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Developmental potency of mouse primitive ectoderm cells, embryonic ectoderm cells and primordial germ cells after blastocyst injection
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作者 Shen SanbingInstitute of Developmental Biology,Academia Sinica,Beijing, China 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1990年第1期53-65,共13页
Developmental potency of primitive and embryonic ectoderm cells from 4.50-day to 6.25-day post-coitum (p.c.) mouse embryos and primordial germ cells from 12.50-day p.c.male genital ridges of fetal mice were studied by... Developmental potency of primitive and embryonic ectoderm cells from 4.50-day to 6.25-day post-coitum (p.c.) mouse embryos and primordial germ cells from 12.50-day p.c.male genital ridges of fetal mice were studied by direct introducing them into 3.50-day p.c.blastocysts.Sixteen (61.5) overt chimaeras out of 26(50%) offsprings were obtained after transfer of 52 blastocysts injected with 4.50-day primitive ectoderm cells;four (16.0%) overt chimaeras were obtained out of 25 (51.0%) offsprings with 4.75-day primitive ectoderm cells from 49 transferred blastocysts.However,no overt chimaera was obtained with either 5.25-day or 6.25-day embryonic ectoderm cells or 12.50-day male primordial germ cells.GPI analysis of mid-gestation conceptuses developed from injected blastocysts showedthat 5.25-day embryonic ectoderm cells could only contributed to yolk sac of conceptus.Results suggested that implantation acts as a trigger for the determination of primitive ectoderm cells,and their developmental potency becomes limited within a short period of time in normal development. 展开更多
关键词 developmental potency primitive ectoderm cells embryonic ectoderm cells primordial germ cells blastocyst injection pluripolenl stem cell origin.
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饲养层及细胞因子对鸡PGCs体外培养的影响 被引量:2
2
作者 张秋婷 苗向阳 安铁洙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期55-58,共4页
原始生殖细胞(PGCs)具备发育全能性,而且数量较多,与数量较少的内细胞团(ICM)相比更有利于进行分离克隆。不同动物的PGCs的生长条件不同,因此建立适宜的培养体系是PGCs培养的关键。对饲养层细胞及细胞因子对鸡PGCs体外培养的影响作了简... 原始生殖细胞(PGCs)具备发育全能性,而且数量较多,与数量较少的内细胞团(ICM)相比更有利于进行分离克隆。不同动物的PGCs的生长条件不同,因此建立适宜的培养体系是PGCs培养的关键。对饲养层细胞及细胞因子对鸡PGCs体外培养的影响作了简单的介绍。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 饲养层 细胞因子 细胞培养
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鸡原生殖细胞(PGCs)的提纯及其超低温保存 被引量:2
3
