Determination of rhynchophylline,isorhynchophylline,prim-O-glucosylcimifugin and 5-O-methylvisammioside in Babaojingfeng San by HPLC

OBJECTIVE: To develop an HPLC method for the simultaneous determination of rhynchophylline, isorhynchophylline,prim-O-glucosylcimifugin and 5-O-methylvisammioside in Babaojingfeng San.METHODS: The chromatograhic separation was performed on C_(18) column(4.6 mm×200 mm, 5 μm), a linear elution of acetonitrile-methanol(1:4) and 0.1% triethylamine solution was adopted at the flow rate of 0.7 mL·min^(-1). The detection wavelength was 254 nm and the column temperature was 30 ℃.RESULTS: Rhynchophylline, isorhynchophylline, prim-Oglucosylcimifugin and 5-O-methylvisammioside had a good linearity at 5.10 to 102.00 μg·mL^(-1)(r=0.9994), 5.95 to 119.00μg·mL^(-1)(r=0.9996), 6.10 to 122.00 μg·mL^(-1)(r=0.9999), 5.65 to113.00 μg·mL^(-1)(r=0.9998), respectively. The average recoveries and RSD were 97.66%(1.32%), 96.72%(0.52%), 98.99%(0.78%) and 99.16%(1.56%), respectively.CONCLUSION: The method was simple, convenience and may be used in the determination of rhynchophylline, isorhynchophylline, prim-O-glucosylcimifugin and 5-O-methylvisammioside in Babaojingfeng San.

温肾健脾定脊合剂指标成分测定及水提工艺研究

目的优选温肾健脾定脊合剂水提工艺。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定耐斯糖含量,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法测定芍药苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和柚皮苷的含量。以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,以上述指标成分总量及干膏得率为评价指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验优选水提工艺,并验证。结果耐斯糖、芍药苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和柚皮苷的进样量分别在1.054~10.54μg(r=0.9998)、0.8076~10.768μg(r=0.9999)、0.1383~1.844μg(r=0.9999)、0.1917~2.556μg(r=1.0000)、0.4803~6.404μg(r=0.9999)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为97.79%,100.73%,98.56%,101.38%,97.31%,RSD分别为1.74%,1.49%,1.34%,2.05%,1.66%(n=9)。最优水提工艺为加8倍量水,提取2次,每次40 min。结论所建立的指标成分含量测定方法及优选的水提工艺稳定、可行,可为温肾健脾定脊合剂的进一步开发提供参考。

经典名方羌活胜湿汤指纹图谱建立及功效物质预测分析

目的:基于网络药理学方法和指纹图谱,分析预测经典名方羌活胜湿汤(QSD)的质量标志物(Q-marker)。方法:采用高效液相色谱法建立QSD指纹图谱,对共有峰进行归属和指认,并基于可测性和可溯源性筛选活性成分;运用网络药理学筛选靶点和通路,构建QSD的成分-靶点-通路相互作用网络,预测QSD的Q-marker。结果:共标定了20个共有峰,通过对照品指认出升麻素苷、洋川芎内酯Ⅰ、蛇床子素、紫花前胡苷、甘草酸铵、藁本内酯、阿魏酸、异欧前胡素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、二氢欧山芹醇当归酸酯10个色谱峰,相似度均大于0.862;采用网络药理学方法对6个活性成分进行成分-靶点-通路网络构建与分析,富集的通路包括癌症中的蛋白聚糖、癌症的途径、化学致癌作用-受体激活、内分泌抵抗等。根据成分、靶点及通路之间的连接度初步预测二氢欧山芹醇当归酸酯、升麻素苷、甘草酸铵、异欧前胡素、蛇床子素、5-O-甲基维斯阿米醇苷6个活性成分可能通过调节这些信号通路达到祛风、胜湿和止痛的作用。结论:通过建立QSD指纹图谱,基于网络药理学方法分析预测QSD中的Q-marker,进一步明确QSD质量控制标准,有利于提高其质量控制水平,也为后期深入研究QSD的作用机制提供参考。

HPLC法测定不同防风炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的建立防风不同炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法并进行比较。方法采用高效液相色谱法(HPLC),使用Hitachi Lachrom-C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水溶液(40:60)作为流动相,设定检测波长为254 nm、柱温为30℃、流速为1.0 m L/min,进样量3μL。同时,采用快速水分测定仪测定不同炮制品的水分含量。结果升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在14.75~118.00μg/mL和24.00~192.00μg/mL范围内有良好的线性关系。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷精密度的相对标准偏差(RSD)分别为0.68%、1.13%,重现性的RSD分别为0.64%、1.74%,平均回收率分别为100.80%,95.65%。防风炮制后升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量均有不同程度的下降,虽然微波炮制炒防风的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量要低于传统炮制品,但是微波炮制品含量整体高于传统炮制品,炮制后水分含量明显降低,微波炮制品水分含量整体略高于传统炮制品。结论HPLC法快捷、简便、准确、重复性好,可用于防风不同炮制品的质量控制;防风的微波炮制品有效成分含量较高,水分含量略低。

