响应面法优化碱法提取狐臭柴叶多糖工艺及生物活性研究

优化狐臭柴叶碱溶性多糖(PLAP)提取工艺,探讨PLAP的体外抗氧化和抗肿瘤活性。采用狐臭柴叶经酸提取法提取的残渣为原料,在单因素基础上,利用响应面优化PLAP的提取工艺,通过抗氧化实验和抗肿瘤实验对PLAP的体外生物活性进行研究。结果表明:PLAP最佳提取工艺为:料液比1∶50 g/mL、NaOH浓度为0.25 mmol/L、提取时间110 min、此条件下PLAP提取率为(11.80±0.50)%。PLAP有较强的抗氧化活性,对DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基清除率IC 50值分别为12.38、3.22和0.18 mg/mL。同时细胞实验表明,PLAP在一定范围内抑制A549细胞和HepG2细胞的增殖与迁移,呈现剂量效应关系。本文为狐臭柴资源的充分开发、临床应用提供理论依据。

狐臭柴叶果胶的酸法提取工艺优化及其理化性质、抗氧化性和结构研究

目的 优化狐臭柴叶果胶酸法提取工艺,并评价果胶的理化性质、结构和抗氧化性。方法 以狐臭柴叶干粉为原料,采用酸法提取狐臭柴叶果胶,筛选出提取率较高的酒石酸为提取剂进行单因素实验和响应面优化,并分析最终产品的理化性质、抗氧化活性及结构特征。结果 各因素对果胶提取率的影响依次为:温度>p H>料液比>时间,最佳提取条件为:料液比1:60 (g/m L)、温度96℃、时间63 min、p H 1.60,在此条件下果胶提取率为27.10%,所得果胶为高酯果胶,其半乳糖醛酸含量、酸不溶灰分及干燥减量均符合GB25533—2010《食品安全国家标准食品添加剂果胶》要求。狐臭柴叶果胶的抗氧化活性与果胶浓度呈正相关,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基(·OH)的清除率分别为61.0%和53.2%。此外,扫描电镜显示果胶呈块状,结构疏松。结论 采用酒石酸提取狐臭柴叶果胶的提取率较高,且果胶具有较好的抗氧化活性。

狐臭柴叶类黄酮的提取及其抗氧化和抑菌活性研究

为了研究狐臭柴叶类黄酮不同极性萃取部分的抗氧化及抑菌活性,在单因素实验的基础上,通过响应面法优化得到最佳提取工艺。经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4种不同极性溶剂依次萃取狐臭柴叶类黄酮,得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物,并测定各萃取物中类黄酮含量及其抗氧化和抑菌能力。实验表明:狐臭柴叶类黄酮提取的最佳工艺条件是料液比为1∶40 g/mL,乙醇体积分数为77%,提取时间为15 min,此条件下提取率为14.93%。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水进行萃取得到的4种萃取物中类黄酮含量分别占狐臭柴叶类黄酮的2.92%、6.47%、4.37%、1.17%,乙酸乙酯萃取物对DPPH自由基和ABTS^(+)自由基具有较强的清除能力,半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值分别为0.03 mg/mL和0.07 mg/mL。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水进行萃取得到的4种萃取物均有抑菌效果,乙酸乙酯萃取物抑制效果显著(P<0.05),尤其对金黄色葡萄球菌抑制效果最为显著。该结果证实了乙酸乙酯萃取物能有效富集类黄酮,且抗氧化能力及抑菌效果好,为狐臭柴叶类黄酮提取及深度开发利用提供了一定的理论参考。

