先兆子患者胎盘组织滋养层细胞差异表达蛋白初步研究

目的:分析先兆子患者胎盘组织滋养层细胞差异表达蛋白,探讨差异蛋白与疾病发生的可能关系,为研究先兆子发病机制奠定基础。方法:分离、纯化、鉴定5例正常妊娠妇女和5例先兆子患者胎盘组织滋养层细胞,液氮反复冻融研磨提取细胞总蛋白。双向电泳技术对总蛋白进行分离,银染显色,获得蛋白质图谱。用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白。结果:正常妊娠及先兆子患者胎盘组织滋养层细胞总蛋白双向电泳各重复3次,得到重复性好的蛋白图谱。PDQuest软件进行图像分析发现,先兆子患者胎盘滋养层细胞有34种蛋白在质或量上存在表达增高或减少。结论:先兆子患者胎盘组织滋养层细胞中存在差异蛋白,这些蛋白在先兆子的发生过程中可能有重要作用。

子痫前期孕妇胎盘组织中PPAR、FABP-4的表达及其与孕妇预后的相关性

目的研究胎盘组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）及脂肪酸结合蛋白4（FABP-4）的表达，及其与子痫前期孕妇预后的相关性。方法收集2013年1月至2015年12月于解放军第九四医院分娩的177例孕妇的资料，其中足月未临产（TN）孕妇60例（TN组），足月未临产子痫前期（TPE）孕妇46例（TPE组），早产未临产（PN）孕妇42例（PN组），早产未临产子痫前期（PPE）孕妇29例（PPE组），采用实时PCR技术、蛋白印迹法分别检测4组孕妇胎盘组织中PPAR和FABP-4的表达，并使用双变量直线相关分析分别分析PPAR、FABP-4蛋白表达与子痫前期孕妇预后的关系。结果（1）实时PCR技术：①TN组与TPE组孕妇胎盘组织中PPAR-α、PPAR-β mRNA的表达，分别比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）；TPE组孕妇胎盘组织中PPAR-γ mRNA的表达（0.59±0.17）低于TN组（0.81±0.19），TPE组孕妇胎盘组织中FABP-4的mRNA表达（0.70±0.23）高于TN组（0.43±0.18），分别比较，差异均有统计学意义（P均〈0.01）。②PN组孕妇胎盘组织中PPAR-α、PPAR-β mRNA的表达与PPE组分别比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）；PPE组孕妇胎盘组织中PPAR-γ mRNA的表达（0.33±0.14）低于PN组（0.52±0.16），PPE组FABP-4 mRNA的表达（0.80±0.29）高于PN组（0.63±0.22），差异均有统计学意义（P均〈0.01）。（2）蛋白印迹法：①TN组孕妇胎盘组织中PPAR-α、PPAR-β蛋白的表达与TPE组比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）；TPE组孕妇胎盘组织中PPAR-γ蛋白的表达（0.46±0.17）低于TN组（0.65±0.20），TPE组FABP-4蛋白的表达（0.60±0.19）高于TN组（0.50±0.21），差异均有统计学意义（P均〈0.05）。②PN组孕妇胎盘组织中PPAR-α、PPAR-β蛋白的表达与PPE组比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）；PPE组孕妇胎盘组织中PPAR-γ蛋白的表达（0.30±0.16）低于PN组（0.61±0.16），PPE组孕妇胎盘组织中FABP-4蛋白的表达（0.58±0.19）高于PN组（0.40±0.19），差异均有统计学意义（P均〈0.05）。（3）双变量直线相关分析结果：①FABP-4蛋白的表达与PPAR-γ蛋白的表达呈负相关[P〈0.01，足月组（TN组及TPE组）R2=0.12，早产组（TPE组及PN组）R2=0.15]。②子痫前期组（即TPE组、PPE组）孕妇胎盘组织中PPAR-γ蛋白的表达与子痫前期孕妇剖宫产前24 h尿蛋白定量、产后血压恢复正常的时间、产后血脂恢复正常的时间呈负相关（R2分别为0.35、0.37、0.18，P均〈0.01）；FABP-4蛋白的表达则与子痫前期孕妇产前胆固醇水平、产后血脂恢复正常的时间呈正相关（R2分别为0.13、0.25，P均〈0.01）。结论子痫前期孕妇胎盘组织中PPAR-γ基因的表达下降，而FABP-4基因的表达上升，在同一胎盘组织中FABP-4的表达与PPAR-γ的表达呈负相关，且两者的表达与子痫前期孕妇的发病和预后相关。

应用血清蛋白质组学筛选子痫前期胎盘组织相关抗原

目的筛选子痫前期胎盘组织相关抗原蛋白,为研究子痫前期发病机制提供线索。方法病例来源于2008年1月至10月天津医科大学总医院妇产科分娩的孕妇,用筛选实验对8例重度子痫前期患者胎盘组织采用双向凝胶电泳(2-DW)的方法提取胎盘蛋白,用免疫印迹技术获得免疫印迹图谱,识别差异反应的蛋白质点,根据差异反应的蛋白质点位置在平行胶上找出匹配的蛋白质点,对相应的蛋白质点进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和数据库搜索。用验证实验选择子痫前期患者48例,其中轻度子痫前期24例,重度子痫前期24例。对照组为同期产前检查健康孕妇23例,采用ELISA方法检测子痫前期患者血清中纤维蛋白原beta链抗体、热休克蛋白70抗体的表达水平。结果筛选实验子痫前期患者胎盘组织2-DE分离后与患者自身血清免疫印迹反应,而与正常孕妇血清未见免疫印迹反应的蛋白点,经质谱鉴定分别为纤维蛋白原beta链(FBG-β)、热休克蛋白70(HSP70)、线粒体核糖体蛋白的可溶性结构蛋白以及细胞角蛋白9。验证实验证实FBG-βAb、HSP70Ab在子痫前期患者血清中表达升高。结论子痫前期患者体内存在针对胎盘组织相关抗原的体液免疫。这些胎盘抗原蛋白可能在子痫前期的发病中起重要作用。

重度子痫前期胎盘组织中差异表达蛋白研究

目的寻求与重度子痫前期发生相关的蛋白,为重度子痫前期发病机制研究奠定基础。方法选择2008年1～3月在天津医科大学总医院产科住院分娩的重度子痫前期患者及正常妊娠妇女各8例,采集正常孕妇和重度子痫前期患者的胎盘组织,提取总蛋白后进行双向电泳技术进行分离。蛋白质凝胶图像经PDQuest软件分析后,获得差异蛋白质点。对差异蛋白质点进行时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果与正常妊娠相比,重度子痫前期患者胎盘组织丰度差异表达相差2倍以上,并经Student's t-test检验差异有统计学意义的蛋白质点有14个(P<0.05),其中9个点在重度子痫前期组表达上调,另5个点表达下调。这些蛋白广泛参与细胞信号转导、细胞凋亡、应激反应、细胞结构、能量代谢等生理过程。结论重度子痫前期的发生中,胎盘组织可能存在独特的蛋白表达模式。