PCR-RFLP检测HBeAg阴性preS1抗原阳性的HBV感染者前C区基因变异

目的探讨HBeAg阴性的HBV感染者前S1（preS1）抗原阳性与前C区基因G1896A变异发生频率的关系。方法用荧光定量PCR检测64例HBeAg阴性HBV感染者血清HBVDNA，ELISA法检测preS1抗原，以错配聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）分析HBV前C区1896位点的基因变异。结果64例血清中preS1抗原阳性25例（39．1％），preS1抗原阴性39例（60．9％）；25例preS1阳性的标本中23例（92．0％）HBVDNA阳性（19例≥10^3copies／ml，4例为10^2copies／ml，2例为检测限以下），有21例（84．0％）发生1896位点变异；39例preS1抗原阴性的标本中11例（28．2％）HBVDNA为10^2～10^3 copies／ml、17例（43．6％）发生1896位点变异。preS1阳性与阴性患者1896位点变异率有显著性差异（P〈0．005）。结论HBeAg阴性的HBV感染者中，preS1抗原不受前C区基因变异的影响，可以更客观地反映HBV复制状态。

哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。

肾组织preS1/S2-Ag检测在乙型肝炎病毒相关性肾炎诊断中的作用

目的:观察前S1/S2抗原(preS1/S2-Ag)及其它乙型肝炎病毒(HBV)抗原在HBV相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患者肾组织中的表达,探讨它们在HBV-GN诊断中的应用价值。方法:回顾性收集2003年1月～2013年1月于中山大学附属第三医院肾内科住院的患者,并符合以下入组标准:血清学HBsAg阳性;有血尿、蛋白尿等临床表现;经肾组织活检病理诊断为肾小球肾炎病变;排除合并有系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、糖尿病、丙肝等疾病。入组共49例。用免疫组织化学的方法对其肾组织石蜡切片进行preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检测。随机选取5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者作对照。结果:49例HBV感染合并肾小球肾炎患者中preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检出阳性率分别为32.7%(16例)、38.8%(19例)、14.3%(7例)和46.9%(23例),总阳性率为70.2%(36例);preS1/S2-Ag主要表达在肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞和内皮细胞胞质内;其表达与肾组织HBcAg的表达呈正相关(r=0.459,P<0.01)。5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,4种抗原均未检测到;5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者有2例表达HBeAg,1例表达HBcAg,无1例表达preS1/S2-Ag及HBsAg。结论:HBV-GN患者肾组织中检测到preS1/S2-Ag;preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg联合检测可提高HBV-GN的临床诊断率。

乙型肝炎病毒载量与血清学标志及preS1抗原的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)载量与血清学标志及preS1抗原的关系,为乙型肝炎的诊断、疗效评估提供科学依据。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测患者血清HBVDNA载量、血清学标志及preS1抗原。结果155例HBVDNA载量大于103拷贝/ml的标本中,preS1阳性136例,HBeAg阳性100例,两种检测指标间存在显著性差异(P<0·01)。preS1/HBeAg组合分析检测HBV复制的灵敏度100%、特异性78·1%。preS1或HBeAg阳性患者HBVDNA拷贝数显著高于preS1或HBeAg阴性患者(P<0·01)。结论血清preS1、HBeAg与HBV复制密切相关。作为反映HBV复制的指标,preS1优于HBeAg,preS1/HBeAg组合分析优于preS1,preS1/HBeAg在HBV的诊断和疗效评估方面有重要的临床应用价值。

HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者PreS1-Ag与HBV复制的关系研究

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）、HBV e抗体（抗HBe）、HBV核心抗体（抗HBc）阳性患者HBV前S1抗原（PreS1-Ag）与HBV复制的关系。方法采用化学发光微粒免疫法（MEIA）、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清肝炎标志物、HBV DNA载量和PreS1-Ag,并分析HBV DNA载量和PreS1-Ag的相关性。结果456例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者标本中HBV DNA与PreS1-Ag的符合率为88.37%,两者阳性率间差异无统计学意义（P〉0.05）。HBV DNA载量和PreS1-Ag吸光度之间显著相关（r=0.979 9,P〈0.01）。对176例HBV DNA和PreS1-Ag均阳性的标本进一步进行分段分析,HBV DNA载量在2×10^3 - 7×10^4拷贝/mL之间及对应的PreS1-Ag吸光度在0.105-1.696之间的数据相关程度更为密切（r=0.993 9,P〈0.01）。结论PreS1-Ag可能是一个很好的反映HBV复制的指标。

