雾水葛总黄酮的提取工艺优化及其对线虫应激能力的影响

目的 正交法优化雾水葛总黄酮的提取工艺,探究其对秀丽隐杆线虫抗应激能力的影响。方法采用NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)-NaOH显色法测定雾水葛中总黄酮的质量分数,以雾水葛总黄酮提取率为指标,通过单因素考察及正交试验考察时间、温度、料液比、乙醇体积分数对总黄酮提取率的影响,优选出最佳提取工艺。设立给药组和空白组,通过观察线虫头摆动次数、H_(2)O_(2)氧化应激、抗热应激试验探究总黄酮对秀丽隐杆线虫抗应激能力的影响。结果最佳提取工艺:提取时间为40 min,提取温度为70℃,乙醇体积分数为60%,料液比为1∶40 (g∶mL),总黄酮提取率实测值为1.31%。给药组线虫头摆动次数明显多于空白组(P<0.01)。雾水葛总黄酮质量浓度为0.300 mg/mL时,给药组在氧化应激和热应激实验中平均寿命比空白组分别延长32.28%、42.96%。结论超声法操作简单、便捷、提取率高,提取所得总黄酮能增强秀丽隐杆线虫应激能力。

雾水葛提取物抑制脂多糖诱导的人泪腺上皮细胞炎症反应的实验研究

目的 观察雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞活力和炎症的影响,鉴定活性单体并探索药理机制。方法 选取宁波市眼科医院收治的一位25岁女性泪腺炎患者,分离培养其人泪腺上皮细胞,免疫荧光法检测细胞标志物表达以鉴定细胞,不同剂量脂多糖(LPS)诱导细胞炎症反应,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)检测细胞活力筛选LPS最佳剂量。使用水、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别提取雾水葛活性成分,MTT法检测不同溶剂和剂量雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞活力的影响。通过电喷雾质谱和核磁共振谱图确定氯仿提取物中活性成分的结构,将鉴定得到的5种化合物(LF1~5)进行药物靶标的预测,Western Blot法检测5种化合物的雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞炎症相关蛋白表达的影响。结果 (1)细胞鉴定:角蛋白(CK)14、CK7、E-钙黏蛋白(E-cadherin)等阳性表达确定得到的是人泪腺上皮细胞和少量肌上皮细胞。(2)剂量筛选:处理48 h和72 h后,当LPS浓度为80 mg/L时,细胞活力开始低于对照组,差异有统计学意义(t_(48 h)=6.827、t_(72 h)=6.222,均P=0.002),故LPS浓度80 mg/L、处理时间为24 h为最佳诱导方法。高浓度下,不同雾水葛提取物都具有对细胞活力的抑制作用,2.5、5、10、20μg/mL为提取物的适宜浓度。(3)雾水葛氯仿提取物中物质鉴定:LF-1为(-)-Epicatechin,LF-2为8-(2-Pyrrolidinone-5-yl)-(-)-epicatechin,LF-4为3’-Demethylicariside E3,LF-3、LF-5为首次发现。(4)药物靶标筛选:5种氯仿提取物中,一共有5个共同靶点,分别为花生四烯酸5-氧化酶活化蛋白(ALOX5)、白细胞介素(IL)-2、IL-6、核因子κB1(NF-κB1)和血管内皮生长因子A(VEGFA)。(5)炎症相关蛋白:5种雾水葛的氯仿提取物都能不同程度地抑制炎症相关蛋白的水平,其中以LF-3的抑制效果最佳。结论 雾水葛提取物能够抑制LPS诱导的人泪腺上皮细胞的炎症反应,其中以氯仿提取物中的LF-3成分的药理活性最佳。

多枝雾水葛不同提取物对小鼠皮下脓肿的作用

目的研究多枝雾水葛提取物不同萃取部位对感染引起的皮肤脓肿的消肿排脓作用。方法建立由金黄色葡萄球菌引起的小鼠皮肤脓肿模型,观察多枝雾水葛不同萃取物对小鼠皮下脓肿外观形态、体积及病理形态的影响,评价不同萃取部位的消肿排脓作用。结果多枝雾水葛水提取物、氯仿萃取部位、水部位能使小鼠皮下脓肿体积变小,中性炎性细胞浸润逐步减轻、肉芽生长,显示良好的治疗效果。结论多枝雾水葛提取物对感染引起的皮肤脓肿具有消肿排脓以及促进皮肤愈合的功效,其有效部位是氯仿部位和水部位。

雾水葛化学成分研究

目的:分离鉴定雾水葛全草的化学成分。方法:运用多种色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从雾水葛全草中分离出14个化合物,分别鉴定为:β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、齐墩果酸(3)、(-)表儿茶素(4)、α-香树脂醇(5)、丁香基-β-芸香糖苷(6)、2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(7)、东莨菪苷(8)、黄芩素-7-O-α-L-鼠李糖苷(9)、东莨菪素(10)、槲皮素(11)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(12)、洋芹素(13)、2α-羟基乌苏酸(14)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

