江口萝卜猪钙调磷酸酶调节亚基编码基因(PPP3R1)多态性研究

钙调磷酸酶(CaN)对于肌纤维类型的转化起关键作用,所以其调节亚基(CnB)编码基因(PPP3R1)对于畜禽肉质性状有着重要影响。该试验以江口萝卜猪为研究对象,采用混合DNA池测序的方法研究钙调磷酸酶调节亚基基因(PPP3R1)外显子多态性。运用生物信息学分析软件预测了SNPs突变位点对基因编码的mRNA二级结构、蛋白质的理化性质、蛋白质二、三级结构的影响。结果表明,在江口萝卜猪PPP3R1基因中共检测到6个SNPs位点,分别为Exon2-T23>G、Exon3-G41>A、Exon3-T52>G、Exon3-C116>T、Exon4-A35>G、Exon6-T56>C。其中,Exon2-T23>G、Exon3-T52>G为错义突变,会导致氨基酸序列第9位和第32位的亮氨酸变为色氨酸。生物信息学分析发现,所有突变位点均不改变mRNA二级结构,但Exon3-T52>G和Exon3-C116>T突变会使二级结构最小自由能增加,导致稳定性降低。蛋白理化性质分析发现,CnB蛋白为较稳定的亲水性蛋白,不是分泌蛋白,两个位点突变后会增加其稳定性和亲水性。Exon3-T52>G位点对蛋白二、三级结构无影响,Exon2-T23>G位点则会导致蛋白二、三级结构的改变,稳定性略微降低。

江口萝卜猪PPP3CA和PPP3R1基因的表达规律研究

为探究PPP3CA和PPP3R1基因在江口萝卜猪不同生长阶段和组织中的表达规律,试验选取4个月龄阶段江口萝卜猪的9个组织,采用分子生物学方法检测2个基因的表达量。结果:(1)相同月龄时,PPP3R1基因在腰大肌、背最长肌中的表达量最高,显著高于其他组织;在心脏中表达量最低,显著低于其他组织;在肝、脾、肺、肾、胃、十二指肠6个组织中表达量差异不显著。PPP3CA基因在腰大肌、背最长肌、脾中表达量较高,显著高于其他组织;在其他组织中也有一定的表达量,除肾脏中相对较低以外,总体差异不显著。(2)不同月龄相同组织中,PPP3R1基因在除十二指肠外的大部分组织中表达较稳定;在背最长肌、十二指肠、胃、腰大肌中的表达量随月龄增加而升高,其中在十二指肠中的表达量随月龄的增加大幅上升,不同月龄差异显著。PPP3CA基因在背最长肌、心、腰大肌中的表达量随月龄的增加大幅上升,但随月龄的增加其上升幅度越来越小;在其他组织中除脾的表达量有小幅上升趋势之外,均未见明显随月龄变化的规律。结论:PPP3CA和PPP3R1基因在腰大肌、背最长肌中的表达量最高,并且随着月龄的增加而升高,说明PPP3CA和PPP3R1基因对江口萝卜猪腰大肌、背最长肌的生长发育有重要调控作用,由此推断对其他骨骼肌的生长发育也有类似作用。

芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血Ppp3r1及Atp5d基因表达变化的影响

目的:通过观察大鼠心肌缺血后,芪参益气滴丸对其缺血区组织中钙调神经磷酸酶B亚基(Ppp3R1)和ATP合成酶亚基δ(Atp5d)基因表达的影响,探讨芪参益气滴丸对急性心肌缺血的保护作用机制。方法:24只大鼠随机分为正常对照组、模型组、芪参益气滴丸组,结扎左冠状动脉前降支主干建立大鼠心肌缺血模型。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)法检测不同组间Ppp3r1和Atp5d基因表达变化。结果:与空白对照组比较,模型组Ppp3r1基因表达量明显升高(P<0.01),Atp5d基因表达量明显降低(P<0.05)。与模型组比较,芪参益气滴丸组Ppp3r1基因表达量降低(P<0.05),Atp5d基因表达量明显升高(P<0.01)比较差异均具有统计学意义。结论:芪参益气滴丸对急性心肌缺血的作用保护机制可能与其能够降低Ppp3r1基因表达量,同时调控Atp5d基因升高有关。