作者 胡小芬 艾华水 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期981-985,共5页
利用密度梯度离心从孵化51~56h的鸡胚血液中提纯PGCs,通过形态鉴别和过碘酸-希夫试剂染色方法判定提纯的PGCs的纯度在80%左右。将提取到的PGCs放入到含有10%二甲基亚砜的TCM-199中,在液氮中进行保存。将超低温冷冻保存了1个月、... 利用密度梯度离心从孵化51~56h的鸡胚血液中提纯PGCs,通过形态鉴别和过碘酸-希夫试剂染色方法判定提纯的PGCs的纯度在80%左右。将提取到的PGCs放入到含有10%二甲基亚砜的TCM-199中,在液氮中进行保存。将超低温冷冻保存了1个月、6个月和12个月的PGCs(各3管)分别复苏后,用台盼蓝染色,通过红细胞计数板计数鉴定冷冻保存了不同时间的PGCs的平均存活率分别为91.7%、92.6%和91.9%。结果表明所采用的冷冻保存的方法是可行的。所采用的超低温冷冻保存方法简单易行,为今后以PGCs为目的细胞进行超低温冷冻,而后制作种系嵌合体进行保种的研究提供有利的实践基础。 展开更多
关键词 原生殖细胞 超低温保存
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猪原始生殖嵴(PGCs)细胞分离、建系培养
4
作者 冯书堂 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期192-192,共1页
Inbred of Wu Zhishan miniature pig(WZSP)at 5 to 8 Mouths of age,which were used as embryo donors.The total 75 fetuses was collected from 14 donors at day 25 to 29 of pregnancy(estrus=day 0),which was used for in vitro... Inbred of Wu Zhishan miniature pig(WZSP)at 5 to 8 Mouths of age,which were used as embryo donors.The total 75 fetuses was collected from 14 donors at day 25 to 29 of pregnancy(estrus=day 0),which was used for in vitro culture,clone,isolation,passage of porcine embryonic germ(PEG).The results were shown that:(1)The PGCs of fetuses between days 2729 of pregnancy(estrus=0)was easily to collect and more suitable to set up PEGs.(2)The PEGs clones with WZSP was coming out 2 days early than Shim(97),Piedrahita(98)and Mueller(99)reported previously.(3)PEG′s will be survival in vitro after thawing. 展开更多
关键词 原始生死嵴 细胞分离 胚胎细胞 建系
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Evolutionarily conserved boule and dazl identify germ cells of Coilia nasus 被引量:1
5
作者 Xiao Chen Peng Song +4 位作者 Jiao Xia Jing Guo Yonghai Shi Ying Zhong Mingyou Li 《Aquaculture and Fisheries》 CSCD 2023年第3期244-251,共8页
Coilia nasus is an endangered fish species in the Yangtze River,and there is urgent need to know the genes related to its reproduction and fertility.The DAZ family including boule,daz and dazl,plays an important role ... Coilia nasus is an endangered fish species in the Yangtze River,and there is urgent need to know the genes related to its reproduction and fertility.The DAZ family including boule,daz and dazl,plays an important role in germ cells development.In this study,the cDNA sequence of boule(Cnbol)and dazl(Cndazl)genes were cloned and their expression patterns were characterized in Coilia nasus.RT-PCR showed that the expression of Cnbol and