多枝雾水葛木脂素类化合物体外抗炎作用及其机制

目的研究从多枝雾水葛中分离的新化合物雾水葛木脂素(pouzolignan)D,C和E(本文命名为化合物Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ)的抗炎作用,初步探讨其抗炎机制。方法通过脂多糖(LPS)体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,用Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的含量,用酶联免疫分析法(ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及环氧合酶2(COX-2)mRNA表达。结果与溶剂对照组相比,化合物Ⅰ和Ⅱ20,40,80,160和320 mg·L-1对细胞无明显毒性,化合物Ⅲ20,40,80和160 mg·L-1对细胞存活率无明显抑制作用。化合物Ⅰ40,80和160 mg·L-1组细胞释放NO含量随着化合物浓度的增加而降低(r=0.675,P<0.05),化合物Ⅰ160 mg·L-1组PGE2和TNF-α含量与模型组相比明显降低(P<0.05)。化合物Ⅱ40,80和160 mg·L-1组细胞释放PGE2量随着化合物浓度的增加而减少(r=0.992,P<0.01),化合物Ⅱ80和160 mg·L-1组TNF-α含量逐渐减少(r=0.995,P<0.01),160 mg·L-1同时也抑制了NO的释放(P<0.05)。化合物Ⅲ20,40和80 mg·L-1明显降低炎症细胞释放的NO,无明显浓度效应关系(r=0.605,P>0.05),同时40和80 mg·L-1组PGE2和TNF-α的释放量也均明显减少,呈浓度依赖性(r=0.993,P<0.01;r=0.984,P<0.01)。实时荧光定量RT-PCR结果显示,化合物Ⅰ和Ⅱ明显降低COX-2和TNF-αmRNA表达(P<0.05,P<0.01),化合物Ⅱ和Ⅲ能明显降低iNOS mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论化合物Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ通过减少炎症细胞释放炎症因子NO,PGE2和TNF-α,同时不同程度地影响iNOS,COX-2和TNF-α基因表达而发挥抗炎作用。

水麻秧的化学成分预试实验

目的:通过预试验,初步探索水麻秧的化学成分。方法:采用试管法,对水麻秧的石油醚、水、95%乙醇提取物进行研究,通过多种指示剂和显色剂的沉淀反应或颜色反应,初步推断水麻秧中可能含有的化学成分。结果:通过预试验,提示水麻秧中可能含有糖、有机酸、生物碱类、酚类、香豆素与萜类内酯、强心苷、植物甾醇、三萜类等化学成分。结论:此试验为进一步进行该植物的生物活性成分研究提供了实验基础。

多枝雾水葛的生药鉴定

目的对多枝雾水葛进行生药学鉴定。方法利用性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别方法对多枝雾水葛进行生药鉴定研究。结果粉末中草酸钙簇晶众多,非腺毛多为单细胞,表面光滑或有疣状突起。结论确定了多枝雾水葛的性状、显微特征,可为多枝雾水葛的生药鉴定提供参考。

多枝雾水葛化学成分研究(Ⅱ)

目的：研究多枝雾水葛[Pouzolzia zeylanica（L.）Benn. var. microphylla（Wedd.） W.T.Wang]的化学成分。方法采用多种柱层析方法进行分离纯化,通过理化性质和波谱解析进行化学结构鉴定。结果从多枝雾水葛的乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离得到9个化合物,分别鉴定为槲皮素-3-O-[α-L-鼠李糖（1→6）-β-D-葡萄糖]-7-O-α-L-鼠李糖苷（1）、山柰酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（2）、（6R,9R）-1-酮-α-紫罗兰醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖（3）、蚱蜢酮（4）、苄基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、3,4,5-三甲氧基苯-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、邻苯二甲酸二辛酯（7）、山柰酚（8）、芹菜素（9）。结论化合物1、3~6、8~9首次从该属植物中分离得到。

多枝雾水葛化学成分研究(Ⅲ)

目的研究多枝雾水葛拔脓消肿有效部位的化学成分。方法采用Sephadex LH-20和ODS柱色谱、中压制备、HPLC制备等手段进行分离纯化,通过理化性质和波谱解析鉴定化合物的结构。结果从多枝雾水葛大孔树脂60%乙醇洗脱部位分离得到5个化合物,分别鉴定为6,7-二甲基-1-(2,3,4,5-四羟基戊烷基)-1,4-二氢喹喔啉-2,3-二酮(1)、芹菜素-6-C-β-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷(2)、芹菜素-8-C-[α-L-阿拉伯糖-(1→6)]-β-D-葡萄糖苷(3)、刺槐苷(4)、山奈酚-3,7-O-α-L-二鼠李糖苷(5)。结论化合物1~5首次从该植物中分离得到,包括1个生物碱和4个黄酮苷类。