PPP1R3基因多态性与中国汉族人群2型糖尿病的相关性研究

目的 旨在研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异的糖原靶向调节亚单位基因 (PPP1R3)Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR5bpD/I多态性与安徽省汉人群的 2型糖尿病 (T2DM )相关性。方法 运用PCR -RFLP法对安徽省合肥地区 36 6例汉族受试者 (T2DM患者 2 6 2例 ,健康成人 10 4例 )进行基因型测定。结果 (1)PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR 5bpD/I多态性的基因型及等位基因频率在T2DM与健康对照组间分布均没有显著性差异 (P >0 .0 5 )。 (2 )PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及3′ -UTR 5bpD/I多态性间呈连锁不平衡 ,其分布频率在不同人群中不尽相同。结论 PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR 5bpD/I多态性可能在安徽省合肥地区 2型糖尿病发病中不起重要作用。两种多态性的分布表现明显的种族性。

PPP1R3基因3′非翻译区5bp缺失/插入多态性与安徽汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异糖原靶向调节亚单位 (PPP1R3)基因 3′ UTR 5bpD/I多态性与 2型糖尿病 (T2DM )及其中间表型的相关性。方法 选取安徽省合肥地区汉族T2DM患者 16 0例 ,健康成人 10 6例 ,运用聚合酶链反应片段长度多态性技术进行基因型测定。结果 ①PPP1R3基因 3′ UTR 5bpD/I多态性的基因型及等位基因频率在T2DM与健康对照组间分布差异没有显著性 (P >0 0 5 ) ;②不同基因型组间空腹血糖、血压、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数、体重指数、腰臀围比差异均无显著性 ,糖尿病组中基因型D/D的餐后 2h血糖显著低于基因型D/I、I/I(P=0 0 32 )。结论 PPP1R3基因 3′ UTR 5bpD/I多态性与安徽汉人

PPP1R3A基因多态性与中国维吾尔族人群精神分裂症关联性研究

目的探索蛋白磷酸酶1调节亚基3A(protein phosphatase 1 regulatory subunit 3A, PPP1R3A)基因外显子区域基因位点多态性与中国维吾尔族人群精神分裂症的关联性。方法利用多重PCR靶向捕获二代测序技术对528例维吾尔族精神分裂症患者及576名维吾尔族正常对照进行PPP1R3A基因外显子区域DNA扩增,Illumina HiSeq X Ten平台进行高通量测序,用阳性与阴性症状量表(positive and negative symptoms scale, PANSS)评估患者病情严重程度。结果患者组与对照组之间PPP1R3A基因rs1800000位点等位基因和基因型频率差异有统计学意义(P<0.05);rs1799999位点基因型频率在女性患者组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05);rs8192686位点在男性患者组与对照组间等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PPP1R3A基因rs1800000位点多态性可能与中国维吾尔族人群精神分裂症的发生发展存在关联性;rs1799999位点多态性可能与中国维吾尔族女性精神分裂症的发病有关联性;rs8192686位点C等位基因可能与中国维吾尔族男性精神分裂症发病有关联性。

外源胰岛素和能量限饲对鸡PPP1R3C表达的效应

旨在检测PPP1R3C在爱拔益加肉鸡不同组织中的表达情况,探究外源胰岛素和能量限饲对鸡体胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响。试验一,取不同发育阶段的雌性肉鸡(E14、E19、D7和D21,n=10)组织样,通过qRT-PCR技术检测PPP1R3C在不同时期胸肌中的表达;试验二,腹腔注射胰岛素(INS)或PBS,取两组注射后不同时间点(0、15、120和240 min,n=5)的D24雄性肉鸡组织样,检测PPP1R3C在肉鸡不同组织中的表达,探究外源胰岛素处理对肉鸡胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响;试验三,取D18雌性肉鸡,一组饲喂常规日粮(n=20),另一组饲喂限制30%能量的日粮(n=20),饲喂至48天屠宰取样,探究30%能量限饲对肉鸡PPP1R3C表达的影响;试验四,D7雌性肉鸡随机分为3组,对照组、15%能量限饲组和15%蛋白限饲组(n=10),分别饲养至D21屠宰取样,探究能量限饲是否具有剂量依赖性。结果表明:1)PPP1R3C在胸肌组织中高表达,其次是心和腿肌组织(P<0.05)。2)PPP1R3C表达量呈现了明显随鸡发育而升高的趋势。3)INS注射显著下调了胸肌中PPP1R3C的表达,在注射后120 min时PPP1R3C的表达显著低于0和15 min(P<0.05);PBS注射后胸肌中PPP1R3C的表达没有显著差异,在注射后120和240 min时,INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组(P<0.05)。INS注射也降低了肝中PPP1R3C的表达,在INS处理15 min时PPP1R3C的表达已显著低于0 min(P<0.05);PBS注射后肝中PPP1R3C表达处于动态平衡,在注射后120 min时,INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组(P<0.05)。胰岛素注射后在腹脂中出现了与胸肌和肝相反的结果,在胰岛素注射后15 min时PPP1R3C的表达显著高于0、120、和240 min(P<0.05),而0、120、和240 min之间没有显著差异;PBS注射后腹脂中PPP1R3C表达没有显著变化,在注射后15 min时,INS组PPP1R3C表达量显著高于PBS组(P<0.05)。4)30%能量限饲导致PPP1R3C在胸肌和肝中的表达均显著下调(P<0.05)。5)15%能量限饲和15%蛋白限饲不能显著影响胸肌中PPP1R3C的表达。以上研究表明,PPP1R3C在胸肌中表达最高,并随着个体发育表达上升,且外源胰岛素对PPP1R3C的表达效应具有明显的组织特异性。30%能量限饲可产生类似于外源胰岛素的效应,且能量限饲存在一定的剂量依赖性,本研究结果为进一步揭示鸡PPP1R3C功能奠定了基础。

