PLANTLET REGENERATION FROM PROTOPLASTS ISOLATED FROM CALLUS CULTURES OF IMMATURE INFLORESCENCES OF WHEAT(Triticum aestivum L.)

Wheat (Triticum aestivum L.) is one of the most important cereal crops in the world.Great attention has long been paid to the technique of protoplast culture of this species.Up to now, plantlet regeneration from protoplasts of anther-derived suspension cultures of wheat has been reported for the first time. In the present study, we have obtained numerous embryoids and plantlets from protoplasts of immature inflorescence-derived calli of spring wheat.

不结球白菜子叶原生质体培养再生植株

用 1 0g/ 10 0mL纤维素酶 (OnozukaR 10 ) ,0 1g/ 10 0mL果胶酶 (MecerozymeR 10 )及 10mmol/LCaCl2 ·2H2 O ,0 7mmol/LKH2 PO4 和 0 5mol/L甘露醇的混合酶液 ,从 14～ 18d苗龄的不结球白菜子叶上分离出高产率的原生质体。原生质体培养在KM8P1附加 2 ,4 D 0 5mg/L、 6 BA 0 2 5mg/L、NAA 0 5mg/L、葡萄糖 9 0g/ 10 0mL、蔗糖 1 0g/ 10 0mL、半乳糖0 0 3g/ 10 0mL液体培养基上 ,分裂旺盛。形成愈伤组织后经芽诱导和生根培养 ,获得了再生植株。

云南水稻品种原生质体培养研究

采用KPR和R2 培养基进行水稻原生质体培养。日本晴、楚粳 8号、云粳 9号、大白谷和元江普通野生稻先后获得了原生质体培养的成功 ,除日本晴外 ,其余品种均为首次报道。品种间绿苗再生率有显著差异 ,日本晴最高 ,大白谷最低。同一品种不同的愈伤组织间 ,分化率有很大差异 ,有的愈伤组织极易分化出绿苗 ,有的不能再生出绿苗 ,说明分化前的预培养非常重要。N6分化培养基的再生绿苗率极显著地高于MS。配方为N6+葡萄糖 2 0 g/L +蔗糖 30 g/L +IAA0 2mg/L + 6 BA0 5mg/L +Agarose 110 g/L的培养基 ,分化率最高 ,按初次接种的愈伤组织块计 ,每块平均再生绿苗 1 4苗。酶解原生质体量的多少 ,与愈伤组织在N6+ 1mg/L 2 ,4 D的液体培养基中悬浮培养时间的长短有关 ,悬浮时间较长则易于获得较多的原生质体。日本晴的再生植株中 ,有两株从移栽到抽穗仅 4 5d ,有可能是极早熟的变异株 ,有些植株的粒型和稃毛也有明显变异 ,对鉴定和利用变异的植株具有现实意义。

烟草NC_(89)叶肉细胞原生质体培养再生植株及影响因素的研究

生长１２０天的ＮＣ８９无菌苗叶片在ＯｎｏｚｕｋａＲ—１０和ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ１０的混合酶液中，酶解、收集、纯化，在修改的ＮＴ培养基上，应用液体—固体双层培养，原生质体经生长、分裂，形成愈伤组织，在多种分化培养基上，分化成再生植株。试验中对传统的酶解、收集方法作了改进，并对原生质体的分裂和愈伤组织的分化条件作了研究，对影响分化的多种因素作了深入的比较和探索，同时，本试验表明，叶片的生长状态和幼嫩程度是原生质体能否生长、分裂及再生的重要因素。

欧当归原生质体培养中体细胞胚胎发生和细胞学变化

从继代培养的欧当归(Levisticum officinale Koch)愈伤组织分离的原生质体在 C81V培养基中培养,得到了较高频率的持续分裂。形成的细胞团转移到固体培养基上后,发展成了白色松软型的愈伤组织。将其转移到附加6-苄氨基嘌呤和吲哚丁酸的 N6培养基上继续培养了2—3个月后,表面出现了浅黄色、颗粒状的胚性愈伤组织。后者在附加吲嗓丁酸和萘乙酸的 MS 培养基上培养,可通过体细胞胚胎发生途径分化出大量小植株。对供体愈伤组织和原生质体再生植株进行了细胞学观察。

蜂斗菜叶肉原生质体培养再生植株

用4%纤维素酶RS,2%半纤维素酶和1%果胶酶Y-23及多聚半乳糖醛酸酶的混合酶液,从蜂斗菜(Petasites japonicus)叶片分离出高产率的原生质体。原生质体培养在无机盐为1/4 MS、维生素为1/2MS、附加NAA2 mg/L、BA 0.2—0.5mg/L的甘露醇0.5mol/L、蔗糖10 g/L的液体培养基里,分裂旺盛。形成愈伤组织后经芽的诱导,生根培养获得了再生植株。