Cndazl mRNAs was restricted in adult gonads.The section in situ hybridization indicated that the temporospatial expression patterns of Cnbol and Cndazl were significantly different.In the testis,Cnbol was mainly detected in spermatocytes and spermatids,while Cndazl was prominently expressed in s permatogonia.In the ovary,Cnbol and Cndazl were highly expressed in the early stages of oocytes.Interestingly,Cndazl was also concentrated in perinuclear speckle and then localized to the Balbiani body in late stages of oocytes.In addition,Cnbol and Cndazl 3′UTR can specifically label medaka Primordial Germ Cells(PGCs).According to our results,Cnbol and Cndazl are marker genes of germ cells and may play a vital role in the development and differentiation of germ cells in Coilia nasus. 展开更多
关键词 Coilia nasus germ cells boule DAZL pgcs
原文传递
利用iCaspase9特异性诱导鸡原始生殖细胞消除的研究
6
作者 孙玲玲 黄振文 +4 位作者 田奎 张嘉乐 郑基坛 濮黎萍 陆阳清 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3340-3348,共9页
【目的】制备在生殖细胞特异表达iCaspase9的鸡原始生殖细胞系(PGCs),提升外源性PGCs的生殖传递效率,为生产诱导不育的雄性或雌性受体鸡胚打下基础。【方法】利用piggyBac转座子将iCaspase9片段整合到鸡基因组中,构建稳定转染iCaspase9... 【目的】制备在生殖细胞特异表达iCaspase9的鸡原始生殖细胞系(PGCs),提升外源性PGCs的生殖传递效率,为生产诱导不育的雄性或雌性受体鸡胚打下基础。【方法】利用piggyBac转座子将iCaspase9片段整合到鸡基因组中,构建稳定转染iCaspase9片段的CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞系,通过荧光微显镜观察鉴定其在iCaspase9系统诱导底物B/B二聚化配体作用下的细胞消除效果;再利用CRISPR/Cas9技术将iCaspase9片段定点插入DAZL基因第11外显子之后构建Dazl-iCaspase9-EGFP PGCs,经iCaspase9片段插入鉴定和PGCs生殖特性鉴定后,通过荧光微显镜观察鉴定其在B/B二聚化配体诱导下的消除效果。【结果】成功建立的CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞系与野生型DF-1细胞(WT DF-1)的生长增殖无显著差异(P>0.05,下同);CCK-8法测定发现,0.25~5.00 nmol/L B/B二聚化配体对WT DF-1细胞生长数量无显著影响,但CAG-iCaspase9-mCherry DF-1细胞在添加B/B二聚化配体后,细胞数量较空白对照组极显著降低(P<0.01,下同),且失去正常的细胞形态,逐渐变圆甚至凋亡。成功建立的DAZL-iCaspase9-EGFP PGCs仍特异性高表达Cvh、Nanog、PouV、DAZL、Cdh和Ddx4等生殖细胞相关基因,在蛋白水平上也能鉴定出DAZL、SSEA1和CVH等蛋白,说明插入iCaspse9片段后并没有改变生PGCs的殖细胞特异性;在0.25 nmol/L B/B二聚化配体诱导作用下,DAZL-iCaspae9-EGFP PGCs数量显著减少,几乎全部消除,说明iCaspase9系统可诱导细胞凋亡而有效消除内源性PGCs。【结论】利用i Caspase9系统构建获得的DAZL-iCaspase9-EGFP PGCs在不改变其生殖细胞特性的同时,可在B/B二聚化配体诱导下有效消除内源性PGCs,为建立高效鸡种质资源恢复和基因编辑鸡制备等研究提供无内源性PGCs的受体鸡胚。 展开更多
关键词 原始生殖细胞(pgcs) iCaspase9 基因编辑 细胞消除
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鸡胚不同发育时期原始生殖细胞的分离方法 被引量:17
7
作者 李碧春 秦洁 +3 位作者 肖小珺 陈国宏 吴信生 吴圣龙 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期835-842,共8页
