宫内感染致早产鼠脑瘫动物模型制备及其鉴定的实验研究

目的:探索宫内感染致早产鼠脑性瘫痪动物模型的制备方法,并对脑瘫动物模型进行鉴定。方法:脑瘫动物模型的制备:给予16只孕16、17天的实验组大鼠脂多糖每次350μg/kg,连续2天腹腔注射,8只对照组孕鼠腹腔注射同剂量的生理盐水。观察两组孕鼠的分娩时间及新生仔鼠出生体重。孕22天前分娩的仔鼠为早产鼠。将实验组中提前分娩的母鼠和对照组母鼠处死后,取子宫和胎盘HE染色观察。模型鉴定:①神经行为学检测:30日龄早产鼠16只,足月产鼠30只,分别进行随意运动障碍、姿势异常、肌张力异常、不自主动作、情感行为能力及倾斜板试验,记录各项评分并进行统计学处理;②病理学检测:30日龄早产鼠16只,足月产鼠16只,断头取脑,光镜与电镜下观察脑组织变化。结果:①实验组有6只大鼠提前分娩,共获活早产仔鼠26只;对照组均为足月分娩,产仔鼠74只。早产仔鼠出生后颜色青紫、活动少、体重低;②子宫及胎盘病理检测可见提前分娩母鼠子宫壁及胎盘内血管充血、水肿,并见大量中性粒细胞浸润;③16只30日龄早产鼠中,10只经鉴定为脑瘫鼠。④脑瘫大鼠随意运动障碍,姿势、肌张力异常,病理结果显示脑损伤部位在白质,系胶质细胞、髓鞘的损伤。结论:①孕鼠腹腔注射LPS可诱发早产;②LPS致宫内感染可成功制备早产鼠脑瘫动物模型;

神经行为学检测和改良BBB运动功能评定在脑瘫大鼠运动功能评定中的应用

目的:探讨脑瘫大鼠运动功能评价的最佳方法。方法:采用孕鼠腹腔注射LPS制备脑瘫动物模型,随机选取对照组(A组)足月仔鼠60只,LPS组足月仔鼠120只分为早期干预组(B1组)和非干预组(B2组)各60只。各组于生后25d进行神经行为学检测,B1组中检测出的CP鼠(B1CP组)继续早期干预,B2组中检测出的CP鼠(B2CP组)常规饲养,A组中随机选取10只鼠作为对照组(A′组);A′组、B1CP组和B2CP组仔鼠分别于25d及42d进行神经行为学检测和运动功能评定。结果:①25dB1组鉴定出7只CP鼠,B2组13只CP鼠,A组中无CP鼠。②B1CP组第25天与第42天各项检测结果比较:悬吊试验、斜坡试验、旷场实验、拒俘反应及改良的BBB运动功能评分均有显著性差异(P﹤0.01);B2CP组和A′组大鼠25d与42d各项检测结果比较无显著性差异(P﹥0.05)。结论:①神经行为学检测可有效鉴定CP大鼠的运动功能。②改良BBB运动功能评定适用于CP大鼠的运动功能评定。③联合应用神经行为学检测与改良BBB运动功能评定可全面反映CP大鼠运动功能状况。

