原花青素C1可有效抑制过氧化氢刺激所致的成骨细胞衰老

目的探讨原花青素C1(PCC1)对成骨细胞衰老的保护作用。方法应用不同浓度过氧化氢刺激成骨前体细胞系MC3T3后通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测成骨细胞活性,选取活性抑制率约为50%的浓度用于诱导MC3T3细胞衰老。依据不同处理措施,将细胞分为对照组、衰老组和PCC1组。正常组加入完全培养基,衰老组加入含1μmol/L H_(2)O_(2)的完全培养基,PCC1组加入含1μmol/L H_(2)O_(2)和5μmol/L PCC1的完全培养基。CCK-8用于检测成骨细胞活性。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)用于检测经不同处理后MC3T3细胞中衰老相关基因p53、p16INK4a、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13的表达。采用β-半乳糖苷酶染色检测成骨细胞β-半乳糖苷酶阳性表达。两组之间采用t检验进行统计分析。结果PCC1可以显著抑制过氧化氢刺激而所致的细胞活性降低,衰老组细胞活性降低显著程度低于PCC1组[(44.54±2.38)%比(30.45±2.84)%,t=7.60,P<0.05];RT-qPCR结果显示,衰老组中p53、p16INK4a、p21、MMP-3、MMP-13等衰老相关基因表达显著高于对照组[p53(2.00±0.06比1.00±0.02,t=28.13,P<0.05),p16INK4a(1.65±0.07比1.00±0.01,t=16.01,P<0.05),p21(2.58±0.14比1.00±0.01,t=19.05,P<0.05),MMP-3(2.52±0.13比1.00±0.02,t=19.16,P<0.05),MMP-13(1.83±0.06比1.00±0.02,t=21.75,P<0.05)];衰老组中相关基因表达显著高于PCC1组[p53(1.35±0.10比1.00±0.02,t=9.47,P<0.05),p16INK4a(1.18±0.05比1.00±0.01,t=9.62,P<0.05),p21(1.56±0.11比1.00±0.01,t=9.83,P<0.05),MMP-3(1.66±0.07比1.00±0.02,t=9.74,P<0.05),MMP-13(1.35±0.07比1.00±0.02,t=8.85,P<0.05)]。Western blot结果显示,衰老组衰老相关蛋白表达显著高于PCC1组[p53(1.35±0.02比1.65±0.07,t=9.22,P<0.05),p16INK4a(0.80±0.02比0.39±0.05,t=12.55,P<0.05),p21(1.48±0.08比0.85±0.03,t=13.28,P<0.05),MMP-3(0.41±0.01比0.57±0.02,t=10.19,P<0.05)];PCC1组衰老相关蛋白表达量显著低于衰老组[p53(1.38±0.05比1.65±0.07,t=7.40,P<0.05),p16INK4a(0.53±0.04比0.80±0.02,t=11.64,P<0.05),p21(1.14±0.12比1.48±0.08,t=3.98,P<0.05),MMP-3(0.43±0.02比0.57±0.02,t=7.87,P<0.05)]。β-半乳糖苷酶染色显示,PCC1组相较于衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞显著减少。结论原花青素C1可以减缓成骨细胞衰老,提高成骨细胞活性。