采用Ficoll密度梯度离心法和EDTA 胰酶酶解法两种方法 ,分别提取第 14期 (孵化 5 3h)血液、第 19期 (孵化 72h)和第 2 8期 (孵化 132h)生殖腺中的PGCs,以比较两种分离方法对 3个发育时期的鸡胚原始生殖细胞在相同体外培养条件下存活时... 采用Ficoll密度梯度离心法和EDTA 胰酶酶解法两种方法 ,分别提取第 14期 (孵化 5 3h)血液、第 19期 (孵化 72h)和第 2 8期 (孵化 132h)生殖腺中的PGCs,以比较两种分离方法对 3个发育时期的鸡胚原始生殖细胞在相同体外培养条件下存活时间的差异。结果发现 ,两种分离方法均能分离到一定数量的原始生殖细胞 ,但是酶解法分离到的原始生殖细胞的相对数量较Ficoll密度梯度离心法的多 ,存活时间较长 ,是一种适宜的分离方法 ;对鸡胚发育第 14、 19、 2 8期 3个时期提取的原始生殖细胞进行体外培养 ,存活时间分别为 :72h、 88h和 80h ,三者之间差异显著。结果表明 :在鸡胚孵化的第 19期 ,因原始生殖细胞大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处 ,因而较容易收集 ,体外培养较为适宜 。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 分离 存活时间
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鸡鸭异种间嵌合体的制备 被引量:9
8
作者 李赞东 刘春海 +6 位作者 黄劲松 沙金 危华 孙明军 赵晨 姜盛花 Hiroshi KAGAMI 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期543-548,共6页
本研究采集孵化 14期鸡胚血液中的原始生殖细胞 ,在液氮中冷冻保存三个月后 ,解冻成活率达 80 %以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化 ,分离获得纯度为 2 7 5 % ,平均每枚胚胎可获得近 5 0个PGCs。将分离的鸡PGCs10 0~ 2 0 ... 本研究采集孵化 14期鸡胚血液中的原始生殖细胞 ,在液氮中冷冻保存三个月后 ,解冻成活率达 80 %以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化 ,分离获得纯度为 2 7 5 % ,平均每枚胚胎可获得近 5 0个PGCs。将分离的鸡PGCs10 0~ 2 0 0个以微注射法转移至 15期早期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体 ,孵出 8(6♂ ,2♀ )只雏鸭 ,总孵化率为 7 3% (8/110 )。以鸡W染色体特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测鸡PGCs ,在被检测的 2 1个鸭胚的性腺中 ,16个有不同程度的阳性信号 ,嵌合率达 76 2 % (16 /2 1)。实验结果表明鸡原始生殖细胞能够迁移并定居到鸭胚性腺中 ,并有可能在鸭性腺中增殖分化成有功能的配子。 展开更多
关键词 异种间嵌合体 制备 原始生殖细胞
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胚胎干细胞移植对急性损伤肝脏的作用 被引量:7
9
作者 刘晓萍 高英茂 +2 位作者 徐珞 郭菲菲 邴鲁军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期351-355,共5页
目的探索胚胎干细胞移植在急性损伤肝脏中的存活和分化情况。方法用四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤模型,将BrdU标记的来源于小鼠原始生殖细胞的胚胎干细胞经静脉移植于模型动物体内,分别于移植后2周、4周取出肝脏,用免疫组织化学、... 目的探索胚胎干细胞移植在急性损伤肝脏中的存活和分化情况。方法用四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤模型,将BrdU标记的来源于小鼠原始生殖细胞的胚胎干细胞经静脉移植于模型动物体内,分别于移植后2周、4周取出肝脏,用免疫组织化学、免疫荧光双重染色和PAS染色方法检测移植细胞在受体小鼠肝内的分布、存活、白蛋白的表达和糖原代谢。结果急性损伤小鼠肝脏可见大量肝细胞空泡样变性,有严重出血现象;2周时损伤肝内可见炎性细胞浸润和未吸收的出血区;4周时仍见少量炎性细胞浸润。干细胞移植2周,肝小叶内可见散在分布的BrdU和ALB双阳性着色细胞,PAS染色呈阳性反应;部分小细胞呈BrdU单阳性着色;损伤移植组的肝小叶结构基本恢复。移植4周,损伤肝小叶结构正常,小的BrdU阳性细胞数量增多。结论原始生殖细胞可以在急性损伤肝脏中存活,并分化为肝细胞和肝小叶内的其他细胞,并明显改善损伤肝的组织结构。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 细胞移植 肝脏损伤 免疫组织化学 免疫荧光 小鼠
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鱼类原生殖细胞的研究进展 被引量:4
10
作者 苏敏 林丹军 +1 位作者 尤永隆 唐良华 《水产科学》 CAS 北大核心 2008年第8期427-429,共3页
关键词 原生殖细胞 鱼类 进展
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自原始生殖细胞分离克隆小鼠ES细胞研究初报 被引量:7
11
