猕猴桃病程相关蛋白PR-1基因的克隆和功能分析

【目的】探究猕猴桃病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)PR-1基因在响应丁香假单胞杆菌中的功能。【方法】以毛花猕猴桃(Actinidia eriantha)为材料,克隆得到PR-1同源基因AePR-1全长序列,并对其序列进行生物信息学分析。采用实时荧光定量方法检测AePR-1基因在不同组织、花器官以及接种细菌性溃疡病菌(Psa)和不同激素(SA、ABA、GA_(3))处理条件下的表达情况。利用亚细胞定位技术分析AePR-1基因在细胞中的表达位置。通过在本氏烟草中过表达AePR-1基因,验证其在溃疡病菌响应过程中的功能。【结果】猕猴桃AePR-1基因序列全长522 bp,编码173个氨基酸,序列中含有6个保守的半胱氨酸结构基序和4个allergen V5/Tpx-1 related保守结构域。亚细胞定位发现AePR-1定位在细胞膜和细胞质中。AePR-1在猕猴桃根和雌蕊中高表达,且能够响应溃疡病菌及激素处理。过表达AePR-1的烟草在接种溃疡病菌后,叶片病斑数明显少于对照组。【结论】AePR-1基因在溃疡病菌和激素诱导下显著表达且过表达能够增强烟草对溃疡病的抗性,说明猕猴桃PR-1基因在响应生物和非生物胁迫中具有重要作用。

番茄PR-1和PR-5基因的表达特性分析

分别克隆番茄PR-1和PR-5基因片段,并以之制备探针,采用Northern blot方法研究了PR-1和PR-5基因在正常生长条件下番茄根、茎、叶、果实发育中的表达模式,研究了干旱、复水和内外源乙烯对这两种基因表达的影响.结果表明:这两个基因主要在衰老叶片、B期果实和根部表达,干旱抑制了这两个基因的表达,复水和乙烯诱导其表达.

乳腺癌中BI-1基因与ER PR表达的关系及意义

目的:探讨乳腺癌BI-1基因与雌孕激素受体表达的关系及意义。方法:采用免疫组化S-P法检测48例乳腺癌及配对正常组织中BI-1的表达,并分析与ER、PR受体的关系。结果:乳腺癌及配对正常组织中BI-1表达阳性率分别为77.08%、18.75%,两组间相比有显著性差异(P<0.05)。ER阴性组BI-1表达阳性率高于ER阳性组,阳性率分别为94.74%和65.52%差异有显著性(P<0.05);PR阳性和阴性组之间的表达差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移组BI-1表达率高于未转移组(P<0.05)。结论:BI-1与ER的联合检测是判断乳腺癌患者预后的重要指标。

乳腺癌组织中bag-1、ER和PR的表达及意义

目的检测bag-1,ER和PR在乳腺癌组织中的表达与分布情况,探讨bag-1、ER和PR的表达水平在乳腺癌发病、早期诊断方面的价值。方法采用免疫组化SABC法观察了100例乳腺癌与35例乳腺良性肿瘤及10例正常乳腺组织的石蜡标本切片中bag-1,ER和PR的表达与分布情况。结果bag-1在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为85.0%,11.5%,10.0%,差异明显(P<0.05)。ER在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为61.0%,28.6%,30.0%,差异明显(P<0.05)。PR在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为64.0%,31.5%,30.0%,差异明显(P<0.05)。结论在乳腺癌发病过程中,bag-1,ER和PR可能起着重要的作用,同时检测bag-1、ER和PR的表达与分布情况,在乳腺癌的早期诊断方面有一定价值。

拟南芥PR-1基因启动子的克隆与植物表达载体的构建

根据已报道的拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)病程相关蛋白基因(PR-1)序列设计引物,通过PCR技术从拟南芥中扩增得到水杨酸诱导表达的PR-l基因启动子片段,序列分析表明,该启动子含910bp核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为99.7%。将该启动子构建到植物表达载体pBI121上,获得病程相关蛋白基因(PR-1)启动子驱动的GUS报告基因的植物表达载体pBI-pr1p,将其转入根癌农杆菌GV3101,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株,为深入研究寄主-病原物相互作用的分子机理奠定基础。