PreS1Ag、HBeAg和HBV-DNA的对比检测与分析

目的:通过对比检测和分析739份血清中preS1蛋白、HBeAg和HBV-DNA的检测阳性率,为临床正确选用实验室指标防治乙型肝炎提供依据。方法:应用ELISA法对739份血清进行PreS1Ag和HBV血清标志物检测,并与实时荧光定量PCR检测HBV-DNA结果进行比较。结果:所有739份血清中,PreS1Ag阳性率为34.6%(256/739),HBeAg阳性率为30.7%(227/739),HBV-DNA阳性率为58.9%(435/739)。227份HBeAg阳性血清中,PreS1Ag阳性率55.9%(127/227),HBV-DNA阳性率96.0%(218/227);512份HBeAg阴性血清中,PreS1Ag阳性率25.2%(129/512),HBV-DNA阳性率为42.4%(217/512)。HBeAg、HBV-DNA和PreS1的阳性率有显著差异(P<0.05),阳性率高低依次为HBV-DNA>PreS1>HBeAg;HBeAg阳性血清中PreS1Ag(55.9%)阳性率显著高于HBeAg阴性血清PreS1Ag(25.2%)阳性率(χ2=36.5,P<0.01);HBV-DNA阳性血清的PreS1Ag检出率58.9%(256/435)显著高于HBV-DNA阴性血清的PreS1Ag检出率18.4%(56/304)(P<0.01);PreS1抗原与HBV-DNA阳性符合率为(200/256)78.1%,阴性符合率为(248/483)51.3%。598份HBsAg阳性血清(阳性率为80.9%,598/739)中HBeAg、PreS1和HBV-DNA阳性数(率)分别是224(37.5%)、253(42.3%)、417(69.7%)。结论:PreS1Ag、HBV-DNA、HBeAg的阳性率有显著性差异(P<0.05)。作为HBV感染和复制的指标,以检测HBV-DNA最为可靠,而PreS1Ag可能较HBeAg更敏感。在HBV感染的不同时期,如何理解和使用上述指标对防治乙型肝炎有重要意义。

四川地区HBsAg阳性孕妇HBV血清免疫模式与PreS1-Ag、HBV DNA相关性分析

目的探讨四川地区HBsAg阳性孕妇HBV血清免疫模式与PreS1-Ag、HBV DNA之间的相关性。方法分别用时间分辨免疫荧光法、ELISA法对512例HBsAg阳性孕妇的血清进行HBV血清免疫模式、PreS1-Ag检测,同时采用实时荧光定量PCR检测HBV DNA。结果 512例标本中:A组(HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性)有178例,其血清中HBV DNA、PreS1-Ag阳性率分别为98.31%、96.62%;B组(HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性)有255例,其血清中HBV DNA、PreS1-Ag阳性率分别为41.17%、37.25%;C组(HBsAg、HBcAb阳性)有68例,其血清中HBV DNA、PreS1-Ag阳性率分别为35.29%、29.41%;D组(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBcAb阳性)有8例,其血清中HBV DNA、PreS1-Ag阳性率分别为87.50%、75.0%;E组(HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性)3例,其血清中HBV DNA、PreS1-Ag阳性率分别为66.67%、66.67%。结论 HBV DNA、PreS1-Ag符合率较高,联合检测HBV血清免疫模式、HBV DNA、PreS1-Ag,能更正确反映乙型肝炎病毒的复制状态和活跃程度。

联合检测preS1和HBcAg在慢性乙肝患者中的临床价值

目的:探讨联合检测preS1和HBcAg(均为HBV核酸相关抗原,nucleic acids related antigen,HBV NRAg)在慢性乙肝患者诊疗过程中的临床价值。方法:对568例慢性乙型肝炎患者血清及486例正常对照血清采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)进行DNA定量检测,酶联免疫吸附试验(ELISA)进行preS1和HBcAg(结果以HBV NRAg表示)的联合检测,同时检测HBV DNA、HBV-M、ALT、AST。结果:在568例慢性乙肝患者的血清标本中,HBV NRAg检出率为98.3%,HBeAg的检出率为37.4%,前者明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。1 054份血清标本中,HBV NRAg阳性组较阴性组,ALT、AST检出率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:联合检测preS1和HBcAg的HBVNRAg在筛选HBV感染及判断HBV复制方面具有较高的临床价值。

