川牛膝MSAP反应体系的优化及引物筛选

目的:首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究,建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)最佳反应体系。方法:以川牛膝苗期叶片为材料,利用正交试验设计对川牛膝MSAP反应体系中预扩增和选择性扩增中关键影响因素进行考察,建立川牛膝MSAP反应最佳体系。结果:川牛膝MSAP最佳反应体系为:酶切体系(20μL),300 ng DNA、1.5μL Eco RI、1.5μL Hpa II或1.5μL Msp I(Hpa II);连接体系(25μL):15μL酶切产物、1μL Eco RI adaptor、1μL Hpa II/Msp I adaptor、0.2μL T4连接酶;预扩增体系(25μL):连接产物1μL、r Taq酶1 U、引物分别1.5μL、d NTP 2μL;选择性扩增体系(25μL):预扩产物稀释50倍、r Taq酶1 U、引物1.5μL、d NTP 3μL,并运用优化后的体系,最终从川牛膝MSAP的256对引物中筛选出有效引物6对。结论:优化后的体系保证了稳定的图谱、清晰的条带,筛选出的6对引物组合特异性好,能够用于后续川牛膝DNA甲基化相关实验研究,同时,为其他药用植物MSAP分析提供了参考。

pres基因打靶载体同源臂的PCR引物设计

目的:设计pres基因打靶载体同源臂的PCR引物。方法:在对pres基因结构和功能进行分析之后,选取目标扩增区域进行针对性的酶切位点分析,基于引物设计原则,在符合酶切位点要求的区域内设计同源臂PCR引物。结果:用于构建打靶载体同源长短臂的引物设计符合研究要求。结论:在考虑引物设计原则和酶切位点分析的基础上,可成功设计打靶载体同源臂PCR引物。

一个更加通用的抗体可变区cDNA体外扩增法

在对一组单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行体外扩增时，为了克服通用可变区引物的局限性，我们在ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ上合成固相ｃＤＮＡ，并采用一种称为“单引物预掺入ＰＣＲ”的新ＰＣＲ程序，即：在只有一侧引物存在的情况下，先让ＰＣＲ反应在低退火延伸温度下运转３个循环；追加另一侧引物后，转入常规ＰＣＲ循环。新方法扩展了“通用引物”的适用范围，并为引物设计和一些其它基因的ＰＣＲ放大提供了思路。

聚獒合环氧乙烷低表面处理防腐底漆的研发和应用

介绍了一种新型专门应用于钢结构和混凝土结构维修项目的低表面处理底漆涂料。该低表面处理底漆具有环保性能高、施工方便、附着力好,可有效作为带绣基层等其它St 3或St 2基层维修施工的预底漆。除了介绍其成分、机理,性能,也同时简介了施工注意事项,包括混合、施工方法和工具、涂布率和干燥时间等。

列可纳用作JHF预硫化丁基橡胶底涂料

经小试证明 ,列可纳可用作 JHF预硫化丁基橡胶底涂料 ,并已用于小面积施工衬里 。

水性预涂底漆应用预处理生产线改造方案

通过对一系列预处理生产线进行改造,满足了水性预涂底漆施工条件,实现了货车型材、板材预处理批量使用水性预涂底漆.

车用预涂防腐底漆钢板的研发和应用

介绍了车用预涂防腐底漆钢板在汽车制造过程中的研究和应用情况。

预涂卷材用耐水煮环氧底漆的研制

研制了预涂卷材用耐水煮环氧底漆,探讨了环氧底漆中固化剂、功能助剂和基板等因素对漆膜耐水煮性能的影响。研究结果表明:漆膜的水煮性能主要取决于底漆,同时与基板的类型也有一定的关系。

海上平台涂装施工中车间底漆保留条件的探讨

关于海上平台涂装施工中车间底漆是否保留,国内的相关标准并没有明确的要求。本文对几个与海上平台结构防护涂层相关的国际标准进行分析,结果显示,在一定的条件下,车间底漆可以成为涂层体系的一部分。并对车间底漆保留情况下需要满足的涂料配套性、涂装位置、对钢材预处理的要求及预处理检验等问题进行了介绍。