甘蓝型油菜原生质体培养获得再生植株的研究

以甘蓝型油菜下胚轴游离获得原生质体。经液体-固体双层培养,原生质体分裂、增殖。约四周左右形成细胞团和肉眼可见的小愈伤组织。然后转入固体培养基中增殖。待愈伤组织长到直径约5mm 大小转入分化培养基中。两周后形成绿芽,并诱导生根,获得再生植株。

从棉花胚性细胞原生质体培养获得植株再生

原生质体培养植株再生是进行体细胞杂交与基因工程操作的重要基础工作。近年来,国内外已有一些关于棉花原生质体分离与培养的研究报告,1986年 Firoozabady 报道从陆地棉(Ghirsutum)叶肉原生质体培养获得2—3个细胞的微克隆,1987年

普通野生稻胚性细胞悬浮系的建立及原生质体再生植株

广西普通野生稻(Oryza rufipogon)2个品种的成熟种子经54±1℃温度处理5d打破休眠后,诱导产生出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养。经6个月继代培养,建立起胚性细胞悬浮系。其中1个品种(No.40)的悬浮细胞经酶解游离获得大量原生质体,用琼脂糖包埋培养,2周内分裂频率达21.4％。形成的小愈伤组织经增殖后在分化培养基上再生出绿色小植株。

水稻原生质体培养与品种改良

原生质体培养在作物改良工作中，国内外目前有如下几方面的应用：（１）原生质体融合：利用该技术转移细胞质基因控制的农艺性状，如细胞质雄性不育，这在水稻（Ｙａｎｇ１９８８，Ａｋａｇｉ１９８９，Ｋｙｏｚｕｋａ１９８９，ＴｏｓｈｉｒｏＫ．１９９５）、油菜（Ｐｅ...

戴维逊棉的组织培养与原生质体培养研究

本文以野生棉戴维逊棉(Gossypium davidsonii)为材料研究体细胞胚与器官发生、小植株再生及原生质体培养。子叶、胚轴、幼茎切段、根尖和叶片作为外植体,在含有2,4-D0.1+KT 0.1;2,4-D 0.1+KT 0.01;NAA(IAA)2.0+KT 0.1和 NAA(IAA)+KT 0.1mg/L 修改的 MS 培养基上诱导愈伤组织,从子叶、胚轴、幼茎切段和叶片均能发生愈伤组织。同时,建立了细胞悬浮系。当愈伤组织在含有适当的 6-BA、ZT 或 2ip+NAA 的 MS固体培养基上,可以发生体细胞胚,不定芽和叶状体。体细胞胚在含有低浓度 6-BA、ZT 或NAA 的培养基上均能发育成小植株。从愈伤组织和悬浮细胞可以制备得到大量有活力的原生质体。原生质体培养在2,4-D 0.5+ZT 0.1—0.2+NAA 0.5—1mg/L 的修改 MS 培养基上,3—4天之后发生第一次细胞分裂,分裂频率是3—4%,14天之后可形成小细胞团,但以后逐渐强化死亡。关于这方面的研究还需进一步探讨。

四季樱草叶肉原生质体植株再生

以四季樱草为材料，用国产纤维素酶一步法分离叶肉原生质体．用液体浅层静置培养的方法培养原生质体．培养基为Ｂ５基本培养基附加ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ、２，４—Ｄ２ｍｇ／Ｌ和甘露醇０．６５ｍｏｌ／Ｌ．细胞分裂旺盛，培养２天后观察到第一次细胞分裂，１０天后形成小细胞团，１５天左右添加一次新鲜的不含甘露醇的培养液，使渗透压减半．将形成直径为１—２毫米的小愈伤组织转到分化培养基上，再生成完整植株．

甘蓝子叶原生质体培养与植株再生的研究

将0.5％纤维素酶Rs+0.1％果胶酶Y-23酶溶液振荡处理3h,可得到最高的细胞分裂率,但原生质体分离数量较低。0.5％纤维素酶R-10+0.05％离析酶R-10+0.05％果胶酶Y-23酶溶液,25℃下处理14h,原生质体分离数量及细胞分裂率均较高。1/2MS培养基添加NAA3mg/L+BA0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L的液体培养基有利于细胞团形成及愈伤组织生长。本试验获得了完整的再生植株,芽分化率达20％左右。

刀豆(Canavallia ensiformis)叶肉原生质体培养与植株再生

用刀豆原生质体为材料,从培养分化开始,经过无菌苗的培养、酶解、原生质体分离、原生质体培养及愈伤组织培养五个阶段,长成完整植株,整个周期为217d。本文对整个培养过程中的条件作了详细探索和讨论。