HPLC法同时测定双活风湿凝胶贴膏中5种成分

目的建立HPLC法同时测定双活风湿凝胶贴膏中升麻素苷、羟基红花黄色素A、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素的含量。方法该药物60%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry Shield-C_(18)色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温20℃;检测波长310、400 nm。结果5种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率98.04%~99.29%,RSD 1.19%~2.27%。结论该方法稳定,重复性好,分辨率高,可用于双活风湿凝胶贴膏的质量控制。

HPLC⁃DAD法同时测定当归祛风合剂中6种成分

目的建立HPLC-DAD法同时测定当归祛风合剂中阿魏酸、毛蕊花糖苷、芍药苷、白鲜碱、升麻素苷、甘草苷的含量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Ultimate C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长230、236、240、280、334 nm。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9994),平均加样回收率95.56%~105.29%,RSD 2.77%~3.92%。结论该方法准确可靠,可为当归祛风合剂质量控制、临床应用提供参考。

LC/MS/MS法同时测定八宝惊风散中5种成分的含量

目的:建立LC/MS/MS法测定八宝惊风散中升麻素苷、沉香四醇、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、异钩藤碱共5个成分的含量。方法:采用C18柱,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.30mL/min,采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描。结果:异钩藤碱在质量浓度0.010~0.20mg/L,升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.025~0.50mg/L,沉香四醇、黄芩苷在0.05~1.0mg/L范围内线性关系良好(r>0.9982),平均加标回收率(n=6)范围为93.5%~108.7%,RSD为2.8%~4.8%,10批次样品中,5个成分的含量分别为升麻素苷55.8~110.5mg/kg、沉香四醇180.4~703.3mg/kg、5-O-甲基维斯阿米醇苷53.0~199.6mg/kg、黄芩苷1860.7~3740.1mg/kg、异钩藤碱0.82~7.89mg/kg。结论:该法快速、灵敏、能准确测定八宝惊风散中升麻素苷、沉香四醇、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、异钩藤碱5种成分的含量,可用于中成药八宝惊风散的质量控制。

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法:建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法,将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组,并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用,用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果:升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖,与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均使G1/G0期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论:升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。

参浮化痰丸质量标准的研究

目的建立参浮化痰丸(党参、浮小麦、陈皮、防风、黄芩、制半夏等)的质量标准。方法采用薄层色谱法对参浮化痰丸中的陈皮、防风、黄芩进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中橙皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷的质量浓度。橙皮苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的色谱条件为SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(17∶83),检测波长分别为283 nm和254 nm,柱温为30℃,体积流量为1.0mL/min;升麻素苷的色谱条件为SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(33∶67),检测波长254 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min。结果制剂中陈皮、防风、黄芩的薄层斑点清晰,分离度好,专属性强,阴性对照无干扰。橙皮苷在150.0～750.0μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度具有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为102.63%,RSD为1.29%;5-O-甲基维斯阿米醇苷在99.1～495.6μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度线性关系良好,r=0.999 9,平均加样回收率为102.62%,RSD为1.17%;升麻素苷在7.7～38.6μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为97.02%,RSD为1.25%。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强,可以用于该制剂的质量控制。

HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(5μm,150 mm×4.6 mm id)柱,甲醇-水流动相体系梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.7 ml/min,柱温25℃,进样量5μl。结果成功建立了防风中4种主要成分的HPLC含量测定方法,且方法学考察结果良好。结论该方法简便可行,定量准确,可用于防风中4种主要成分的质量控制。

RP-HPLC法同时测定九味羌活丸中升麻素苷等5种有效成分的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定九味羌活丸中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷和汉黄芩苷5种有效成分的含量。方法采用Kromasil C_(18)(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温为35℃,流动相为乙腈(A)-体积分数0.05%的磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1),检测波长为254 nm。结果升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷和汉黄芩苷分别在质量浓度0.684~6.84、0.226~2.26、1.20~12.0、20.9~209和3.84~38.4 mg·L^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 8,n=6),平均回收率分别为100.3%、100.2%、99.7%、101.0%和100.7%(RSD在1.0%~1.3%内,n=9)。结论该方法可用于九味羌活丸的质量控制。

不同煎药方法对感冒清热汤剂质量的影响

目的比较传统砂锅和煎药机煎煮感冒清热汤剂的质量差异。方法分别用传统砂锅和煎药机煎煮感冒清热汤剂,采用高效液相色谱法对处方煎液中升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和葛根素的含量进行测定。结果5-O-甲基维斯阿米醇苷和葛根素在机煎液中的含量高于传统砂锅煎液,而升麻苷则相反。结论传统砂锅与煎药机两种不同方法煎煮的感冒清热汤剂在质量上存在较大差异。

一测多评法同时测定清解颗粒中3种成分

目的建立一测多评法同时测定清解颗粒(苦杏仁、防风、石膏等)中3种成分的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用依利特C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;检测波长210、254 nm;柱温30℃。以苦杏仁苷为内标,建立其他2种成分的相对校正因子,测定含有量。结果苦杏仁苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在37.08~1 236、22.4~748、11.88~396μg/mL范围内线性关系良好(R2≥0.999 9),平均加样回收率102.17%、101.12%、104.73%,RSD 1.85%、1.74%、2.12%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法准确可靠,可用于清解颗粒的质量控制。