雾水葛对糖尿病小鼠血糖的影响

目的:研究天然植物雾水葛水煎剂对糖尿病小鼠空腹血糖的影响。方法:70只昆明种小鼠随机选取8只作为正常组,其余用链脲佐菌素注射加高热量饮食诱导糖尿病小鼠模型,造模成功者经筛选后,分成模型组、盐酸二甲双胍组、雾水葛小剂量组、雾水葛中剂量组、雾水葛大剂量组,每组8只,给予相应药物灌胃,分别在治疗2周和停药10d后,测空腹血糖。结果:雾水葛小中剂量组血糖明显降低,与治疗前比较有显著性差异,与正常组对比无显著性差异,且其停药后与停药前血糖比较无显著性差异。结论:雾水葛有明显的降血糖作用,且停药后一段时间内也能持续控制血糖。

小鼠皮肤脓肿模型构建及多枝雾水葛的药效评价

目的建立动物皮肤感染脓肿模型评价指标体系,筛选优质金黄色葡萄球菌感染小鼠皮肤脓肿模型,并通过多枝雾水葛抗皮肤感染药效评价验证模型。方法在调研文献和咨询专家的基础上,利用层次分析法建立皮肤感染脓肿模型的综合评价指标体系,将小鼠分成4组,包括对照组,金黄色葡萄球菌高、中、低浓度组,观察记录19 d,综合评价小鼠皮肤脓肿模型;将筛选出的最佳小鼠皮肤感染脓肿模型运用于多枝雾水葛抗皮肤感染药效评价。结果所构建的动物皮肤感染脓肿模型评价指标体系比较全面,指标权重增强了评价的客观性;小鼠皮下注射1×10^13 cfu·L^-1金黄色葡萄球菌菌液0.1 mL建立的脓肿模型成功率高、稳定性好,综合评分最高;多枝雾水葛软膏可有效促进脓肿消退,药物组脓肿体积明显减小,皮肤细菌含量明显降低,炎症反应减轻。结论该实验成功构建了动物皮肤感染脓肿模型评价指标体系,优选的小鼠皮肤脓肿模型为进一步研究皮肤感染疾病和治疗药物提供了可靠的动物模型,多枝雾水葛软膏具有抗皮肤感染作用。

多枝雾水葛中总黄酮的AB-8大孔树脂纯化工艺研究

目的:考察大孔树脂富集纯化多枝雾水葛中总黄酮的工艺条件。方法:通过对7种不同型号的大孔树脂进行静态吸附实验,以吸附量作为指标优选合适的树脂,以多枝雾水葛中总黄酮的含量为指标优化纯化的工艺参数。结果:弱极性的AB-8大孔树脂对多枝雾水葛总黄酮具有较好的吸附性能,其最佳工艺条件为供试液质量浓度为0.3g生药·mL^(-1),调节pH=5.0,流速控制为2BV·h^(-1),用5BV供试液上样,以2BV的水除杂,以2BV的60%乙醇进行洗脱。经树脂富集后的总黄酮含量高达68.06%。结论:AB-8对多枝雾水葛总黄酮的分离纯化效果最佳,优化后工艺条件稳定,适用于多枝雾水葛总黄酮的富集。

一测多评法测定多枝雾水葛软膏中3种黄酮类成分含量

目的建立一测多评法测定多枝雾水葛软膏中3种成分含量,并验证该方法在多枝雾水葛软膏中应用的可行性和方法适用性。方法采用高效液相色谱法,以槲皮素-3,7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷为内参物,确立其与芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖8-C-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3,7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷的相对校正因子,并与外标法测定结果进行比较,以验证一测多评法测定该成分的合理性和可行性。结果9批软膏中黄酮苷含量一测多评法计算值与外标法实测值相对偏差无明显差异。结论一测多评法准确、可靠,可用于多枝雾水葛软膏的质量控制。

多枝雾水葛化学成分(Ⅰ)

目的：研究多枝雾水葛Pouzolzia zeylanica（L.）Benn.var.microphylla（Wedd.）W.T.Wang.的化学成分.方法：采用多种柱色谱方法进行分离纯化,通过波谱解析和理化性质进行化学结构鉴定.结果：从多枝雾水葛的三氯甲烷和正丁醇部位分离得到16个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇（1）,二十二酸十三烷酯（2）,正三十四烷醇（3）,正三十四烷酸（4）,正二十八烷醇（s）,木栓酮（6）,表木栓醇（7）,豆甾醇（8）,22,23-二氢菠甾醇（9）,胡萝卜苷（10）,胡萝卜苷棕榈酸酯（11）,邻苯二甲酸二辛酯（12）,山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（13）,槲皮素-7-0-吡喃鼠李糖苷（14）,槲皮素-3,7-2-0-α-L-吡喃鼠李糖苷（15）,牡荆苷（16）.结论：所有化合物均首次从该植物中分离得到,其中化合物2～5,7～9,11 ～ 12为首次从该属植物中分离得到.