玉米须总皂苷对肥胖大鼠脂肪组织中UCP1和PRDM16表达的影响

目的：探讨分析玉米须总皂苷对高脂饮食喂养的肥胖大鼠棕色脂肪组织中解偶联蛋白-1（UCP1）和PR结构域蛋白16（PRDM16）表达的影响。方法：雄性健康清洁级SD大鼠共40只,在适应性喂养1周后随机分为正常对照组、模型对照组以及玉米须总皂苷低剂量和高剂量干预组,每组10只,给予高脂饮食12周后构建肥胖大鼠模型,治疗时玉米须总皂苷低和高剂量组分别给予玉米须总皂苷100、200 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常对照组和模型对照组给予1 m L·kg^-1·d^-1生理盐水灌胃,治疗12周后称重、处死大鼠,收集血清和棕色脂肪组织,检测血清血脂指标,HE染色检测棕色脂肪组织病理学,Real-Time PCR和Western Blot检测棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的m RNA和蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比,模型对照组大鼠体重明显升高（P〈0.05）,棕色脂肪组织重量和棕色脂肪组织重量/大鼠体质量明显降低（P〈0.05）,与模型组相比,玉米须总皂苷治疗后,大鼠体质量明显降低（P〈0.05）,棕色脂肪组织重量和棕色脂肪组织重量/大鼠体质量明显升高（P〈0.05）;与正常对照组相比,模型对照组血清葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇和HDL-C明显升高（P〈0.05）,LDL-C明显降低（P〈0.05）;与模型对照组相比,玉米须总皂苷治疗后,血清葡萄糖、甘油三酯水平、总胆固醇和HDL-C降低（P〈0.05）,LDL-C明显升高（P〈0.05）;与正常对照组相比,模型对照组棕色脂肪细胞分布明显减少,脂肪空泡数量明显增加,而玉米须总皂苷治疗后,脂肪空泡数量明显降低;与正常对照组相比,模型对照组大鼠棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的m RNA和蛋白表达明显降低（P〈0.05）,玉米须总皂苷治疗后表达明显升高（P〈0.05）。结论：玉米须总皂苷治疗12周可以明显降低肥胖大鼠体质量和棕色脂肪组织中的相对含量,这可能与其可以降低棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的表达有关。

TCDD暴露对子宫内膜异位症模型小鼠在位内膜组织PR亚型和DNMT-1表达的影响

目的探讨TCDD暴露小鼠子宫内膜异位症模型在位内膜DNA甲基转移酶-1(DNMT-1)、PR-A、PR-B的表达,以及PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。方法 60只C57BL/6雌性小鼠以2∶1与30只C3H雄性小鼠随机合笼交配,根据母鼠妊娠第8天和雌性子鼠出生后21 d所暴露TCDD的剂量(μg/kg)分为5组,0/0组、0/3组、3/0组、3/3组及3/10组。每组均为12只雌性子鼠。以上组别除0/0组外,均于出生后49 d再次暴露TCDD(3μg/kg),出生后第70天给予TCDD(3μg/kg)并实施自体子宫内膜移植术构建小鼠子宫内膜异位症模型,并且于术后3、6、9周各暴露1次TCDD(3μg/kg),术后12周取阴道脱落细胞将处于动情前期雌性子鼠脱臼处死。取其在位内膜制成蜡块,免疫组化SP法检测在位内膜DNMT-1、PR-A、PR-B的表达,以及甲基化特异PCR(MSP)检测PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。结果 (1)DNMT-1在3/3组中的表达显著高于0/0组(P<0.01),在3/10组中的表达显著高于3/3组(P<0.01);PR-B在0/0组中的表达显著高于3/3组(P<0.01),在3/3组中的表达显著高于3/10组(P<0.01);4组PR-A的表达经比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度3/3组中的表达高于0/0组(P<0.05),在3/10组中的表达高于3/3组(P<0.05);4组PR-A基因启动子区Cp G岛甲基化程度经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论自胚胎期至成年期持续暴露TCDD有可能通过上调在位子宫内膜DNMT-1的表达,从而使PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度增强,致使PR-B表达减弱,促进了内异症的发生与发展。

扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠模型免疫器官及生活质量的影响

目的探讨扶正汤治疗系统性红斑狼疮的有效性和机制。方法应用经典红斑狼疮小鼠模型MRL/1Pr小鼠,分为生理盐水对照组、中药组、中西医结合组、西药组,治疗6周。对小鼠精神状态、食量、体重、胸腺和脾脏指数进行观察和检测。结果中药组小鼠精神状态好、食量、体重、胸腺和脾脏指数均较对照组增加,西药组体重较其它三组减轻,胸腺和脾脏指数下降。结论扶正汤能改善红斑狼疮小鼠生存质量,并可能通过不同与激素的机制发挥免疫调节作用。

HIV-1 PR催化水解第3步机理的研究

在B3LYP/6-31G(d)水平下研究了HIV-1 PR催化水解反应关键性的一步,即第3步反应.模型体系包括了活化位点的3个残基,Asp25(25′)-Thr26(26′)-Gly27(27′)主要参加反应的基团,构建了由69个原子组成的较大模型体系.进一步研究表明Thr26(26′)和Gly27(27′)在水解反应中只起到保持活化位点平面构型的作用,并未直接参与水解反应.另外,详细分析了第3步反应的分子内及分子间氢键.

Ca_(1-x)Zn_xTiO_3∶Pr^(3+),R^+(R^+=Li^+,Na^+,K^+,Rb^+,Cs^+,Ag^+)的合成和发光性质

采用X射线衍射、荧光光谱和热释发光研究了Ca1 -xZnxTiO3∶Pr3+ ,R+ 的物相组成和发光性质。Pr3+ 取代Ca2 + 形成PrCa·正电性缺陷发光中心。激发光谱是峰值位于 3 3 0nm附近的宽带谱 ,发射光谱是峰值在 613nm半宽度为 2 0nm的带谱 ,对应Pr3+ 的1 D2 -3H4 跃迁发射。发光强度和余辉随基质组分Zn/Ca摩尔比和合成温度而变化。Zn2 + 的最佳含量在 10 %～ 2 0 %。X射线衍射研究表明掺入适量的Zn2 + 物相组成为CaTiO3,Ca2 Zn4 Ti1 5O36 和Zn2 TiO4 。热释发光曲线表明掺入Zn2 + 离子后体系中形成了新的缺陷ZnTi″ ,且ZnTi″的缺陷陷阱深度大于RCa′。

溶胶-凝胶法制备Li_(2+)_xPr_xSi_(1-x)O_3及其离子导电性研究

采用溶胶－ 凝胶法制备了Ｌｉ２＋ ｘ ＰｒｘＳｉ１－ ｘ Ｏ３（ｘ＝ ０～０１５），用ＤＴＡ、ＸＲＤ、ＴＥＭ 及交流阻抗仪等技术对样品的结构、形貌、粒径及离子导电性等进行了观察和测试。结果表明：其固溶体形成范围是０＜ ｘ≤００９，在固溶体范围内，样品电导率随掺杂量增加而增高；平均粒径为０１５μｍ ；与传统的固相合成方法相比，该法可使样品的生成温度降低，离子导电性提高。

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型血清P、PR、Th1/Th2细胞因子表达的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对大鼠流产模型蜕膜PR及Th1/Th2细胞因子表达的影响,同时观察血清P和PR的变化。方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,设菟丝子总黄酮高、低剂量治疗组、达芙通为阳性对照组,于孕12d处死各组大鼠,酶联免疫检测血清P和PRL的水平,免疫组化法检测蜕膜PR的表达,RT-PCR法检测蜕膜Th1/Th2 mRNA的表达。结果:模型组蜕膜IL-4、IL-10 mRNA及PR蛋白表达明显低于正常妊娠组,TNF-α、IFN-γmRNA表达明显高于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05),菟丝子总黄酮可上调流产大鼠蜕膜IL-4、IL-10、PR的表达,下调TNF-α、IFN-γ表达,同时可提高血清P的水平,其作用与孕激素达芙通相似。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节母胎界面内分泌-免疫网络平衡而起到维持早孕的作用。

DFT和ABEEM方法研究HIV-1 PR活化位点的化学性质

应用密度泛函理论计算并研究了HIV-1 PR活化位点的硬度、软度、化学势和电负性,分析了酶-水络合物、酶-抑制剂络合物及酶-抑制剂-水络合物的性质.在密度泛函方法研究的基础上,应用原子-键电负性均衡方法(ABEEM)计算研究了活化位点的电荷分布和Fukui函数值,分析了活化位点的化学性质,本研究也支持HIV-1PR的水解反应应有水分子的参与.