HPLC法同时测定产灵丸中4种有效成分

目的建立同时测定产灵丸（防风、苍术、白术等19味药物）中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、苍术素醇和苍术素4种成分的高效液相色谱法。方法色谱柱为依利特C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱;流速为1.3 mL/min;检测波长：254 nm（升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷）、337 nm（苍术素醇、苍术素）;柱温为30℃。结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、苍术素醇和苍术素质量浓度分别在5.22~104.40μg/mL（r=0.999 3）、4.95~99.00μg/mL（r=0.999 7）、4.89~97.80μg/mL（r=0.9995）、6.34~126.80μg/mL（r=0.999 2）时与其峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为98.79%、97.21%、100.07%、96.90%,RSD（n=6）分别为1.19%、1.13%、0.89%、0.85%。结论该定量测定方法简便、结果准确可靠并且重现性好,可作为产灵丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、苍术素醇和苍术素的质量控制。

RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量

目的建立防风药材中4种有效成分含量同时测定的方法，以比较不同产地防风药材及不同部位中有效成分的含量，为防风药材质量标准的制定及防风的资源开发提供科学依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1．0mL·min^-1；检测波长：254mm；柱温：30℃。结果升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷能够达到基线分离；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度在1．92～400mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9998，n=5），平均加样回收率分别为97．5％、97．7％，RSD分别为1．3％、2．8％（n=9）；升麻素、亥茅酚苷质量浓度在0．96～200mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999，n=5），平均加样回收率分别为99．3％、97．7％，RSD分别为2．0％、1．7％。结论本方法为防风药材的资源开发提供了参考，可用于防风药材的质量控制。

HPLC法同时测定辛芩颗粒中细辛脂素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定辛芩颗粒中细辛脂素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的方法。方法：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流速为1.0 ml·min^-1;柱温：30℃;流动相：甲醇-水梯度洗脱;检测波长：0-30 min为254 nm,30-55 min为287 nm;进样量：10μl。结果：升麻素苷在浓度为10.210-163.400μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为100.30%,RSD为1.6%（n=6）;5-O-甲基维斯阿米醇苷在浓度为10.160-162.600μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为101.53%,RSD为1.1%（n=6）;细辛脂素在浓度为5.015-80.240μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为101.12%,RSD为1.2%（n=6）。结论：该方法简单、准确,同时测定3种有效成分的含量,可用于辛芩颗粒的质量控制。

防风化学成分的研究

从防风甲醇提取物中分离得到11个结晶,分别鉴定为β-谷甾醇,香柑内酯,亥茅酚,胡萝卜甙,sec-O-glncosylhamaudol,5-O-甲基维斯阿米醇,升麻素,蔗糖,4-O-β-glucopyranosyl-5-O-methylvisamminol,prim-O-glucosylcimifugin,甘露醇。

升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙对血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

目的:观察升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致心脏微血管内皮细胞损伤,引起IL-6和TNF-α分泌的影响。方法:采用体外培养的乳鼠心脏微血管内皮细胞,测定其生长曲线及药物的最大无毒浓度后,经升麻甙(50、100、200μg/ml)与5-O甲基维斯阿米醇甙(50、100、200μg/ml)预处理24h,再与ox-LDL(MDA含量为3nmol/ml)共同孵育24h,用ELISA法和放免法分别检测细胞培养液中IL-6和TNF-α的水平。结果:升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙在50、100、200μg/ml时能够明显抑制ox-LDL引起的内皮细胞IL-6、TNF-α分泌,且呈剂量依赖性。结论:升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙能够抑制血管内皮细胞产生炎性细胞因子IL-6和TNF-α。

HPLC测定感冒清热颗粒中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

目的 :建立反相高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中的升麻苷及 5 O 甲基维斯阿米醇苷含量 ;方法 :采用APEXODS色谱柱 ,分别以醋酸钠水溶液 (40mmol·L-1,pH 6 .9) 甲醇 (6 5∶35 )和水 甲醇 四氢呋喃 (6 2∶38∶1)为流动相 ,检测波长为 2 5 4nm ,流速为 0 .8mL·min-1;结果 :升麻苷与 5 O 甲基维斯阿米醇苷分别在 0 .72～ 6 .5 μg·mL-1与 0 .92～ 16 .5 μg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好 (r =0 .9999) ;加样回收率分别为 10 0 .3%和 94 .7%。测得感冒清热颗粒中含有升麻苷 0 .133mg·g-1和 5 O 甲基维斯阿米醇苷 0 .16 7mg·g-1。结论 :该法简便、快速。

高效液相色谱法测定鼻炎片中升麻素苷含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定鼻炎片中升麻素苷含量的方法。方法采用HPLC法,色谱柱为迪马Diamonsil C18分析柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(18∶12∶70);流速为1.0mL/min;检测波长为254nm。结果升麻素苷在0.1888～1.534μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,相关系数r=0.9997,加样回收率为101.74%,RSD为2.97%。结论该方法快速、准确,可用于鼻炎片的质量控制。