Separation of Peptides by Pressurized Capillary Electrochromatography

A novel gradient pressurized capillary electrochromatography (pCEC) instrument was developed to separate peptides. Two gradient elution modes, hydrophobic and hydrophilic interaction mode in pCEC, were performed on this instrument. Baseline separation of six peptides was obtained on two gradient modes with C18 column and strong cationic exchange column respectively. The effects of mixer volume and total flow rate of pumps on resolution were also discussed.

Determination of N-Methylcarbamate Pesticides in Vegetables by Solid-phase Extraction and Pressurized Capillary Electrochromatography

Capillary electrochromatography （CEC） is a hybrid technique that couples the good selectivity of high-performance liquid chromatography （HPLC） and the high separation efficiency of capillary electrophoresis （CE）. Both charged and uncharged compounds can be separated effectively using CEC. In some cases, however, the bubbles that generated in the capillary column in pure CEC performed on commercial CE instruments will cause unstable current and even disrupt the separation when the concentration of buffer is very high. By applying pressure on the electrochromatographic separation via a micro-HPLC pump, pressurized capillary electrochromatography （ pCEC ） combines two driving factors of the electroosmotic flow （EOF） and the pressure flow, thereby increasing the speed and the selectivity of separation and suppressing the bubble formation. Moreover,

pCEC法检测运动营养品中吡咯并喹啉醌的含量

建立一种快速、高效的加压毛细管电色谱法检测运动营养品中吡咯并喹啉醌含量的分析方法。样品经20%的乙腈溶液提取后,以乙腈-15mmol/L pH4.7磷酸钾缓冲液(15∶85,v/v)作为流动相,260nm检测波长下检测,在电压强度+2kV条件下,外标法峰面积定量。结果表明,吡咯并喹啉醌标准溶液在0.05μg/mL~2.00μg/mL浓度范围内线性良好,相关系数R2为0.9995,检出限为0.5μg/kg,定量限为1.5μg/kg,加标回收率达到86.4%~98.2%,相对标准偏差(RSD)为2.17%~4.35%。该方法具有前处理简单、检测速度快的优点,适用于运动营养品中吡咯并喹啉醌含量的测定。

Separation of Basic Drugs Using Pressurized Capillary Electrochromatography

A novel pressurized capillary electrochromatography (PCEC) was developed to separate basic drugs on strong cation exchange (SCX) column. The separation result by using PCEC was better than that by using micro-HPLC. The effects of electrical field and pressure on plate height and resolution were investigated. Influences of organic modifier, ionic strength and pH value of buffer on retention behavior were evaluated, and the separation mechanism was also discussed.

Advances in Capillary Chromatography

Capillary columns are used in both capillary liquid chromatography and capillary electrochromatography. The design for capillary liquid chromatography is discussed in comparison with capillary gas chromatography. The difference of diffusion coefficient in gas and liquid phase is a key role. The study for obtaining a high performance capillary liquid chromatography is discussed. Capillary electrochromatography is recently interesting for its instinct ability to realize a high performance chromatography. Capillary electrochromatography with and without pressurized flow is reviewed briefly. Instrumentation for capillary electrochromatography with pressurized flow is discussed. The port of splitting, and gradient elution of both solution and potential are described. The new findings of both the variation of column resistance and capacity factor according to the value of applied electric voltage are also discussed.

毛细管电色谱和加压毛细管电色谱的进展与应用

毛细管电色谱(CEC)以内含色谱固定相的毛细管为分离柱,以电渗流为驱动力,既可以分离带电物质也可以分离中性物质。它结合了毛细管电泳和高效液相色谱两者的优点,兼具高柱效、高分辨率、高选择性和高峰容量的特点,同时具有色谱和电泳的双重分离机理。然而,"纯粹"的电色谱在实际应用中有着天然的弱点,即:在电流通过毛细管柱中的流动相时容易产生气泡(焦耳热作用),从而使电流中断和电渗流停止,毛细管柱必须被重新用流动相润湿后方能再次使用。加压毛细管电色谱(pCEC)将液相色谱中的压力流引入CEC系统中,不仅解决了气泡、干柱等问题,而且实现了定量阀进样和二元梯度洗脱。CEC和pCEC作为微分离领域的两种前沿技术,满足了当前复杂样品分析和分析仪器微型化的需求,近年来获得了广泛的关注。本文综述了这两种技术近来的发展,包括仪器、色谱固定相的发展,总结了其在生命科学、药物分析、食品安全以及环保样品分析等方面的应用进展,评述了各方法的特点,并展望了CEC和pCEC今后的发展和应用前景。

