多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利敏感基线的建立及抗药性监测

为明确我国山东和辽宁地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗药性现状,采用菌丝生长速率法,测定了多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的敏感性,建立了敏感基线;采用区分剂量法,测定了多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗药性。结果表明,乙霉威和腐霉利对多主棒孢敏感菌株的平均EC50值分别为(0.22±0.06)μg·mL^(-1)和(2.75±0.91)μg·mL^(-1),两者的敏感性频率均呈连续性单峰曲线,总体呈正态分布,可作为多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的敏感基线。对采集自山东和辽宁地区的828株多主棒孢菌进行抗性水平监测,发现多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利的抗性水平不断升高,山东地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利抗性频率从2017年的58.06%和43.55%上升到2021年的91.30%和78.99%,辽宁地区多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利抗性频率从2017年的67.44%和53.49%上升到2021年的82.14%和83.33%。表明多主棒孢菌对乙霉威和腐霉利具有高度的抗性风险,建议在黄瓜生产中乙霉威和腐霉利与其他类型杀菌剂交替或者混合应用,延缓抗药性的发展。

2023年佛山市禅城区果蔬中腐霉利残留及膳食风险评估

目的:调查掌握佛山市禅城区市售不同种类果蔬的腐霉利残留情况,及时发现食品安全隐患,进行风险预警,为开展食品安全风险评估、食品安全标准制(修)订和采取针对性控制措施提供科学依据。方法:在佛山市禅城区4个镇街道不同销售流通环节随机采集6种果蔬样品共200份,使用QuEChERS法进行净化处理,参照GB 23200.113-2018采用气相色谱质谱联用法测定腐霉利的含量,根据检测结果运用急性和慢性膳食风险评价法以及食品安全指数法对其残留情况和由其引发的居民健康风险进行评价。结果:采集的样品中,43份样品检出腐霉利,检出率为21.50%,不同类型样品中腐霉利检出率差异具有统计学意义(χ^(2)=46.735,P<0.01);不同流通环节样品中的腐霉利检出率差异不具有统计学意义(χ^(2)=3.251,P=0.196>0.05);4个镇街道采集到的蔬菜水果腐霉利检出数总体上无显著性差异(χ^(2)=7.436,P=0.063>0.05);经急性和慢性膳食风险评价,受检产品的%ARfD和%ADI值均小于100%,表示摄入风险可接受;食品安全指数法评价本次受检农产品的结果为质量安全风险处在可接受范围。结论:佛山市禅城区果蔬农产品尚未发现腐霉利超标情况,食品安全风险可控,但有关部门需持续开展动态监控。

韭菜粉中腐霉利标准物质的研制

目的研制韭菜粉中腐霉利标准物质,并联合多家实验室以同位素稀释内标法测试定值。方法以含腐霉利的韭菜为原材料,样品经冲洗除杂、粉碎、添加防腐剂、均质、匀浆、冷冻干燥后,过筛混匀,在洁净干燥条件下以聚乙烯塑料袋外套铝塑复合袋真空封装,再由^(60)Co-γ射线辐照灭菌,最终研制出韭菜粉中腐霉利标准物质。依据GB 23200.113—2018《食品安全国家标准植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定》中气相色谱-质谱法的前处理方法,多家实验室采用同位素稀释内标-气相色谱-串联质谱法对腐霉利的含量进行联合定值。结果韭菜粉中腐霉利标准物质回收率为88.1%~104.5%,均匀性和稳定性良好,特性值为0.223 mg/kg,扩展不确定度为0.021 mg/kg(k=2),在–18℃下冰冻保存有效期为18个月。结论所制备的韭菜粉中腐霉利标准物质可作为实验室腐霉利农药残留检测的质控样品,对于农药腐霉利的精准检测具有重要意义,可推广应用于快速检测产品评价、能力验证考核、方法验证等各个领域。

一种腐霉利衍生物的设计与合成

含羧基基团的腐霉利衍生物,其羧基能够与蛋白质分子发生酰化或重氮化反应,能够对农药残留快速进行分析检测,在食品安全领域具有潜在应用价值。以2-氯丙酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯为原料,通过亲核取代、酯水解、脱水反应、烷基化、硝基还原、氨基酰基化、酸胺缩合和三氟乙酸水解8步反应合成了腐霉利半抗原衍生物,其结构经^(1)H NMR,^(13)C NMR和MS(ESI)表征,并对其关键的合成工艺进行优化。结果表明:2-氯丙酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯的反应时间为96 h时,亲核取代反应的收率最高为70%。硝基还原过程中,以二氯亚锡水合物作还原剂,且二氯亚锡水合物与中间体8的物质的量之比为4.0∶1.0时,硝基还原反应收率最高为63%。当化合物5和化合物9的物质的量之比为1.5∶1.0,且反应温度为85℃时,氨基酰基化反应最高收率为50%。