PRDM1和GATA2基因mRNA作为活动性结核和潜伏感染鉴别诊断标志物的可能性研究

目的活动性结核病的诊断仍然是结核病防治的重点和难点,差异表达基因有望成为结核病新的诊断靶标。本研究通过检测结核分枝杆菌不同感染状态下人外周血中PR/SET域1(PR/SET domain 1,PRDM1)和GATA结合蛋白2(GATA binding protein 2,GATA2)基因的mRNA表达,分析其作为诊断标志物的能力。方法收集活动性结核病患者、结核分枝杆菌潜伏感染者和健康人外周血,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中PRDM1和GATA2的m RNA水平,分析各组受试者PRDM1和GATA2基因表达差异及其鉴别活动性结核和潜伏感染的诊断能力。结果活动性结核病患者外周血单个核细胞中PRDM1和GATA2的表达显著低于潜伏感染者和健康人(H=69.27,P<0.0001;H=37.97,P<0.0001)。PRDM1鉴别诊断活动性结核和潜伏感染的曲线下面积为0.8967,灵敏度为80.22%,特异度为87.1%。GATA2鉴别诊断活动性结核和潜伏感染的曲线下面积为0.8061,灵敏度为82.35%,特异度为70.97%。PRDM1和GATA2联合诊断活动性结核和潜伏感染的曲线下面积为0.935,诊断的灵敏度为76.9%,特异度为100%。结论外周血单个核细胞中PRDM1和GATA2的mRNA表达水平是鉴别活动性结核和潜伏感染者的潜在标志物,有助于活动性结核的辅助诊断。

Pr^(3+)离子4f^15d^1组态的谱项推引

运用不同的方法详细推导了Pr3+4f15d1电子组态的光谱项,两种方法得到的光谱项完全相同,但是方法二更加简单、快捷。这对于研究Pr3+及其它镧系离子的真空紫外或紫外光谱具有重要的理论意义。

La_(1-x-y-z)Ce_xPr_yNd_zB_5电极材料组成的优化与设计

利用正交设计方法对ＡＢ５型混合稀土镍系合金电极材料Ｌａ１－ｘ－ｙ－ｚＣｅｘＰｒｙＮｄｚＢ５的容量、高倍率放电性能、循环寿命和电压平台等性能进行了实验测定，以进一步优化电极材料的Ａ组元，提高电极性能。通过模式识别对实验数据进行分类并据此设计了新的样本。利用人工神经网络方法对新样本的电性能进行了预报，结果与实验值基本一致，新设计的样本点具有比较好的电性能。

PR—1共聚物复鞣剂的研究

以水作溶剂,过氧化物为引发剂,用顺丁烯二酸酐和乙烯基类为单体。合成多元共聚物(PR—1)复鞣剂。PR—1属多官能团聚离子型复鞣剂,试产品经成都、四川、浙江、河南、山东、新疆等地制革厂家应用结果表明,PR—1是制造猪、牛、羊软革产品的优良复鞣剂。它具有使成革丰满、柔软、增厚明显。粒面细致、毛孔清晰、pH值使用范围宽,对染色影响小等优异性能。复鞣剂主要有天然聚合物及其改性产品和合成聚合物两大类。合成聚合物主要有聚丙烯酸类,聚氨酯类和顺丁稀二酸酐的共聚物。顺丁烯二酸酐与芳烃共聚物由于用芳烃作溶剂,有机过氧化物作引发剂,该产品不仅对环境带来污染而且成本高,使用受到限制。PR—1顺丁烯二酸酐与乙烯基单体共聚物采用水作溶剂,生产过程基本无三废,还具有原料成本低且性能优异的特点。