利用响应面法优化狐臭柴叶多糖提取工艺、单糖组成及生物活性研究

优化狐臭柴酸溶性多糖(PSAP)提取工艺,探讨PSAP的单糖组成和体外生物活性。以狐臭柴叶片为原料,经烘干、粉碎、脱脂、脱色等前处理,在单因素基础上,利用响应面优化PSAP的提取工艺,采用高效液相色谱仪(HPLC)测定单糖组成,通过体外抗氧化活性试验和肿瘤细胞试验对PSAP的体外生物活性进行研究。结果表明:PSAP最佳提取工艺为提取温度100℃、液料比1∶31 g·mL^(-1)、提取时间240 min、草酸-磷酸氢二钠pH为2,此条件下PSAP提取率为(31.04±0.21)%。PSAP主要由8种单糖组成,峰面积占比分别为甘露糖0.22%、鼠李糖6.13%、葡萄糖醛酸4.58%、半乳糖醛酸31.98%、葡萄糖18.31%、半乳糖9.9%、阿拉伯糖10.23%和岩藻糖4.09%。同时PSAP具有较强的体外抗氧化活性能力,对铁离子有一定的还原能力,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基和2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基具有较强的清除能力,IC_(50)值分别为3.69、2.91、0.43 mg·mL^(-1)。经细胞试验表明,PSAP对A549和HepG2细胞的增殖和迁移均具有显著性抑制效果,并呈现一定剂量依赖性。本研究结果为狐臭柴多糖提取工艺、食品开发以及临床应用提供了理论支撑。

狐臭柴扦插繁殖技术初步研究

用一、二年生狐臭柴插条作试验材料,设置扦插基质、光照强度及生根粉浓度3个因素各3个水平进行正交试验,以筛选狐臭柴扦插繁殖的适宜条件。结果表明:光照水平和生根粉浓度是影响狐臭柴扦插成活的关键因子。6 mg/L生根粉处理后的二年生插条扦插于壤土中,在透光率为20%～25%遮光条件下成活率最高,可达78.33%,且二年生插条较一年生的平均成活率高16.66%。

溶液培养对狐臭柴植株生长及叶片神仙豆腐的影响

以一年生狐臭柴春枝为插条,于室温下在不同营养液中进行通气培养。通过对不同营养液中培养材料的形态、生理生化以及叶片制成的神仙豆腐的产量品质等指标进行考查。结果表明:1/10 Hoagland营养液培养的狐臭柴插枝的叶片可溶性糖和果胶含量以及神仙豆腐产量均较高;1/10 Hoagland+0.05 mg/L NAA营养液对狐臭柴插枝的根和叶生长均有显著促进作用,用其叶制成的神仙豆腐品质较好。综合各项指标得出结论:通过离体培养狐臭柴枝条获得叶片、制作神仙豆腐,其适宜营养液配方为1/10 Hoagland+0.05 mg/L NAA。

狐臭柴叶片中果胶提取条件的初步研究

以狐臭柴叶为原料、柠檬酸为酸解液提取果胶,采用单因素实验、正交实验对酸浓度、提取温度、料液比和提取时间等条件进行探索,并以响应面实验设计方法进行工艺优化。结果表明:酸浓度和料液比是影响果胶酸解的主要因子;一定范围内,酸浓度与果胶粗产率(Y1)呈线性正相关,料液比与果胶粗产率(Y1)呈线性负相关,二者与粗果胶半乳糖醛酸含量(Y2)的关系符合二元二次多项式方程模型,但随着酸浓度的增加和料液比的降低,半乳糖醛酸含量有下降趋势;半乳糖醛酸提取率(果胶有效提取率Y3)的拟合效果是一个平均值模型,即Y3=8.86%。在提取温度、提取时间分别为90℃和120 min,响应面的优化条件为酸浓度3.91%、料液比1∶44.09时,果胶粗产率、半乳糖醛酸含量和果胶有效提取率分别为36.72%、32.09%和11.78%。

Plackett-Burman联用响应面法优化超声波-酸法提取狐臭柴果胶工艺

探究超声波-酸法果胶提取工艺条件并分析狐臭柴叶片果胶分子结构与理化性质。通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法进行优化。结果表明,影响果胶提取的关键因素为pH、液料比、超声功率和反应时间。优化得到的工艺参数为pH值1.9、液料比12.5∶1(mL∶g)、超声功率450 W、反应时间95 min,在此条件下果胶得率为11.53%。通过高效液相色谱法对果胶分子质量进行测定,其重均分子质量(weight-average molecular weight,M w)为87.90 kDa,数均分子质量(number-average molecular weight,M n)为56.06 kDa,M w/M n为1.57。狐臭柴果胶中的单糖有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和果糖,其中半乳糖醛酸含量为70.64%,酯化度为77.77%,属于高酯果胶。狐臭柴果胶有很好的凝胶和增稠功能,且DPPH自由基清除率EC 50为(269.31±0.26)μg/mL,有良好的抗氧化活性。