腐霉利的合成及密度泛函理论研究

我们以3,5-二氯苯胺、1,2-二甲基环丙烷-1,2-二甲酸甲酯(以下简称二甲酯)为原料制备得到了腐霉利。以降低原料消耗量,减少“三废”排放以及提高经济效益为目标,对腐霉利制备中的投料比、反应温度、溶剂进行了优化,确定了最佳反应条件。当使用水作为溶剂,3,5-二氯苯胺与二甲酯的摩尔比为1∶1,反应温度100℃时,以高收率低消耗得到腐霉利。同时,将密度泛函计算与前线轨道理论相结合,对腐霉利可能的衍生方式进行研究。

韭菜中腐霉利标准样品的均匀性和稳定性评估

本文的研究对象为分装成最小单元的韭菜中腐霉利标准样品,对韭菜中腐霉利标准样品的均匀性和稳定性进行了研究。均匀性和稳定性监测结果分别经F值、t检验表明,单元内和单元间均匀程度以及标准样品的稳定性均达到标准样品的制备要求。

气相色谱法测定韭菜中腐霉利含量的不确定度评估

本实验采用QuEChERS前处理,气相色谱法(QuEChERS-GC-ECD)检测韭菜中的腐霉利含量,并做出不确定度评估。以JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL006《化学分析中不确定度的评估指南》为指导,通过分析梳理各个检测环节,找出可能影响检测结果准确性的多个不确定因素,并对其做出系统分析、科学评估和量化处理。结果显示,引入本法不确定度的环节包括:标准溶液配置(标准物质及定容过程)、样品前处理(样品称量及试剂移取过程)、样品的重复性测定过程及仪器本身性能引入的不确定度。得到了韭菜中腐霉利含量测定的合成相对标准不确定度为0.335 mg/kg,扩展不确定度为0.670 mg/kg,本实验测得的腐霉利含量结果可表示为(8.24±0.670)mg/kg,k=2。建立了该分析方法的数学模型,为提高该法测定结果的准确性、科学性、稳定性提供了技术支撑。

桐乡市油菜菌核病减药增效防治

为明确浙北桐乡地区油菜菌核病在不同栽培方式下的防治情况,开展药剂试验。结果表明:油菜菌核病在直播田块较移栽田块重。腐霉利与多菌灵在不同栽培方式的田块下防治效果不同,腐霉利防治效果均好于多菌灵。每667 m^(2)腐霉利的农药使用量仅为多菌灵的五分之一,单位面积减少农药用量明显。腐霉利可以推广代替多菌灵用于防治油菜菌核病,这可为防治油菜菌核病减药增效提供一定的技术参考。

基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利

为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法(colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA)应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明:胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下,纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L,其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理,利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性,省去了有机溶剂吹干程序,加标样品平均回收率介于80.1%~109.6%之间,且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测,所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势,可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。

腐霉利核酸适配体的筛选与鉴定

本文通过氧化石墨烯-体外指数富集配体系统进化技术,筛选并获得靶向腐霉利的核酸适配体Pr-A06和Pr-A08,通过二级结构预测,两种核酸适配体形成茎环结构和分子内G-四链体,结构稳定。使用胶体金法初步鉴定Pr-A06和Pr-A08,研究结果表明Pr-A06和Pr-A08解离常数(K d)分别为42.94±8.142 nmol/L、27.01±6.519 nmol/L,亲和力较好,并且特异性良好。Pr-A06浓度在0.1~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.153μg/mL,Pr-A08浓度在0.05~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.115μg/mL。本研究筛选的适配体为腐霉利的快速检测提供了新条件。

GC-MS法测定黄瓜中腐霉利的不确定度评估

依据GB 23200.113—2018标准方法,使用气相色谱-串联质谱法检测黄瓜中腐霉利农药残留,参照JJF 1059.1—2012要求对人员、设备和仪器等产生的不确定度进行分析,评估测定过程的不确定度。结果表明,95%置信区间下,k=2,黄瓜中腐霉利的添加量为0.200 mg·kg^(-1),最终测量值为0.19497 mg·kg^(-1),其扩展不确定度为0.005148 mg·kg^(-1);各项不确定来源中对检测结果影响最大的是样品定容。

