人胰岛素原类似物(BKRA)基因的合成与表达

为了利用基因工程生产胰岛素，按照已知的人胰岛素Ａ、Ｂ链氨基酸序列和大肠杆菌偏爱的氨基酸密码子设计并合成了人胰岛素原类似物（ＢＫＲＡ）基因，其中以赖（Ｋ）－精（Ｒ）二肽编码区取代人胰岛素原Ｃ肽编码区．为了避免其编码蛋白在大肠杆菌中表达时被降解，通过人工接头将２个ＢＫＲＡ基因串联起来，接头部分氨基酸序列为Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ．将串联的ＢＫＲＡ基因克隆到表达载体ｐＥＴ－２８ａ（＋），实现了在大肠杆菌中的融合表达，表达产物以包含体形式存在，约占细菌总蛋白２４％．表达产物氨基末端具有六组氨酸肽段，以ＨｉＴｒａｐ凝胶进行亲和层析，一步纯化可达纯度９５％以上．放射免疫测定表明，纯化的融合蛋白具有胰岛素抗原活性．