朊粒蛋白PrP^(Sc)寡聚体的形成与跨膜毒性

朊粒蛋白(prionprotein,PrP)传染致病机制一直是朊粒(prion)研究领域的焦点.由正常型朊粒蛋白(PrPC)向致病型朊粒蛋白(PrPSc)的转变是致病的关键步骤.本文综述了近年来PrPC向PrPSc转变的结构变化特征、PrPSc由单体形成寡聚体的组装机制、以及PrPSc寡聚体的跨膜机制与细胞毒性间的关系等方面的研究进展.

克雅氏病的实验室检测技术研究进展

克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)是一种在人类中最为常见的海绵状脑病,其致病因子为朊病毒。由于该病的致死率为100%,且具有传播风险,CJD的早期诊断对疾病防控具有重要意义。临床上一般依据患者的临床症状与体征以及相应的实验室检测来进行CJD的鉴别诊断。本文主要围绕现有的CJD实验室检测技术展开综述,包括朊病毒的直接与间接检测、疾病标志物的检测以及疾病相关基因PRNP的检测与分析等,旨在为进一步推广和规范CJD的实验室检测提供参考与技术依据。

散发性克-雅病PrP基因129密码子基因型与临床表型14例研究

目的 探索散发性克 雅病 (Creutzfeldt Jakobdisease,CJD)PrP基因 1 2 9位点密码子基因型与临床表型的关系。方法 对 1 4例散发性CJD患者进行PrP基因 1 2 9密码子的检测 ,并与临床表现进行了分析。结果 (1 )根据诊断标准 ,1 4例散发性CJD中 8例诊断为肯定CJD ,6例诊断为很可能CJD。 (2 ) 8例诊断肯定CJD组中 ,PrP基因 1 2 9位点密码子为甲硫氨酸纯合型 6例 ,甲硫氨酸 /缬氨酸2例。 6例诊断很可能CJD组的PrP基因 1 2 9密码子均为甲硫氨酸纯合型。 (3) 1 2例PrP基因 1 2 9位点为甲硫氨酸纯合型的患者以认知障碍起病 8例 ;共济失调 1例 ;视觉障碍 2例 ;肌阵挛 1例。病程最长 2 0个月 ,最短 2 5个月。病程中有癫痫 5例 ,肌阵挛 6例 ,视觉障碍 6例。 7例有典型周期性同步放电 (PSD)脑电改变。 (4) 2例甲硫氨酸 /缬氨酸型患者均以共济失调起病 ,2个月后才出现痴呆 ,病程分别为 1 6个月和 2 0个月 ,均无典型的PSD。结论 (1 ) 1 4例散发性CJD患者中 1 2例PrP基因 1 2 9密码子为甲硫氨酸纯合型 ,但临床表型不同。 (2 )本组散发性CJDPrP基因 1 2 9位点密码子甲硫氨酸 /甲硫氨酸 ,甲硫氨酸 /缬氨酸 ,分布比例与日本相同 ,但与西方不同 。

实验动物传递证实密码子129甲硫氨酸纯合子Heidenhain型Creutzfeldt-Jakob病

目的 为观察与证实Creutzfeldt Jakob病 (CJD)的特殊类型———Heidenhain变异型。方法 对 1例以视觉障碍为主要症状 ,并迅速发展为皮质盲的老年病人 ,通过脑组织活检、免疫组织化学染色、实验鼠传递以及PrP基因表达检测等进一步证实此诊断。结果 (1)临床症状以枕叶损伤表现和进行性痴呆为主 ;(2 )病程短 ,4个月死亡 ;(3)脑电描记早期出现周期性同步放电 ;(4)以朊蛋白 (PrP)多克隆抗体为第一抗体的免疫组化染色 ,发现脑内有异常PrP ,并呈突触型沉积 ;(5 )实验鼠传递 ,经 5 80d发病 ,于发病鼠脑内不仅有海绵状改变 ,而且也发现了异常PrP沉积 ;(6 )PrP基因检测为密码子 12 9甲硫氨酸纯合子型。结论 病人为典型Heidenhain型CJD。遇有老年人迅速发生视力障碍者应想到有本病的可能 ,迅速进展的痴呆和肌阵挛发作可以与枕叶梗死相鉴别。

SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价

朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白(PrPSc)的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立的PMCA技术可有效地反映白藜芦醇对PrPSc在体外复制的抑制作用。