腐霉利和烯酰吗啉在甘肃省平凉市设施番茄中膳食暴露风险评估

甘肃省平凉市农产品质检中心承担的2017—2021年5年市级例行监测任务中使用气相色谱-质谱联用法、液相色谱-串联质谱法测定58种农药。检测数据发现,232份设施番茄样品中腐霉利和烯酰吗啉农药残留合格率均为100%,但检出率分别21.55%和6.03%,相对其他农药检出率比较高;在检出腐霉利农药中有54%残留量分布在0.02~0.22 mg/kg范围,检出烯酰吗啉农药中有79%残留量分布在0.0001~0.1001 mg/kg范围,检出残留量相对比较集中,且2种农药的最高检出值均低于该农药最大残留限量值(MRL)。结果显示:腐霉利和烯酰吗啉慢性膳食摄入风险分别为1.21%和0.165%,均远小于100%。急性膳食摄入风险分别为8.06%和0.291%,远小于100%,急性和慢性风险均在可接受范围内;腐霉利和烯酰吗啉的风险得分分别为10.43和10.12,残留风险相对比较低,处于低风险水平。

果蔬汁中毒死蜱和腐霉利能力验证样品的研制及应用

本文通过制备果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测能力验证样品,来评价我国食品检测实验室对果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测的整体水平和能力。以青瓜和苹果为原料,制备毒死蜱和腐霉利残留果蔬汁基质参考物质,随机抽取10份考核样品检验均匀性。将考核样品放置在常温环境条件下储存检验运输稳定性,将考核样品放置在-18℃条件下储存检验储存稳定性。将能力验证样品以及参试指导书随机发放参加实验室,回收结果并进行稳健统计分析。样品的均匀性和稳定性良好,依据评价原则及回收的结果,大多数参加实验室检测结果评价满意。本次成功制备了果蔬汁中毒死蜱和腐霉利检测能力验证样品,通过组织能力验证考核反映出实验室在果蔬汁中毒死蜱和腐霉利的检测水平总体较好。

朝阳地区葡萄灰霉病对3种药剂的抗药性分析

[目的]灰霉病是葡萄生产中的主要病害之一,影响葡萄产量、品质,通过该试验明确朝阳地区葡萄灰霉病菌对腐霉利、乙霉威、嘧霉胺3种药剂的抗性。[方法]采集了123株菌株,采用最低抑制浓度法开展抗性频率检测,并分析抗性类型。[结果]朝阳地区葡萄灰霉病菌对腐霉利抗性频率为83.74%,对乙霉威抗性频率为57.72%,对嘧霉胺抗性频率为94.31%;抗性类型有6种,三重抗性菌株占比47.97%,双重抗性菌株占比41.47%。[结论]可为朝阳地区更有效防治葡萄灰霉病提供数据支撑。

35%异菌脲·腐霉利悬浮剂的液相色谱法分析

目的:建立高效液相色谱测定异菌脲·腐霉利悬浮剂中有效成分含量的分析方法。方法:采用C18反相高效色谱柱和紫外检测器,以乙腈-磷酸(体积分数0.04%)为流动相,对试样中的异菌脲和腐霉利进行分离,外标法定量分析。结果:异菌脲和腐霉利线性相关系数分别为0.9990和0.9997,标准偏差分别为0.09和0.18,变异系数分别为0.93%和0.79%,平均回收率分别为99.53%和99.63%。结论:该方法简单、快速、有效地分离了样品中的异菌脲和腐霉利,精密度和准确度高、线性关系好。

葡萄灰霉病菌对3种杀菌剂的多重抗药性检测

【目的】为检测葡萄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利和乙霉威3种杀菌剂的多重抗药性,指导生产上葡萄灰霉病的药剂防治。【方法】从甘肃、山东、北京等14个省、市、自治区采集葡萄灰霉病样分离纯化得到109个灰葡萄孢(Botrytis cinerea)单孢系菌株,采用最低抑制浓度法(MIC)测定了葡萄灰霉病菌对苯并咪唑类(多菌灵)、二甲酰亚胺类(腐霉利)和氨基甲酸酯类(乙霉威)杀菌剂的多重抗药性。【结果】结果表明,葡萄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利和乙霉威的抗药性菌株率分别达到了83.5%、14.7%和17.4%;抗药性类型有BenRDicSNPCS、BenRDicRNPCS、BenRDicRNPCR和BenSDicSNPCR4种,所占比例分别为68.8%、13.8%、0.9%和16.5%。【结论】我国不同地区的葡萄灰霉病菌对苯并咪唑类、二甲酰亚胺类和氨基甲酸酯类杀菌剂普遍存在抗药性问题,对多菌灵的抗药性较为严重,因此,在生产上,应选择一些替代的新型杀菌剂和生物农药。