宫内感染致脑瘫大鼠运动功能不同评定方法的比较

目的研究宫内感染致脑瘫大鼠运动功能评价的最佳方法。方法受孕17d的48只孕鼠脂多糖(LPS)450μg/kg腹腔注射(LPS组),对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水。随机选取对照组活产足月仔鼠60只(A组),LPS组活产足月仔鼠120只,将LPS组仔鼠随机分为干预组(B1)60只和非干预组(B2)60只。干预组进行早期干预,非干预组和对照组常规饲养。25日龄各组进行神经行为学检测,鉴定脑瘫鼠,B1组中检测出的脑瘫鼠(B1CP组)继续早期干预,B2组中检测出的脑瘫鼠(B2CP组)常规饲养,A组中随机选取10只鼠作为对照组(A′组)常规饲养,其余鼠常规处死;25日龄、42日龄时,A′组、B1CP组和B2CP组均进行神经行为学检测及运动功能评定。结果25日龄仔鼠神经行为学检测B1组中鉴定出7只脑瘫鼠,B2组中鉴定出13只脑瘫鼠,A组中无脑瘫鼠。B1CP组25日龄与42日龄各项检测结果比较,悬吊试验、斜坡试验、旷场实验、拒俘反应有非常显著性差异(P<0.01);改良的BBB运动功能评分有非常显著性差异(P<0.01);B2CP组和A′组25日龄与42日龄各项检测结果比较无显著性差异。结论联合应用悬吊试验与改良BBB运动功能评定法可用于宫内感染致脑瘫鼠运动功能的评定。

340例脑瘫患儿脑干听觉诱发电位的临床分析

目的:探讨脑瘫患儿脑干听觉诱发电位(BAEP)与脑瘫类型、合并损伤及高危因素的关系。方法:采用神经肌电诱发电位仪对340例脑瘫患儿行BAEP检查和分析。结果:脑瘫患儿BAEP异常率为22.9%,并发智力低下的异常率明显高于无智力低下的患儿(P<0.01);高危因素中宫内感染、黄疸和颅内出血与BAEP异常发生有密切关系,其中黄疸和宫内感染是高度危险因素;脑瘫并发听神经通路损伤的发生率较普遍,其中混合型和手足徐动型发生率更高。结论:宫内感染和病理性黄疸是脑瘫患儿听神经通路损伤的高度危险因素,BAEP应作为脑瘫患儿常规检查。

参脉注射液对早产仔鼠神经行为学方面的影响

目的:观察参脉注射液对宫内感染致早产脑损伤仔鼠神经行为学方面影响,探讨参脉注射液对宫内感染致早产脑损伤的影响,提出宫内感染所致脑瘫的中西医结合治疗的新理论。方法:采用孕鼠腹腔注射脂多糖造成宫内感染模型,将早产仔鼠随机分为:模型组、申捷组、参脉组、联合组,腹腔注射生理盐水组所生仔鼠为对照组。7日龄时开始分组用药,共14天。21日龄时对五组大鼠进行神经行为学检测。结果:干预用药均可改善早产仔鼠神经行为学的评分,其中联合用药组的作用最为明显。结论:参脉注射液可提高申捷对缺氧缺血脑病的脑保护作用。

脑瘫危险因素与损伤程度分析

目的研究脑瘫危险因素损伤程度的关系。方法回顾性分析795例脑瘫患儿临床资料,观察脑瘫危险因素、发现症状时间、康复情况与脑瘫严重程度的关系。结果不同脑瘫分型损伤程度差异有统计学意义(P <0. 05)。Spearman秩相关分析发现损伤程度与年龄、脑瘫诊断分型、黄疸史、早产呈正相关(rs值分别为0. 273、0. 164、0. 123、0. 084,P <0. 05)。损伤程度与年龄、开始进行康复时间相关(P <0. 05)。结论脑瘫运动功能损伤程度与就诊时年龄以及脑瘫的类型密切相关,另外严重程度还与早产以及有否黄疸史相关。从调查可以看出家长对于脑瘫的认识以及关注程度不够。

脑性瘫痪的病因学研究进展

脑性瘫痪的病因包括产前、产时和产后。国内学者一般认为,产时和产后的因素是脑瘫的主要原因,而近年来国外学者根据流行病学、生化检测、动物实验、影像学等研究认为,产前因素占脑瘫病因的大多数,并提出了界定产前或产后因素的客观指标。本文综述了脑瘫的主要病因,并介绍脑瘫病因学路径(etiological pathway)理论,以及脑瘫患儿脑损伤时期的确定等。