作者 华进联 窦忠英 +2 位作者 李松 雷安民 杨春荣 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期22-24,29,共4页
自交配后 9.5~ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传... 自交配后 9.5~ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传至 10代 ) ,部分细胞集落呈典型鸟巢状结构 ,AP染色呈阳性 ,体外分化或延迟传代、堆叠培养具有分化形成类胚体、上皮细胞、成纤维细胞或神经细胞等的能力。同样培养交配后 7.5~ 8.5 d和14.5~ 15 .5 d的小鼠胎儿 ,原代观察到类 ES细胞集落 ,继代培养未观察到类 ES细胞集落 ,16 .5~ 18.5 d小鼠胎儿原代培养未观察到 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 ES细胞 小鼠 哺乳动物
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人类胚胎生殖细胞体外分化为心肌细胞的研究 被引量:5
12
作者 华进联 徐小明 窦忠英 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1080-1085,共6页
胚胎生殖(EG)细胞是来源于胚胎原始生殖细胞(PGCs)的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液(DMEM+20%NBS+0.1mM 2Me)培养EG细胞,部分在基础培养液添加10μmol/LRA+0.75%DMSO或10μmol/L 5-氮胞苷(... 胚胎生殖(EG)细胞是来源于胚胎原始生殖细胞(PGCs)的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液(DMEM+20%NBS+0.1mM 2Me)培养EG细胞,部分在基础培养液添加10μmol/LRA+0.75%DMSO或10μmol/L 5-氮胞苷(5-AZA)诱导人类EG细胞向心肌细胞分化,以检测其是否具有向心肌细胞自发分化的能力。9例(8.49%,9/106)胎儿EG细胞在体外分化得到20个节律性心脏跳动样细胞团,其搏动节律为20~120次/min,体外维持节律性搏动最短2d,最长至15d,呈PAS,Myoglobin,α-actin阳性;对K^+、Ca^+、肾上腺素等具有与在体心脏相似的反应性;透射电镜观察具有心肌细胞样结构。添加DMSO和RA或5-AZA诱导未得到跳动样心肌细胞,但可提高心肌α-actin免疫组织化学染色阳性率;表明人类胚胎生殖细胞具有向心肌细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 胚胎干细胞 心肌细胞
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小鼠原始生殖细胞迁移过程中H2A.Z的表达 被引量:5
13
作者 时小艳 吴宝江 +2 位作者 于建宁 马雪山 刘红林 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期422-425,共4页
小鼠原始生殖细胞(PGCs)迁移、增殖、性别分化都受着基因组和DNA表观遗传修饰的调控,H2A.Z与转录激活有关,可能与表观遗传修饰存在联系,通过PGCs单细胞及组织石蜡切片的免疫荧光方法进行研究。结果表明,PGCs在迁移过程中,8.5 dpc时PGCs... 小鼠原始生殖细胞(PGCs)迁移、增殖、性别分化都受着基因组和DNA表观遗传修饰的调控,H2A.Z与转录激活有关,可能与表观遗传修饰存在联系,通过PGCs单细胞及组织石蜡切片的免疫荧光方法进行研究。结果表明,PGCs在迁移过程中,8.5 dpc时PGCs中不存在H2A.Z;迁移至生殖嵴时H2A.Z主要集中于细胞核,11.5dpc整个PGCs细胞核和细胞质都存在;13.5 dpc雌性的卵母细胞中H2A.Z主要集中于细胞质,而精原细胞中H2A.Z偏向集中于细胞核。综合基因组和DNA表观遗传修饰分析,H2A.Z的表达与其有密不可分的联系。 展开更多
关键词 小鼠原始生殖细胞(pgcs) 单细胞 石蜡切片 H2A.Z 免疫荧光
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子宫内膜基质细胞作为饲养层培养人胚原始生殖细胞 被引量:2
14
作者 曲文玉 谭季春 +5 位作者 李杨 孙开来 邱广蓉 王淑玲 蒋丽 卓英梅 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期306-309,共4页
目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能。方法从5~9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素C处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养。结果PGCs可以在体外培养3个多月... 目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能。方法从5~9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素C处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养。结果PGCs可以在体外培养3个多月,传14代。这样培养的PGCs表达胚胎干细胞的多种标志,如碱性磷酸酶染色、SSEA和TRA抗原等。另外细胞保持正常的染色体核型。结论人子宫内膜基质细胞可以作为饲养细胞在体外培养人胚原始生殖细胞,保持未分化状态。 展开更多