新型亲水整体柱的制备及其在毛细管液相色谱和加压电色谱中的应用

以N,N-二甲基-N-甲基丙烯酰胺基丙基-N,N-二甲基-N-丙烷磺酸内盐(SPP)为单体,季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂及两类不同的致孔剂(乙醇/乙二醇和甲醇/1,4-丁二醇)制备了两种新型亲水性整体柱。为了获得理想的柱效、电渗流速度和渗透性,对制备整体柱的各反应物配比进行了研究和优化。比较了两种整体柱在渗透性和分离样品方面的性能,结果表明,以乙醇/乙二醇为致孔剂制备的整体柱在柱效、分离度方面优于以甲醇/1,4-丁二醇为致孔剂制备的整体柱,但在渗透性方面不及后者。探讨了流动相中盐浓度对核苷类样品保留的影响,发现当甲酸铵浓度从10 mmol/L增加到70 mmol/L时,核苷样品的保留因子呈现先增加后减小的状态。将制备的整体柱用于毛细管液相色谱和加压电色谱分别分离胺类、酚类和核苷类样品,获得了理想的分离效果。在分离酚类和核苷类混合样品时,发现加压毛细管电色谱在分离度和分离速度上均优于毛细管液相色谱。

手性毛细管电色谱拆分比索洛尔、阿替洛尔、克仑特罗和特布他林

以万古霉素(vancomycin)毛细管柱为手性分离色谱柱,采用CLC和pCEC方法,对比索洛尔、阿替洛尔、克仑特罗和特布他林进行了手性拆分研究。在CLC方法中,上述4种物质均在甲醇/异丙醇/三乙胺/冰醋酸(60/40/0.05/0.1,V/V)条件下获得最大分离,分离度(Rs)分别为1.9、1.4、1.1和0.9。在pCEC方法中,采用极性有机模式时,Rs分别为1.9、1.4、1.5和1.5;采用反相模式时,Rs分别为2.0、1.7和1.2,而特布他林则未获分离。该方法能有效拆分比索洛尔、阿替洛尔、克仑特罗和特布他林,而且CLC、pCEC极性有机模式和pCEC反相模式之间有着较强的互补关系。

以聚乙二醇/甲醇为二元致孔剂的新型磺酸甜菜碱型两性离子亲水毛细管整体柱的合成与色谱评价

使用新型二元致孔剂聚乙二醇(PEG)/甲醇,以N,N-二甲基-N-甲基丙烯酰胺基丙基-N,N-二甲基-N-丙烷磺酸内盐(SPP)为单体,季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,通过原位聚合法制备磺酸甜菜碱型两性离子亲水毛细管整体柱。对各反应物的配比进行了优化。结果表明,当单体与致孔剂的质量比为1∶2.5,并且致孔剂中PEG与甲醇的质量比为1∶2,单体内部SPP与PETA的质量比为1∶1,AIBN为总质量的0.1%时为最优配比;PEG/甲醇二元致孔剂的加入实现了对整体柱内部孔径大小的调节,得到了结构更为均一,渗透性、机械稳定性良好的毛细管整体柱,并且理论塔板数与传统制备方法相比有显著提高,在毛细管液相色谱模式下最高可达2.4×105塔板/m。将制备的整体柱应用于毛细管液相色谱和加压毛细管电色谱分离酚类、核苷类等极性小分子混合物,得到了很好的分离效果。

压力对加压电色谱分离选择性影响的研究

基于弛豫理论的基本原理 ,通过对溶质在加压电色谱中输运过程的研究 ,得到了溶质多种形态同时存在情况下反映其色谱行为与电泳行为对迁移时间影响的理论表达式。进一步研究了中性溶质与中性溶质、中性溶质与带电溶质以及带电溶质与带电溶质的分离选择性与压力、操作电压等的关系 ,结果表明 :对于中性溶质的分离 ,尽管可以通过压力的改变调节峰间距和分离时间 ,但不会对出峰次序产生影响。对于中性溶质与带电溶质的分离以及带电溶质与带电溶质的分离 。