HBV-DNA、HBVpreS1-Ag、HBeAg之间的相关性分析与临床意义

目的为了观察HBV-DNA、HBVpreS1-Ag、HBeAg之间的相关性与临床意义。方法对120例HBV感染者采用ELISA法检测HBVpreS1-Ag与HBeAg,PCR法检测HBV-DNA。结果84例HBV-DNA阳性患者中,PreS1-Ag与HbeAg的阳性率分别为83.33%(70/84)和79.76%(67/84),二者无显著差异(P>0.05);48例HBeAg阴性患者HBV-DNA和HBVpreS1-Ag的阳性率分别为35.42%(17/48)和31.25%(15/48),明显低于阳性患者(P<0.05)。结论HBV-DNA、HBVpreS1-Ag与HBeAg之间有密切的相关性,联合监测对更好的早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断具有极其重要的意义。

核酸免疫可特异地诱发小鼠对乙型肝炎病毒表面抗原S+PreS1免疫反应

运用改造后的乙型肝炎病毒表面抗原Ｓ＋ＰｒｅＳ１融合基因（将ＰｒｅＳ１区肝细胞受体结合位点（２１－４７ａａ）编码基因融合到Ｓ蛋白Ｃ端２２３位残基下游），构建了一系列真核表达载体，并在ＣＨＯ细胞上有效表达了分泌型的、具有Ｓ＋ＰｒｅＳ１双重抗原性的融合蛋白颗粒。用上述质粒ＤＮＡ肌肉免疫Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，成功地检测到了抗－ＨＢｓ和抗－ＰｒｅＳ１抗体，加强免疫能显著改善免疫效果。本研究还建立了检测抗－ＰｒｅＳ１的竞争抑制法和羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法，两种方法符合率达９６％，但后者更为敏感。用羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法测得抗－ＰｒｅＳ１滴度最高可达１：１２８０以上。

PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映乙肝病毒复制的临床应用研究

目的比较PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映病毒复制的临床应用价值。方法对疑有HBV病毒复制的乙型肝炎患者血清标本分别采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA、时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)定量检测HBV-e抗原和HBV PreS1抗原。结果PreS1抗原阳性率87.5%(460/526)高于HBV-DNA71.1%(374/526),有显著性差异(χ2=46.3,P<0.001),PreS1抗原阳性率高于HBeAg 37.1%(195/526),有显著性差异(χ2=251.6,P<0.001),HBV-DNA阳性率高于HBeAg(χ2=161.8,P<0.001),有显著性差异。结论TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况。

酶联免疫法检测小儿乙肝PreS1抗原及抗体在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨酶联免疫法检测小儿乙肝病毒前S1蛋白(PreS1)抗原及抗体在小儿乙肝诊断中的应用价值。方法在2014年至2016年在本院接受诊断和治疗的乙肝患儿中,选择200例资料完整且接受两对半检查和酶联免疫法检测血清PreS1抗原及抗体的患儿作为研究对象,计算不同两对半检测结果患儿PreS1抗原及抗体阳性率,分析PreS1抗原阳性与HBV-M的Spearman相关性。结果 200例乙肝患者入选。18例乙肝大三阳患儿的PreS1抗原阳性及抗体阳性的检出率较高,均为83.33%。25例PreS1抗原阳性组患儿与175例抗原阴性组患儿HBsAg、HBeAg和HBcAb数据对比差异具有统计学意义,说明PreS1抗原阳性与HBsAg、HBeAg和HBcAb具有正相关关系,相关数值分别为0.620、0.550、0.720,P值分别为0.021、0.009、0.020。结论乙肝PreS1抗原及抗体阳性检测准确率相对较高,可以作为乙肝诊断的补充检验,为患儿的临床诊断和治疗提供依据。

乙型肝炎PreS1抗原、HBV DNA、HBeAg的相关性分析及临床应用

目的分析乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒PreS1抗原、HBV DNA和HBeAg的临床意义。方法采用双抗体夹心法检测前S1蛋白,采用荧光PCR法检测HBV DNA,采用ELISA法检测HBeAg。结果在1258例乙型肝炎患者中PreS1抗原阳性率为26.39%,HBV DNA阳性率为83.39%;在1049例血清HBV DNA阳性患者中,PreS1抗原阳性299例(23.94%),HBeAg阳性447例(42.61%);在PreS1抗原阳性患者中,HBV DNA阳性率为92.57%(299/332)。结论本组资料显示,PreS1抗原的检测无更多的临床意义。