关键词 子宫内膜基质细胞 原始生殖细胞 胚胎干细胞 细胞培养 人胚胎
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半滑舌鳎早期胚胎性腺原基分化的组织学 被引量:2
15
作者 康现江 宁静允 +3 位作者 穆淑梅 李凤超 苏文清 刘学会 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2010年第3期296-300,306,共6页
采用连续组织切片对半滑舌鳎胚胎及仔鱼进行了观察研究,首次描述了半滑舌鳎胚胎发育过程中原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)出现的部位及迁移特征,以及卵黄合胞体,鳔与性腺原基的发育分化.结果发现,PGCs出现于神经胚期的靠近... 采用连续组织切片对半滑舌鳎胚胎及仔鱼进行了观察研究,首次描述了半滑舌鳎胚胎发育过程中原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)出现的部位及迁移特征,以及卵黄合胞体,鳔与性腺原基的发育分化.结果发现,PGCs出现于神经胚期的靠近卵黄囊的囊胚层.PGCs的特征为体积比周围细胞大,核大透亮,随后在肌肉期的脊索壁上出现.孵化前期的PGCs迁移到肠原基附近,肠系膜旁可见尚在移动的PGCs和10日龄的仔鱼中在肾管旁出现性腺原基,以后PGCs数量逐渐增多参与性腺的形成.本研究为半滑舌鳎的发育生物学以及养殖生产实践提供参考. 展开更多
关键词 半滑舌鳎 原始生殖细胞 性腺原基
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定向诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞分化的研究 被引量:3
16
作者 刘晓萍 高英茂 邴鲁军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期650-654,共5页
目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的最佳条件。方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、-βNGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分... 目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的最佳条件。方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、-βNGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分化。用靛青绿摄入试验和α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白(ALB)免疫细胞化学染色鉴定原始生殖细胞向肝细胞分化的状况。结果与胎肝组织分隔培养2 d,可见原始生殖细胞向肝样细胞分化,分化细胞呈圆形和星形,圆形细胞多呈簇状,可以摄入靛青绿呈绿色,并呈AAT和ALB免疫阳性着色,培养12 d时分化率达80%。肝细胞提取液也可诱导原始生殖细胞向肝样细胞分化,12 d时分化率达70%以上;0.5 g/L和1 g/L的肝细胞提取液的诱导分化率无显著差异;但是0.5 g/L提取液诱导组圆形细胞较多;而1 g/L肝提取液诱导组,星状分化细胞多。β-神经生长因子(-βNGF)诱导4 d,可见肝样细胞出现,随诱导时间延长,分化细胞增多,圆形分化细胞较多,12 d时分化率达60%以上;20μg/L和50μg/L两种浓度的-βNGF诱导分化率无显著差异。bFGF、EGF、RA诱导组未见ALB免疫反应阳性细胞。RA可以增强-βNGF的诱导分化作用,使星状细胞增多明显。结论-βNGF和肝细胞因子可诱导原始生殖细胞向肝细胞定向分化。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 肝细胞 Β-神经生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 表皮生长因子 维甲酸 诱导分化 小鼠
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鸡胚生殖嵴中原始生殖细胞的分离培养 被引量:6
17
作者 秦洁 肖小珺 李碧春 《解剖学研究》 CAS 2003年第3期181-183,共3页