神经节苷脂钠对宫内感染致早产脑瘫模型仔鼠神经功能的影响

目的:探讨神经节苷脂钠(ganglioside sodium,GM)对急性宫内感染致早产脑瘫模型仔鼠生长发育及神经功能恢复的影响。方法:将40只SD宫内感染致早产脑瘫模型孕鼠用随机数字表法随机均分为模型组和治疗组,另取正常妊娠的20只SD孕鼠设为正常妊娠组。模型组和正常妊娠组尾静脉注射0.9%氯化钠溶液,治疗组注射GM,共7 d。5周后随机数字表法随机选取12只符合脑瘫标准的仔鼠对应设为模型组和治疗组,同法取12只正常妊娠组仔鼠设为正常妊娠组。观察各组胎盘湿重、仔鼠体长、体质量及存活仔鼠数;采用Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验观察各组仔鼠神经功能状况;采用ELISA试剂盒检测海马回脑薄片脑源性神经生长因子(brain-derived nerve growth factor,BDNF)和神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)蛋白及其基因表达。结果:治疗组胎盘湿重、仔鼠体长、体质量及存活仔鼠数高于模型组(P<0.05)。Morris水迷宫定位航行试验显示治疗组仔鼠游泳距离、逃避潜伏期和进入圆台象限时间低于模型组,游泳速度及目标象限时间比高于模型组(P<0.05)。空间探索试验显示治疗组进入圆台象限时间、初始角度、反向圆台逃避潜伏期和延时(75 min后)任务逃避潜伏期及ZeaLonga评分均低于模型组,第二象限停留时间和穿台次数高于模型组(P<0.05)。治疗组海马回脑薄片BDNF和NGF蛋白及BDNF mRNA、NGF mRNA高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GM可促进宫内感染致早产脑瘫模型仔鼠生长发育及神经功能的恢复,该药提高仔鼠海马回BDNF和NGF蛋白及其基因表达以修复受损神经元可能是其主要机制。

蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织PSD-95、NMDAR-2B表达的影响

目的:观察蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织突触后致密物95(postsynaptic density-95,PSD-95)、N-甲基-D-天冬氨酸受体-2B(N-methyl-D-aspartate receptor-2B,NMDAR-2B)表达的影响。方法:将18只SPF级雄性大鼠与36只雌性大鼠以12比例合笼饲养,雌鼠受孕后另外饲养。将36只怀孕母鼠分为LPS组(n=30)和对照组(n=6),LPS组孕鼠腹腔注射350μg·kg^(-1)的LPS制作宫内感染动物模型,然后记录孕鼠的分娩时间及新生仔鼠体重,胎龄<22 d为早产仔鼠。将80只LPS组早产仔鼠按随机数字表法分为4组,每组20只,分别为高剂量蒲金口服液组(25 g·kg^(-1))、低剂量蒲金口服液组(12.5 g·kg^(-1))、银杏叶提取物组(3 mg·kg^(-1))、模型组。随机选对照组正常分娩仔鼠20只,设为空白组。每组大鼠中的10只于仔鼠出生第0—7天进行早期药物干预,其余10只于仔鼠出生第7—14天进行晚期药物干预。HE染色观察新生仔鼠脑损伤状况;RT-PCR检测PSD-95 mRNA、NMDAR-2B mRNA表达水平;Western Blot检测脑组织中PSD-95及NMDAR-2B蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LPS组活产仔鼠数和仔鼠出生体质量均显著降低(P<0.05);LPS组孕鼠子宫壁充血,胎盘呈老化状态,绒毛间质纤维组织增生,毛细血管管腔变小,子宫和胎盘内可见炎性细胞浸润;LPS组仔鼠脑室旁白质结构稀疏,神经元排列紊乱,出现明显的结构缺陷,少量细胞出现核固缩、溶解的现象。与空白组比较,模型组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与同时期低剂量蒲金口服液组比较,高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与晚期干预比较,早期干预的低、高剂量蒲金口服液组PSD-95、NMDAR-2B蛋白及mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。结论:蒲金口服液在促进神经细胞恢复方面作用显著,其机制可能与促进PSD-95、NMDAR-2B的表达,改善突触后膜致密物积聚与修复,调节突触可塑性,保持突触的结构完整性有关,且早期、高剂量干预效果更显著。