加压毛细管电色谱法测定肥胖大鼠尿液中内源性代谢物

利用氯甲酸乙酯作为衍生化试剂,建立了测定尿样中内源性代谢物的加压毛细管电色谱方法。采用毛细管色谱柱EP-150-30/50-5-C18,以0.01%TFA水溶液(A)与0.01%TFA的95%乙腈水溶液(B)组成流动相,加压13MPa;工作电压为2kV;流速0.08mL/min;检测波长214nm;室温;柱上检测;进样体积5μL,同时测定了正常大鼠尿液与肥胖大鼠尿液中几种代谢物的含量。在最佳条件下,6种内源性代谢物在1.2～500mg/L范围内线性良好,相关系数为0.9988～0.9999;日间和日内精密度小于5%;平均加样回收率在95.9%～103.2%之间。本方法用于大鼠尿液中内源性代谢物含量的测定,简单、灵敏、准确。

加压毛细管电色谱法用于银杏叶的指纹图谱研究

采用反相加压毛细管电色谱(pCEC)法,建立了银杏叶的pCEC指纹图谱。以芦丁为内标,确定银杏叶的pCEC指纹峰为29个。测定了10个产地银杏叶的pCEC指纹图谱,其中9个产地的指纹图谱相似度系数为0.900～0.991。本方法具有较好的精密度,各指纹峰相对迁移时间的相对标准偏差(RSD)<2.6%,相对峰面积的RSD≤3.5%。此方法样品和试剂用量少少,对复杂样品分离能力强,可用于银杏叶药材的质量控制。

1.2μm新型放射型核壳色谱填料在加压毛细管电色谱中的性能评价

研究制备了1.2μm放射型核壳色谱填料,并对其表面进行了键合C18的改性,通过匀浆填充法制备了总长度为350 mm(固定相有效填充长度为70 mm)、内径为100μm的毛细管色谱柱,应用加压毛细管电色谱(pCEC)法考察了硫脲和萘在该色谱柱上的分离性能,同时讨论了流动相中有机相的比例、缓冲液的浓度、pH值、线性流速及施加电压对分离度的影响。实验结果表明,该新型核壳色谱填料在乙腈水体系中分离硫脲和萘时,表现出典型的反相色谱性能,当含有10 mmol/L磷酸的70%(v/v)乙腈水溶液为流动相、缓冲液pH为7.2、施加电压为-10kV时,柱效最高;在最佳线性流速为1 mm/s时,能够在8 min内实现8种中性物质的基线分离,且峰形较好,其中二苯甲酮的柱效高达19 072块/m。该研究表明1.2μm新型放射型核壳色谱填料适用于pCEC法的分离分析。

毛细管等电聚焦/加压毛细管电色谱二维分离体系在多肽分离中的应用

以毛细管等电聚焦(cIEF)为第一维分离模式,以反相加压毛细管电色谱(pCEC)为第二维分离模式,开展离线二维色谱分离研究,并对复杂肽段进行分离。羟丙基纤维素(HPC)涂层的毛细管用于cIEF分离,对6种标准蛋白质的平均分离柱效约为31万。在毛细管末端引进电隔离槽,方便了第一维样品的收集。在加电6 kV下,第二维pCEC对多肽的分离比不加电时的分辨率和分离速度提高。实验中用牛血清白蛋白的酶解肽段对cIEF/pCEC二维体系进行考察,理论峰容量约为30000。将该平台用于人血红细胞破碎液酶解多肽的分离,7个片段共检测到约200个峰。结果表明,cIEF/pCEC二维能较好地完成对复杂多肽的分离。

聚丙烯酸酯类毛细管整体柱的制备及其在加压毛细管电色谱中的应用

A novel monolithic stationary phase with long alkyl chain ligands was introduced and evaluated in pressurized capillary electrochromatography(p-CEC) by using a mixture of neutral and charged compounds. The capillary monolithic-column was prepared by in situ copolymerization of ethylene dimethacrylate,alkyl alcohol and 2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid in a quadruple porogenic solvent consisting of 1,4-butanediol/cyclohexanol/docecanol/water. Effects of experimental parameters in p-CEC,such as pressure and electrical field strength,on the separation were investigated. The baseline separation of the components in the mixture was achieved. The monolithic column can be used as an alternative to the conventional capillary column such as the reversed phase ODS.