K_(x)Na_(1–x)NbO_(3):Pr^(3+)铁电体的光致发光和应力发光性能

应力发光材料具有应力-光转换特性,能在机械应力下产生发光,从而在光学信息显示方面具有很高的应用价值.本文通过改变铁电基体K_(x)Na_(1–x)NbO_(3)∶0.5%Pr^(3+)(K_(x)NNOP)的K^(+)/Na^(+)比来调节材料的晶体结构和缺陷分布,系统研究了K+含量对光致发光和应力发光性能的影响.研究结果表明,K+含量的增加使晶体对称性提高,导致K_(x)NNOP样品的光致发光强度降低.值得注意的是,在450 nm的光激发下,在K^(+)含量较高的组分中出现了Pr^(3+)电子3P1→3H5和3P0→3H5能级跃迁引起的发射峰,这归因于Pr^(3+)和Nb5+之间距离的变化导致Pr-O-Nb内价电子电荷转移态(IVCT)的能级位置不同.在压缩应力下,K_(x)NNOP(x=0,0.01,0.02,0.1)组分展现出明亮的红色应力发光,且应力发光强度随K+含量的增加而增大,其中K0.1NNOP组分表现出最高的强度发射.特别的是,其应力发光行为具有可重复性和可恢复性的特征.通过热释光曲线研究了K_(x)NNOP样品中的陷阱能级,揭示了K0.1NNOP中应力发光的增强可能与K+含量变化引起的陷阱密度和陷阱深度的差异有关.基于这些结果,建立了一个模型来阐述K_(x)NNOP中可能的应力发光机理.

卵巢颗粒细胞瘤中WT-1蛋白、AMH、ER和PR的表达及意义

目的探讨WT-1蛋白在卵巢颗粒细胞瘤(granulosa cell tumor,GCT)发生发展中的作用,研究它和抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在卵巢GCT中的表达及意义。方法用免疫组化方法研究WT-1蛋白、AMH、ER和PR分别在37例卵巢GCT和10例正常卵巢组织中的表达情况。结果WT-1蛋白、AMH、ER在卵巢GCT中的表达都明显高于它们在正常组织中的表达(P<0.05),且随组织分化程度与临床分期提高而降低,而PR的表达在正常组、不同分化组与不同临床分期组之间差异无统计学意义。WT-1蛋白和AMH的表达呈正相关关系,ER和PR的表达亦呈正相关关系。结论WT-1蛋白与卵巢GCT的发生发展无直接关系。它和AMH、ER可以作为卵巢GCT的辅助诊断指标,测定它们的表达可为诊断及判定预后提供理论依据。

乳腺癌发生过程中ER、PR、HER-2及WT1蛋白表达变化的研究

目的探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)及Wilms瘤基因1(WT1)在乳腺癌发生过程中的表达变化。方法收集2011年1月至2011年12月95例经活检病理组织学检查确诊的乳腺疾病患者(乳腺导管上皮增生22例、乳腺导管上皮不典型增生23例、导管内癌23例及导管内癌微浸润27例),取组织病理切片后采用免疫组化SP法检测ER、PR、HER-2和WT1蛋白的表达水平,分别观察在导管上皮增生、不典型增生、导管内癌和导管内癌微浸润4种乳腺癌不同分期水平中的表达情况。结果ER、PR在各组中的阳性表达率无明显差异;HER-2在乳腺导管上皮增生、导管上皮不典型增生、导管内癌和导管内癌伴微浸润中的阳性表达率分别为0(0/22)、4.3%(1/23)、34.8%(8/23)和51.9%(14/27),其表达逐渐增加(P<0.001);WT1的阳性表达率分别为31.8%(7/22)、60.9%(14/23)、13.0%(3/23)和22.2%(6/27),在不典型增生患者中最高,差异有统计学意义(P=0.002)。在导管内癌的患者中,ER、PR的表达与否(+/﹣)和WT1阳性率呈一定的相关性,ER或PR阳性表达者其WT1阳性率更高(P<0.05)。结论ER、PR表达的逐渐增加可提示乳腺癌的发生发展,而HER-2在乳腺癌的启动中发挥重要作用,WT1不仅发挥了癌基因的功能,同时也可参与肿瘤的侵袭和转移,促进其演进过程。