UPLC-Q-TOF/MS/MS法分析长柄臭黄荆醇提物化学成分

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF/MS/MS)鉴定长柄臭黄荆醇提物化学成分。方法:采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 mm×100 mm, 1.8μm)色谱柱,流动相(0.1%甲酸水溶液-乙腈)梯度洗脱,使用AB Sciex Triple TOF■ 4600高分辨质谱。基于ESI正、负离子采集模式获得MS并进行数据分析。在此基础上,根据成分保留时间结合Natural Products HR-MS/MS Spectral Library 1.0数据库进行匹配及相关文献报道进行结构鉴定。结果:从长柄臭黄荆醇提物中共鉴定出53个化合物,其中黄酮类19种,酚酸类16种,苯乙醇类5种,脂肪酸类6种,杂环类化合物7种。结论:UPLC-Q-TOF/MS/MS可快速鉴定长柄臭黄荆醇提物的化学成分,为长柄臭黄荆质量控制、发现新化合物和有价值的药用成分提供依据。

不同叶面肥对狐臭柴叶片生物量和主要生化指标的影响

以三年生狐臭柴为实验材料,设置自然光和遮光两种光照条件,用三种叶面肥进行喷施,分析不同肥料对狐臭柴叶片生物量和主要生化指标的影响。结果表明:喷施氮肥能显著提高狐臭柴叶片生物量,自然光及遮光下分别增加37.30%和15.02%,但果胶的积累减少,分别降低19.78%和17.35%;磷肥能显著提升叶片果胶的含量,分别增加158.08%和239.96%,但叶片生物量显著低于对照,分别降低55.83%和47.40%;复合肥对叶片生物量无明显影响,果胶含量轻微降低。各肥料均使可溶性糖含量降低,且在遮光条件下使叶片内可溶性蛋白含量增加,自然光下使可溶性蛋白含量降低。

狐臭柴中精油GC-MS测定及其抑制肺癌细胞增殖的研究

目的研究狐臭柴Premna puberula叶片精油的化学成分、含量、抗氧化、抑菌及抗肿瘤的能力,为狐臭柴开发利用提供一定的研究基础。方法采用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用仪鉴定狐臭柴叶片精油的化学成分;以对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除能力,结合总还原力为指标评价精油的抗氧化活性;以抑菌圈法探究其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、白色念珠菌的抑制作用;采用细胞增殖/毒性检测试剂盒法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)测定其对人肺癌A549细胞的抑制作用。结果狐臭柴叶片精油中共鉴定出72种化合物,约占精油总成分的99.36%,其主要成分为左旋-β-蒎烯(15.27%)、1-辛烯-3-醇(14.46%)、蒎烯(14.29%)、1-石竹烯(6.26%)、α-石竹烯(4.47%)和芳樟醇(3.12%)。抗氧化实验结果表明,狐臭柴叶片精油具有较强的总还原力,且对DPPH及ABTS自由基的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50))分别为8.48、3.10 mg/m L。狐臭柴叶片精油对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌有较强的抑菌作用,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)分别为30%、30%、30%、40%。狐臭柴叶片精油作用于人肺癌A549细胞3、4、5 h下的IC_(50)分别为0.11%、0.10%、0.06%。结论狐臭柴叶片精油中成分丰富,具有较强的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,在食品、制药和化妆品行业具有潜在的应用前景。

狐臭柴茎挥发油体外抗炎活性及基于NF-κB和MAPKs信号通路作用机制的研究

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响;qRT-PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;Western blot测定挥发油对iNOS、COX-2、NF-κB和MAPKs信号通路蛋白的影响。结果:从挥发油中共鉴定出74种化学成分,其中主要的化学成分是茅术醇(13.50%)。挥发油显著抑制NO、TNF-α和IL-6的分泌(P<0.01),同时降低了促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和促炎酶(iNOS和COX-2)的mRNA表达水平(P<0.01)。Western blot研究表明挥发油能下调NF-κB信号通路细胞核p65蛋白表达、p65和IκBα磷酸化(P<0.05或P<0.01)。此外,还降低了MAPKs信号通路p38、JNK和ERK蛋白的磷酸化(P<0.01)。结论:狐臭柴茎挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。