蜂毒肽诱导人肝癌细胞系SMMC-7721程序性坏死

目的探讨蜂毒肽(MLT)对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用。Hoechst 33342及PI双染色观察细胞程序性坏死的发生,流式细胞术检测细胞程序性坏死率,透射电子显微镜检测细胞超微结构变化,Western blotting法检测SMMC-7721细胞内受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达变化。结果与对照组比较,不同浓度蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h后,细胞增殖活力明显下降(P<0.05);细胞染色呈深蓝色和红色的形态;细胞膜完整性被破坏、细胞器肿胀、细胞器膜被破坏、核膜完整性丧失,表明细胞发生坏死;Westen blotting结果显示,SMMC-7721细胞内RIP1表达比例升高。与蜂毒肽给药组比较,Nec-1预处理组细胞增殖活力显著提高,细胞坏死率降低,细胞内RIP1表达下调。结论蜂毒肽通过RIP1介导的程序性坏死途径诱导SMMC-7721细胞死亡。

程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠心肌受体作用蛋白表达的影响

目的 探讨不同剂量程序性坏死特异性抑制剂-1（Nec-1）对脓毒症大鼠心肌保护作用的量效关系.方法 50只SD大鼠按随机数字表法分为5组（n=10）：空白组、模型组、Nec-1小剂量组、Nec-1中剂量组、Nec-1大剂量组,采用鼠尾静脉注射内毒素方法建模,在建模6h后收集标本,通过光镜观察心肌组织形态学变化,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组血浆肌钙蛋白（cTnI）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）,采用Western blot法检测心肌组织中受体作用蛋白1（RIP1）、受体作用蛋白3（RIP3）的表达.结果 与空白组比较,模型组血浆cTnI[（7.58±0.46）比（1.06±0.17）ng/ml]、TNF-α[（937.86±53.36）比（236.95±28.68）pg/ml]、IL-6[（776.13±17.94）比（168.35±20.60）pg/ml]活性均增高（t=-30.561,P=0.000;t=-32.122,P=0.000;t=-39.684,P=0.000）,RIP1、RIP3蛋白表达（1.22±0.14比0.41±0.11,t=-17.480,P=0.000;1.15±0.02比0.18±0.08,t=-52.463,P=0.000）均增高.与模型组比较Nec-1干预组cTnI[（7.24±0.41）、（4.43±0.84）、（1.26±0.17）比（7.58±0.46）ng/ml;t=1.622,P=0.112;t=14.765,P=0.000;t=29.606,P=0.000]、TNF-α[（878.73±70.24）、（437.43±59.26）、（273.44±23.745）比（937.86±53.36）pg/ml;t=2.637,P=0.012;t=22.221,P=0.000;t=29.235,P=0.001]、IL-6[（719.18±49.83）、（381.89±28.69）、（221.93±42.58）比（776.13±17.94）pg/ml;t=3.722,P=0.000;t=25.743,P=0.000;t=36.184,P=0.000],RIP1、RIP3蛋白表达（0.83±0.09、0.70±0.09、0.55±0.09比1.22±0.14;t=8.598,P=0.000;t=11.297,P=0.000;t=14.511,P=0.000;0.94±0.02、0.73±0.01、0.53±0.04比1.15±0.02;t=10.961,P=0.000;t=22.405,P=0.000;t=33.414,P=0.000）,且随着Nec-1剂量升高表达依次下降.心肌病理损伤在Nec-1大剂量组表现最轻.结论 大剂量Nec-1能改善脓毒症时心肌组织的病理性炎症损伤;Nec-1能抑制脓毒症心肌组织RIP1、RIP3蛋白表达.