目的 在鸡胚孵化的 19期以Ficoll密度梯度离心和酶解离两种方法分离生殖嵴中的原始生殖细胞 (PGCs)。探索在生殖嵴中PGCs分离、培养的适宜方式 ,以获得较多数量与较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。方法 在倒置显微镜下进行形态观察 ... 目的 在鸡胚孵化的 19期以Ficoll密度梯度离心和酶解离两种方法分离生殖嵴中的原始生殖细胞 (PGCs)。探索在生殖嵴中PGCs分离、培养的适宜方式 ,以获得较多数量与较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。方法 在倒置显微镜下进行形态观察 ,台盼蓝染色比较存活时间 ,PAS特异染色法识别鉴定PGCs。结果 两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。与Ficoll密度梯度离心法相比 ,酶解离法分离到PGCs的相对数量较多 ,存活时间较长 ,是一种较可行的分离方法。在鸡胚孵化的第 19期 ,PGCs大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处 ,此时的生殖嵴大小已达一定程度 ,分离其中的PGCs操作简便 ,有较强的可操作性。结论 提取的PGCs为转基因鸡的生产提供了介导材料。 展开更多
关键词 鸡胚胎 生殖嵴 原始生殖细胞 细胞分离 细胞培养 PAS特异染色法 Ficoll密度梯度离心法
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不同时期鸡胚原始生殖细胞分离的研究 被引量:3
18
作者 秦洁 肖小珺 李碧春 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期316-319,共4页
采用Ficoll密度梯度离心,酶解离两种方法在鸡胚孵化的第14期、19期、28期,分离、培养鸡胚中的原始生殖细胞(PGCs)。探索PGCs分离、培养的适宜时期及方法,以期获得较多数量,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。结果表明:1.提取、分离PGC... 采用Ficoll密度梯度离心,酶解离两种方法在鸡胚孵化的第14期、19期、28期,分离、培养鸡胚中的原始生殖细胞(PGCs)。探索PGCs分离、培养的适宜时期及方法,以期获得较多数量,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。结果表明:1.提取、分离PGCs的最佳时期依次为19期、28期。2.两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。但在19期和28期,酶解离法分离到的PGCs的相对数量较多,存活时间较长,是一种较适宜的分离方法。 展开更多
关键词 鸡胚 原始生殖细胞 分离 孵化
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泥鳅原始生殖细胞的发生、迁移和性腺分化 被引量:17
19
作者 高书堂 高令秋 岳朝霞 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1998年第4期477-480,共4页
通过光学显微镜对泥鳅原始生殖细胞(Primordialgermcels,即PGCs)的发生、迁移和性腺分化进行初步研究,发现泥鳅PGCs最初出现在原肠晚期预定中胚层内,体节中胚层与侧板中胚层分离后而位于侧板中胚层.随... 通过光学显微镜对泥鳅原始生殖细胞(Primordialgermcels,即PGCs)的发生、迁移和性腺分化进行初步研究,发现泥鳅PGCs最初出现在原肠晚期预定中胚层内,体节中胚层与侧板中胚层分离后而位于侧板中胚层.随着胚胎进一步发育,PGCs沿着脏壁中胚层从消化道腹侧迁移到背面,进入系膜两侧的背壁上皮形成的生殖嵴,与生殖嵴共同组成未分化的生殖腺,此时的原始生殖细胞为性原细胞.PGCs在迁移过程中数量基本不变.另外,未分化生殖腺的不对称分布可能是雌雄分化的最早特征. 展开更多
关键词 泥鳅 原始生殖细胞 性腺分化 发生 迁移
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蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控 被引量:1
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作者 李东 汤贝贝 +6 位作者 王颖洁 纪艳芹 王飞 路镇宇 王曼 张亚妮 李碧春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期4814-4823,共10页
【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ... 【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相较于对照组细胞增殖缓慢;RA+抑制剂组中,2和4d内无类胚体出现,细胞增殖缓慢,6d出现小的类胚体,8d类胚体数量少量增多,且体积稍显增大,10d类胚体开始裂解。并且经过抑制剂的抑制后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的表达量在RA诱导组、抑制剂组和RA+抑制剂组中相对于对照组均呈显著性或极显著性的下调趋势。【结论】基于RNA-Seq技术及生物信息学方法筛选出ESCs向雄性生殖细胞分化过程中精氨酸-脯氨酸代谢通路及关键基因NOS2的基础上,通过对NOS2基因在鸡体内和体外的抑制,发现NOS2在被抑制后,ESCs向雄性生殖细胞分化的过程受到抑制。说明了精氨酸-脯氨酸代谢通路及关键基因NOS2对ESCs向雄性生殖细胞分化过程中起到重要的调节作用。 展开更多
关键词 RNA-Seq 鸡胚胎干细胞 原始生殖细胞 精原干细胞 雄性生殖细胞 一氧化氮合成酶2 抑制剂 分化
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