番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性检测及生物学性状研究

采用区分剂量法,检测了来自福建省、上海市、辽宁省和内蒙古自治区不同采样点的番茄灰霉病菌Botrytis cinerea对腐霉利的抗性频率;选取未施药地区的敏感菌株,建立了灰霉病菌对腐霉利的敏感基线;比较了常年施药地区与未施药地区灰霉病菌的抗性频率差异,测定了施药10年以上地区番茄灰霉病菌的抗性指数;研究比较了抗、感菌株的生物学性状。结果表明:腐霉利对127株敏感菌株的平均EC50值为(0.31±0.08)μg/mL;供试4省市灰霉病菌对腐霉利均表现出了很高的抗性频率,其中内蒙古自治区和辽宁省采样点的抗性菌株频率高于90%;在施药历史超过10年的215株田间菌株中,抗性水平最高的菌株来自辽宁省,抗性指数为44.3;施药地区灰霉病菌的抗性频率均高于未施药地区;抗性菌株的抗药性可稳定遗传;供试11株抗性和敏感菌株在产孢量和孢子萌发率、菌丝生长速率、活体致病力等生物学性状方面的差异与其抗性水平之间无明显相关性。

醚菌酯和腐霉利在温室草莓中的残留行为及其膳食摄入风险评估

为明确醚菌酯和腐霉利在温室条件下在草莓中的残留行为及其可能产生的膳食摄入风险,于2012—2013年在北京的日光温室进行了醚菌酯和腐霉利喷施草莓的3次田间农药残留试验,建立了一种快速、简便的气相色谱-质谱联用检测草莓果实中农药残留量的方法,并对不同人群的膳食暴露及风险进行了评估。草莓样品经乙腈提取,PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）净化,采用气相色谱分离,四极杆质谱检测,外标法定量。结果表明：醚菌酯和腐霉利在温室草莓中的消解均符合一级动力学方程,醚菌酯为c=0.804 7e-0.114t,R2=0.935 6,半衰期为6.1 d;腐霉利为c=3.283 9e-0.098t,R^2=0.927 9,半衰期为7.1 d10当醚菌酯有效成分用量为97.5和195 g/hm^2,腐霉利有效成分用量为375和750 g/hm^2时,喷药2次和3次,施药间隔期7 d,于末次喷药后1、2、3和5 d采收草莓,其残留量分别在0.09-1.52和0.12-5.81 mg/kg之间。两种药剂的最终残留量均不超过我国规定的最大残留限量（MRL）标准。膳食暴露慢性和急性风险评估结果表明：施药后1-5 d采收的草莓中,醚菌酯和腐霉利对2-6岁、7-14岁、18-30岁和60-70岁的男、女共8类不同人群的膳食摄入风险均在可接受范围之内。

韭菜中腐霉利的残留检测及长期膳食暴露评估

建立了一种简便、高效的QuEChERS前处理结合高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)检测韭菜中腐霉利残留量的方法。于2019年在中国黑龙江、辽宁、河南、山东、安徽、湖南、广西及福建8地开展了田间规范残留试验,研究了腐霉利在韭菜中的残留风险,并进行了韭菜中腐霉利残留的长期膳食暴露评估。样品采用乙腈提取,N-丙基乙二胺(PSA)和石墨化碳黑(GCB)净化,HPLC-MS/MS检测,外标法定量。结果表明:在添加水平为0.02~20 mg/kg范围内,腐霉利在韭菜中的回收率为74%~98%,相对标准偏差(RSD)为4.6%~9.9%,定量限(LOQ)为0.02 mg/kg。50%腐霉利可湿性粉剂以有效成分450 g/hm^(2)的剂量于韭菜灰霉病发病初期或前期施药1次,施药后间隔30 d采样,腐霉利在韭菜中的最终残留量为0.04~1.06 mg/kg。长期膳食暴露评估结果显示:腐霉利的国家估算每日摄入量(NEDI)为2.5562 mg,风险商值(RQ)为40.6%,表明腐霉利在韭菜中的长期膳食摄入风险较低。

灰葡萄孢对速克灵抗性的研究

从江苏各地采集番茄等15种蔬菜灰霉病标本,经分离获灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.)127株。以速克灵有效成分5μg·mL^(-1)为标准,检测灰葡萄孢对速克灵的抗性。结果表明:病菌抗速克灵菌株频率平均为11.0％。抗性菌株中,85.7％属低抗水平,EC_(50)值在2.21～6.67μg·mL^(-1)之间。但菌株D_(1-3)抗药性水平极高,EC_(50)和EC_(95)分别达263.78和6000μg·mL^(-1)以上,EC_(95)值约是敏感菌株的1400倍。抗性菌株转管培养15和30代后,抗性水平仍较稳定。抗性菌株在菌丝生长速度、分生孢子与菌核形成以及对番茄致病力等方面无明显规律性,但高抗菌株D_(1-3)具有很强的生长、繁殖能力和致病力。