基于电磁感应加热装置的预处理线水性底漆快速干燥工艺

基于电磁感应加热装置加热钢板的基本原理,以铁路货车钢板预处理线为载体,进行钢板水性预涂底漆快速干燥工艺方案设计,方案包括电磁感应加热装置加热原理、电源频率选取、电源功率计算、干燥工艺流程、工艺布局图、控制流程图及应用注意事项。采用电磁感应加热装置的钢板预处理线水性预涂底漆快速干燥工艺方案,具有高效节能、低碳环保、占地小及易实现智能化控制等优点,相关技术方案可推广运用于钢板预处理线水性预涂底漆快速干燥。

两种全基因组扩增技术对单根毛发DNA检验效能的研究

目的研究简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR)和扩增前引物延伸PCR(primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR)对单根毛发检验的法医学价值。方法以三种方法对单根毛发样本进行STR分型,第一种方法直接对提取DNA用Profiler Plus试剂盒进行STR分型,第二种和第三种方法是先对提取的DNA样本分别进行DOP-PCR和PEP-PCR扩增处理,然后对其产物用Profiler Plus试剂盒进行STR分型,对两种方法的效能进行比较评价。结果 DOP-PCR和PEP-PCR技术增加了单根毛发STR分型的准确率和信息量。结论 DOP-PCR和PEP-PCR技术对单根自然脱落毛发的检验具有实用价值。

实验模型下两种全基因组扩增技术对指纹DNA检验的效能

目的对简并寡核苷酸引物PCR(Begenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR)和扩增前引物延伸PCR(Primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR)用于指纹检材DNA检验的价值进行研究。方法建立2种指纹检材DNA模型,分别用普通PCR、DOP技术和PEP技术三种方法对指纹DNA样本进行STR分型,对三种方法的效能进行比较评价。结果实验模型1条件下,三种方法均不能获得满意分型结果;模型2条件下,DOP和PEP两种方法可以增加STR分型的成功率和信息量。结论 DOP和PEP技术必须结合高效的DNA提取技术才能最大程度发挥其检验效能。

穿心莲MSAP反应体系的优化及引物筛选

为建立穿心莲甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitivity amplification polymorphism,MSAP)反应体系,本研究以穿心莲叶片为材料,提取总基因组DNA,采用L25(55)正交试验对穿心莲MSAP的预扩增和选择性扩增的相关参数进行了优化,并对MSAP引物进行了筛选,以期建立穿心莲MSAP最佳反应体系。优化后的体系具有稳定的图谱,清晰丰富的条带。运用优化后的体系,在穿心莲MSAP的80对引物中筛选出8对有效引物。筛选出的引物组合特异性良好,能够用于后续穿心莲甲基化的相关研究。为其他药用植物MSAP分析提供参考。

应用三引物荧光PCR-Sanger测序法检测FMR1全突变者和前突变携带者

目的检测脆性X综合征患者或携带者FMR1基因5′非编码区CGG序列的重复数。方法应用三引物荧光PCR-Sanger测序法检测一例男性脆性X综合征疑似患者和一名外表正常孕妇及胎儿羊水样本，并选择阳性对照和阴性对照进行可靠性验证。结果三引物荧光PCR-Sanger测序法可准确检出阴性及阳性对照的FMR1基因CGG的重复数。男性受检者CGG的重复数大于200，判断为全突变患者；孕妇CGG重复数为35和115，判断为杂合型前突变携带者；胎儿羊水CGG的重复数大于200，判断为男性全突变胎儿。经家属知情同意，对流产胎儿进行检测，证实了上述产前诊断结果。结论三引物荧光PCR-Sanger测序法可作为基层常规临床检测脆性x综合征患者／前突变携带者FMR1基因CGG重复数的快捷有效可靠方法，同时也适合在基层实验室用于大规模筛查前突变携带者候选人群。