猪BMSCs成脂分化中细胞膜钙离子通道、钙敏感受体及成脂定向相关基因表达研究

【目的】研究猪骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）定向分化为脂肪细胞过程中细胞膜上钙离子通道、钙敏感受体（Calcium-sensing receptor,Ca SR）基因及成脂定向相关基因的表达。【方法】从5~7日龄仔猪骨髓中分离纯化出猪BMSCs,诱导猪BMSCs成脂分化。油红O法和三酰甘油法检测细胞分化聚酯状况。在成脂分化不同时间（0、1、2、5和10 d）收集细胞,利用荧光定量PCR检测锌指蛋白423（Zinc finger protein423,Zfp423）、脂肪前体细胞因子（Preadipocyte factor 1,Pref-1）、骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein 2,BMP2）、骨形态发生蛋白4（Bone morphogenetic protein 4,BMP4）、细胞膜钙离子通道及Ca SR基因的mRNA表达变化。【结果】油红O染色和三酰甘油检测结果表明,成功诱导猪BMSCs成脂分化;定量PCR结果显示,在猪BMSCs成脂分化第5天,成脂定向标志基因Zfp423、脂肪前体细胞标志基因Pref-1及促进成脂分化基因BMP2、BMP4的mRNA相对表达量显著提高（P〈0.05）,说明第5天是猪BMSCs成脂定向形成脂肪前体细胞的关键时期;同时,细胞膜上的电压门控钙离子通道亚基电压依赖型α/δ亚型1（Voltage-dependentalpha-2/delta subunit 1,CACNA2D1）、钙释放激活钙通道调节分子1（Calciumr elease-activated calcium channel modulator 1,Orai1）、瞬时受体电位通道传统型1（Transient receptor potential canonical type 1,TRPC1）、瞬时受体电位通道M型7（Transient receptor potential melastatin 7,TRPM7）、瞬时受体电位通道香草素受体亚型1（Transient receptor potential vanilloid receptor1,TRPV1）基因和Ca SR基因在诱导成脂第5天mRNA相对表达量也显著提高（P〈0.05）,提示细胞膜钙离子通道及Ca SR基因可能参与了猪BMSCs成脂分化过程。【结论】揭示了猪BMSCs成脂分化过程中细胞膜钙离子通道、钙敏感受体及成脂定向相关基因的表达模式。