PAPF得率为6.22%,不含淀粉、氨基酸和蛋白质,该多糖组分由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,红外光谱扫描呈现多糖类物质的特征吸收峰。形态学、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析结果表明,200μmol·L–1H2O2可诱导脾淋巴细胞出现典型凋亡。PAPF(50、100、200和400μg·mL–1)能拮抗过氧化氢所诱导的细胞凋亡,抑制作用随多糖组分浓度的增加而增强。提示PAPF对过氧化氢介导的淋巴细胞凋亡具有显著的抑制作用,且呈浓度依赖关系。