PPP1R3基因表达对直肠癌预后的判定价值的研究

目的探讨PPP1R3mRNA基因突变与直肠癌预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测53例直肠癌癌肿组织、第一枚淋巴结和复发/转移灶中PPP1R3mRNA基因的表达。结果有62%(33/53)的直肠癌组织中出现PPP1R3mRNA基因的异常,而正常对照结肠壁组织无PPP1R3mRNA基因的异常。依据术后病理所确定的淋巴结有无转移状态,有淋巴结转移者PPP1R3mRNA基因突变率为66%(23/35),比无淋巴结转移者异常率高,差异有显著性(P<0.05);PPP1R3mRNA基因异常率与直肠癌患者的性别、年龄、癌肿的形态及部位无显著性差异(P>0.05),与癌细胞分化程度、TNM分期、癌肿的大小、浸润深度、有无局部及远处转移有显著性差异(P<0.05)。复发/转移组织中PPP1R3mRNA基因异常率更高。结论直肠癌PPP1R3mRNA基因异常与癌细胞的局部浸润和淋巴结转移的有无等生物学行为有一定相关,术前可用于判断直肠癌的局部浸润状况和淋巴结转移的有无、术后用于预测局部复发和淋巴结转移可能起到一定的判断作用,特别是对Ⅱ期者更有意义。

PPP1R3C基因在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的功能研究

为研究小鼠的蛋白磷酸酶1调节亚基3C(protein phosphatase 1 regulatory subunit 3C,PPP1R3C)基因在脂肪细胞分化中的功能,本研究以小鼠3T3-L1前脂肪细胞为材料,通过基因过表达、干扰及实时定量PCR等实验,分析了PPP1R3C基因对成脂分化的影响,并初步探讨了它对成脂分化影响的机制。结果显示,在3T3-L1前脂肪细胞中,过表达PPP1R3C基因,可促进脂肪细胞分化和成脂标志基因的表达;而敲低PPP1R3C基因的表达,则抑制脂肪细胞的分化和成脂标志基因的表达。进一步研究发现在3T3-L1中敲低固醇调节元件结合转录因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1,SREBP1)基因的表达,则PPP1R3C基因的表达也下调,提示PPP1R3C影响成脂分化可能是通过SREBP1对PPP1R3C的调控来实现的。以上结果表明,PPP1R3C对3T3-L1前脂肪细胞分化具有促进作用,PPP1R3C是一个新的成脂分化调控因子。

PPP1R3基因Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病相关性研究

目的 研究1型蛋白磷酸酶的骨骼肌特异糖原靶向调节亚单位基因(PPP1R3)Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病相关性。方法 选取安徽省合肥地区汉族2型糖尿病患者262例,健康成人104名,运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)进行基因型测定。以体重指数(BMI)25kl/m^2为分割点,将病例组和对照组进行分层分析。结果 PPP1R3基因Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病没有明显的相关性;以BMI<25kg/m^2基因型Tyr/Tyr组为参照组,BMI≥25kg/m^2携有Asp 905等位基因个体的糖尿病发病风险明显增加(OR=3.69,95％CI:1.38～8.89,P=0.006)。结论 PPP1R3基因Asp 905Tyr多态性可能不是安徽省汉族人群2型糖尿病主要的致病因素。肥胖与Asp905等位基因间的交互作用可增加糖尿病的发病风险。