Prkra小耳小鼠动物模型在先天性小耳畸形研究中的应用

目的研究Prkra小耳小鼠动物模型的构建方法,并探讨其用于先天性小耳畸形研究的可行性。方法从美国JAX实验室引进同窝Prkra little ear(小耳)小鼠6只,通过繁育共获得13只Prkra小耳小鼠孕鼠。其中10只孕鼠共取75只胎龄为14.5 d的胎鼠尾,提取DNA进行Sanger法测序;3只孕鼠正常生产,幼鼠出生后常规饲养,取耳廓畸形和耳廓正常的40 d子鼠各3只,进行骨骼阿利新蓝染色,并作对比分析。结果Prkra小耳纯合型小鼠耳廓明显比其同胞正常耳廓小,失去了正常小鼠耳廓的亚结构形态。DNA测序结果表明,突变位点为在2号染色体76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A突变,该突变位点位于第3外显子之后。阿利新蓝染色结果显示,Prkra小耳纯合型小鼠体型较正常野生型小,四肢骨发育基本正常,但较细短,后肢表现尤为明显,肋骨发育较细小,尾骨发育较细短,头颅发育略小。结论成功构建了Prkra小耳小鼠模型,而且该模型是研究先天性小耳畸形胚胎发育机制比较合适的动物模型。

先天性小耳畸形候选致病基因的筛选

目的应用Affymetrix SNP 6.0芯片技术筛选先天性小耳畸形的候选致病基因。方法对3例小耳畸形患者血液基因组进行Affymetrix SNP 6.0芯片分析,采用Birdseed软件分析样本的芯片数据,通过Minor Allele Frequency对在患者和汉族人参考样本中有显著差异的单核苷酸多态性(SNP)进行筛选。结果得到SNP相关基因4 180个,根据已知文献收集和耳部发育相关并被SNP 6.0注释的基因共5个,包括MSX1,MSX2,GSC,HOXA2和PRKRA。结论应用Affymetrix SNP 6.0芯片技术筛选出5个先天性小耳畸形的候选致病基因,分别是MSX1,MSX2,GSC,HOXA2和PRKRA。