血必净注射液对宫内感染致早产脑损伤仔鼠脑TNF-α和GFAP表达的影响

目的:观察血必净注射液对宫内感染致早产脑损伤仔鼠脑组织肿瘤坏死因子(TNF-α)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:①12只孕第16天脂多糖(LPS)组大鼠予LPS 450μg.kg-1,ip,连续2 d,8只生理盐水组孕鼠等量生理盐水ip。孕22 d前分娩的仔鼠为早产仔鼠。随机选取生理盐水组足月产仔鼠8只作为空白对照组和LPS组早产仔鼠24只。LPS组仔鼠随机分为3组,每组8只,分别为血必净高、低剂量(4,2 g.kg-1)组,模型组。7日龄时开始分别给予血必净注射液或生理盐水,ip,共14 d。②21日龄时对4组大鼠进行神经行为学检测(悬吊试验),并取脑组织,用免疫组化方法测定GFAP,TNF-α水平。结果:与模型组比较,血必净注射液高、低剂量组干预治疗后脑损伤仔鼠行为学方面得到改善(P<0.05);与模型组比较,血必净注射液高、低剂量组干预治疗后,早产脑损伤仔鼠脑组织TNF-α阳性表达减少而GFAP阳性表达增加(P<0.05)。结论:化瘀解毒中药血必净注射液可改善宫内感染所致早产脑损伤,其作用机制可能与降低脑组织TNF-α表达和使GFAP表达升高有关。

加强围生儿脑损伤研究降低脑瘫发生率

脑瘫（cerebral palsy,CP）是指在孕期至出生后1个月内新生儿大脑发生病变而引起的以非进展性中枢性运动障碍和姿势异常为主要表现的脑损伤综合征,可伴有智力低下、语言障碍、癫痫等并发症。脑瘫虽不是由产科医师诊断的疾病,但脑瘫发生原因与围产期因素密切相关。

早期干预对宫内感染致脑瘫大鼠运动功能影响的研究

目的:研究早期干预对宫内感染致脑瘫大鼠运动功能改善的影响。方法:采用孕鼠腹腔注射LPS制备脑瘫动物模型,随机选取对照组(A组)足月仔鼠60只,LPS组足月仔鼠120只分为早期干预组(B1组)和非干预组(B2组)各60只。各组于生后25天进行神经行为学检测,B1组中检测出的CP鼠(B1CP组)继续早期干预,B2组中检测出的CP鼠(B2CP组)常规饲养,A组中随机选取10只鼠作为对照组(A’组);A’组、B1CP组和B2CP组仔鼠分别于25天及42天进行神经行为学检测和运动功能评定。结果:(1)25天B1组鉴定出7只CP鼠,B2组13只CP鼠,A组中无CP鼠。(2)B1CP组25天与42天各项检测结果比较:悬吊试验、斜坡试验、旷场实验、拒俘反应及改良BBB运动功能评分均有显著性差异(P<0.01);B2CP组和A’组大鼠25d与42d各项检测结果比较无显著性差异(P>0.05)。结论:(1)联合应用神经行为学检测与改良BBB运动功能评定可全面反映CP大鼠运动功能状况。(2)早期干预可以明显改善CP大鼠的运动功能。

宫内感染致脑性瘫痪的机制研究进展

宫内感染是小儿脑性瘫痪最常见的病因之一，其对脑组织的损伤包括直接机制和间接机制。随着直接溶细胞感染、脑水肿和脑室扩大以及脑室管膜炎等直接机制的阐明，宫内感染所致脑性瘫痪的间接机制研究成为该领域的热点。除炎症介质和神经发育相关因子下凋学说外，胎盘分泌激素紊乱、Notch穿膜受体活性改变以及基因突变／缺失等也是导致脑损伤的重要因素，且各机制之间相互作用，形成网络化效应。