亚微米C18键合硅胶固定相加压毛细管电色谱法同时拆分3种手性三唑类农药

采用改良Stber法制备420 nm亚微米单分散二氧化硅微球,采用C18硅烷化修饰后装填成毛细管色谱柱。采用该色谱柱,在加压毛细管电色谱平台上成功地实现了3对手性三唑类农药烯效唑、烯唑醇和丙环唑的同时拆分和分离。考察了各因素对手性分离效果的影响,优化后的色谱条件为:流动相为乙腈-20 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=6.8)(45∶55,v/v),其中缓冲液中含20 mmol/L羟丙基-γ-环糊精(HP-γ-CD);泵流速为0.04 mL/min;施加电压-9.4 kV;检测波长220 nm。在上述条件下,烯效唑、烯唑醇和丙环唑3种对映体同时得到拆分和分离,相邻两峰之间的分离度依次为4.20、12.9、4.41、4.09、1.70,分离时间仅为12 min,柱效最高达到310 000 plates/m。该研究为手性三唑类农药的同时分离提供了新的分离分析思路。

加压毛细管电色谱对白藜芦醇的分析测定

采用加压毛细管电色谱方法,对白藜芦醇的顺、反异构体的转化以及光照稳定性等进行了研究;同时还对白藜芦醇进行了定性和定量分析研究。在此基础上初步探讨了葡萄酒中白藜芦醇含量的测定研究,从而为我国葡萄酒行业提供了一种通过鉴定白藜芦醇来定量鉴别葡萄酒品质的分析方法。

加压毛细管电色谱-激光诱导荧光法检测4种黄曲霉毒素

建立了三氟乙酸（ TFA）柱前衍生,加压毛细管电色谱-激光诱导荧光（ pCEC-LIF）快速测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2方法。使用粒径1.8μm的C18毛细管色谱柱,以甲醇-水（45：55, V/V,含0.05%甲酸）为流动相,泵流速为0.05 mL/min,分离电压为15 kV,激发波长为375 nm,发射波长为450 nm,黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2达到基线分离。各组分的检出限（S/N=3）分别为0.02,0.016,0.008和0.01μg/L,在0.1-10μg/L,0.1-10μg/L,0.1-3.0μg/L,0.1-3.0μg/L 范围内分别呈线性相关,相关系数 R2分别为0.9999,1.0000,0.9995,0.9997。将本方法应用于花生酱的分析,加标回收率在90.0%-112.0%之间,RSD在0.5%-1.9%之间。

奶粉中三聚氰胺的加压毛细管电色谱法测定

建立了加压毛细管电色谱法（pCEC）测定奶粉中三聚氰胺含量的方法。采用三氯乙酸和乙腈沉淀样品中的蛋白质,并经强阳离子固相萃取柱富集净化。优化了有机相的比例、流动相的盐浓度和电压,比较了pCEC与毛细管液相色谱（cLC）的三聚氰胺色谱图。经方法学考察,样品在0.8-80 mg/L质量浓度范围内线性关系良好（r〉0.999 0）,检出限为0.4 mg/L,在添加水平为2-100 mg/kg时的回收率为71%-82%,相对标准偏差（RSD）为5.1%-8.5%。

加压毛细管电色谱法同时测定植物油中4种抗氧化剂

采用加压毛细管电色谱-紫外检测,建立了一种适用于植物油中常见抗氧化剂的分离检测方法。使用1.8μm粒径的C18毛细管色谱柱,以乙腈-水（0.05%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,泵流速为0.05mL/min,分流比为1∶200,分离电压为15k V,没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）四种抗氧化剂可在8min内实现快速分离。各组分的检出限（S/N=3）分别为0.6、2.0、3.0、5.5μg/mL,线性关系良好,样品加标回收率在93.5%～108.0%之间,RSD在0.3%～1.3%之间。将所建立方法应用于植物油样品的分析,取得了良好的分析结果。