多枝雾水葛不同提取部位的抗炎镇痛作用研究

目的研究多枝雾水葛不同提取物的抗炎镇痛作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠扭体反应和小鼠热板法观察多枝雾水葛灌胃、外搽使用以及不同提取部位的抗炎、镇痛作用。结果多枝雾水葛外搽使用的抗炎镇痛效果不明显,灌胃给药具有较强的抗炎镇痛作用,能显著减少醋酸所致的小鼠扭体次数和抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀,且其水提物比醇提物的作用更强。对多枝雾水葛水提取物的活性部位研究表明,多枝雾水葛的氯仿部位和水部位都具有较好的镇痛效果,抗炎的有效部位则是氯仿部位和正丁醇部位。结论多枝雾水葛水提取物灌胃给药具有抗炎镇痛作用,其有效部位是氯仿部位、正丁醇部位和水提取部位。

侵染云南雾水葛的菜豆金色花叶病毒属病毒的全基因组结构特征

为明确云南雾水葛表现叶片黄化、花叶等症状的植株是否被菜豆金色黄花叶病毒属病毒侵染,本研究通过PCR扩增、克隆测序及核苷酸序列特征分析,确定样品中病原种类及其系统进化关系。结果显示,该病样中检测到雾水葛金色花叶病毒(pouzolzia golden mosaic virus, PouGMV),该分离物全基因组具有典型的菜豆金色花叶病毒属单组分病毒结构特征,与来自越南的Vietam分离物(KC857508)亲缘关系最近,相似性最高达94.6%,与PouGMV其他分离物亲缘关系相对较远,相似性在88.9%~93.2%之间。病毒alpha卫星分子检测及分析显示,该样品中检测到的alpha卫星分子,其全长核苷酸序列与云南番茄黄化曲叶alpha卫星(tomato yellow leaf curl Yunnan alphasatellite, TYLCYnA)相似性最高,达到92.3%。研究结果表明云南雾水葛中分离到PouGMV,且异源伴随TYLCYnA卫星分子。这是雾水葛金色花叶病毒伴随alpha卫星分子侵染雾水葛的首次报道。

多枝雾水葛化学成分研究

目的研究多枝雾水葛Pouzolzia zeylanica var. microphylla醋酸乙酯部位的化学成分。方法采用95%乙醇回流提取,系统溶剂法对醇提物进行萃取,醋酸乙酯萃取部位通过正相、反相柱色谱,半制备高效液相色谱等方法进行分离,化合物通过波谱解析法确定结构。结果从多枝雾水葛醋酸乙酯部位分离鉴定了10个化合物,分别为(2R,3S,4R,5S)-2,5-二-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3,4-二-(3,5-二羟基苯基)四氢呋喃(1)、pouzolignan K(2)、saropeptide(3)、去氢吐叶醇(4)、对羟基苯甲酸(5)、异香兰酸(6)、原儿茶酸(7)、丁香酸(8)、原儿茶醛(9)、原儿茶酸乙酯(10)。结论化合物1为新化合物,命名为异雾水葛木脂素K,化合物3～10均为首次从该属植物中分离得到。

多枝雾水葛凝胶膏剂抗皮肤感染的药效学研究

目的:研究多枝雾水葛凝胶膏剂(Pouzolzia zeylanica var.microphylla gel,PZG)对皮肤感染性疾病的治疗作用。方法:建立金黄色葡萄球菌诱导的小鼠皮下脓肿模型和大鼠皮肤创伤性感染溃疡模型,通过检测体质量、皮肤脓肿体积或溃疡面积愈合率、皮肤细菌逆培养和局部皮肤病理形态、羟脯氨酸、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-10(interleukin-10,IL-10)含量等指标,考察PZG对感染性皮下脓肿和皮肤溃疡的治疗作用。结果:PZG能显著缩小皮下脓肿体积,提高皮肤溃疡面积愈合率,且有一定的量效关系;PZG可抑制皮肤感染部位的细菌生长,改善局部皮肤病理形态;PZG可降低溃疡部位TNF-α和IL-10水平,增加组织中羟脯氨酸的含量,促进溃疡愈合。结论:中药有效部位制剂PZG具有良好的抗皮肤感染作用,机制可能与其综合的抗菌、抗炎作用有密切关系。