乙型肝炎病毒S-preS1-C融合基因在酵母中的表达及抗原性分析

以HBV全基因组质粒为模板,扩增出目的区段:S(1-222AA),preS1(10-50AA)和C(2-30AA),以酶切-PCR的方法进行连接,克隆入表达载体pPIC3.5k,电穿孔转化后利用G418加压筛选出多拷贝整合菌株,诱导表达并对表达产物进行检测。结果显示融合后的基因为ss1c,长度约为906bp。在酵母中成功地进行了表达,表达产物(SSIC)的大小约为31kDa,并形成直径约为22nm的病毒样颗粒。表达产物与HBs抗体、preS1抗体和HBc抗体均有特异反应。为进一步研究治疗性疫苗提供了重要的基础。

乙型肝炎病毒PreS1抗原及抗体检测应用价值分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）前S1（PreS1）抗原及抗体检测的临床应用价值。方法于2013年3～11月，随机选择具有不同乙型病毒性肝炎（简称乙肝）两对半检测结果的患者120例进行PreS1抗原及抗体检测，分析PreS1抗原及抗体检测结果与两对半检测结果的关系。结果大三阳及小三阳患者 PreS1抗原阳性检出率为89％和7％，乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝核心抗体（HBcAb）阳性患者阳性检出率为14％，单纯 HBsAg阳性患者阳性检出率为5％。PreS1抗原与 HBsAg、乙肝 e抗原和 HBcAb具有一定的相关性。结论两对半联合PreS1抗原、抗体检测能够更灵敏、准确地反映乙肝患者的病情和预后，在HBV感染早期诊断方面也具有一定的临床应用价值。

HBcAg基因和PreS1(1～65)肽基因真核重组载体的构建和鉴定

目的：构建并鉴定包含人乙型肝炎病毒（HBV）HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。方法：采用PCR法扩增HBcAg基因，并通过基因突变在79～80位氨基酸处生成一个NheⅠ酶切位点，然后将这段基因连接到真核表达载体pIRES2-EGFP启动子下游的EcoRⅠ和BamHⅠ之间。同时PCR扩增PreS1第1～65氨基酸基因，并在其两端分别引入NheⅠ酶切位点，通过酶切、连接，将这段基因插入到HBcAg基因的NheⅠ酶切位点上。将构建的重组载体pIREScS1转化大肠杆菌DH5α，分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果：酶切鉴定示，插入片段大小均与预计相符。测序结果与已知序列结果一致。结论：成功构建了HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。

从噬菌体展示肽库中筛选PreS1抗原的结合肽

目的:从噬菌体随机七肽库中筛选能与PreS1抗原特异性结合的多肽。方法:利用噬菌体展示技术,以PreS1抗原为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和筛选,ELISA鉴定阳性克隆。结果:对肽库进行3轮筛选后,通过ELISA和竞争抑制ELISA,获得了特异性的结合肽,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列。结论:利用噬菌体展示技术成功筛选到了PreS1抗原的结合肽,为乙肝的治疗和诊断探索新的途径。

HBV感染者血清HBV PreS1抗原检测与病毒复制的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1抗原与HBV复制的关系。方法采用ELISA法检测HBV血清标志物和HBVPreS1抗原;采用荧光定量PCR方法检测HBV-DNA,对检测结果作分析。结果HBVPreS1抗原和HBV-DNA在HBeAg阳性标本组中的检出率明显高于其在HBeAg阴性标本组中的检出率(P<0.01);HBVPreS1抗原和HBV-DNA有较高相关性(P<0.01)。结论HBVPreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标(HBeAg和HBV-DNA)有良好的相关性HBVPreS1抗原的检测结果可以较好地反映HBV的复制情况。

血清乙肝病毒、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨血清乙肝病毒(HBV)、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的应用价值。方法选取2018年1月至2019年12月在本院进行治疗的414例乙肝患者作为观察组,再选取同期的414例健康体检者作为对照组。所有受检者均进行血清HBV五项定量检测、PreS1、PreS2抗原检测,分析检测结果。结果414例乙肝患者中,血清PreS1阳性、PreS2阳性、PreS1、PreS2均阳性在HBsAg、HBcAb(+)中的检出率均低于HBsAg、HBeAg、HBcAb(+),差异具有统计学意义(P<0.05);血清PreS1阳性、PreS2阳性、PreS1、PreS2均阳性在HBsAg、HBeAb、HBcAb(+)中的检出率均低于HBsAg、HBeAg、HBcAb(+),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组HBV、PreS1、PreS2阳性率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清HBV、PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中具有较高应用价值,能够为患者后期治疗提供有利依据,改善患者病情预后,值得进一步推广与应用。