Flt3L及CCL5对prime/boost免疫策略中抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用

目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用。方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠,免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBcDNA疫苗加强,观察对稳定表达HBcAg的小鼠黑色素瘤细胞(B16-HBc)的生长抑制作用;并分别采用MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、流式细胞术检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-2、IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性。结果:与对照组相比,佐剂联合DNA疫苗免疫经蛋白加强组(DDP/Adj)显著抑制肿瘤生长;佐剂联合DNA疫苗免疫组(DDD/Adj)及DDP/Adj组均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P<0.05),且DDP/Adj高于DDD/Adj组(P<0.05);DDD/Adj及DDP/Adj组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、IL-2表达水平及CTL杀靶活性均高于对照组(P<0.01或P<0.05),IL-4表达水平在各组无显著区别(P>0.05)。结论:在prime/boost免疫策略中,采用Flt3L与CCL5两种细胞因子联合应用可显著促进荷瘤小鼠产生抗原特异性免疫应答及抗肿瘤作用。

CVB3腺病毒载体疫苗Ad／MDC—VP1与DNA疫苗联合应用的免疫效果

目的构建重组腺病毒Ad／MDC—VP1，观察Ad／MDC-VPl与DNA疫苗联合应用的免疫效果。方法构建、包装重组腺病毒Ad／MDC—VP1并检测目的蛋白的表达。BALB／c小鼠随机分为Ad／MDC—VPl、pcDNA3／MDC—VP1、pcDNA3／MDC-VP1＋Ad／MDC—VP1和PBS4组，肌肉注射免疫小鼠。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清柯萨奇病毒B3（CVB3）VP1 IgG和中和抗体滴度；CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性；用致死量CVB3攻击小鼠后，检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果成功构建并包装了重组腺病毒Ad／MDC-VPI，检测到目的蛋白的表达。pcDNA3／MDC．VP1＋Ad／MDC—VP1组血清CVB3VP1IgG滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤酒生和对小鼠的保护率明显高于其他各组（P〈0．05），血清病毒滴度低于其他各组（P〈0．05）。结论Ad／MDC—VP1与DNA疫苗联合应用能显著提高小鼠细胞和体液免疫应答。