依普利酮抑制细胞增殖拮抗急性环孢素A肾损伤的研究

目的探讨盐皮质激素受体阻断剂依普利酮抑制细胞增殖拮抗环孢素A肾损伤的作用。方法经口灌服环孢素A(100 mg.kg-1.d-1),诱导小鼠急性肾脏损伤,给以依普利酮100 mg.kg-1.d-1治疗,d 10采血、摘取肾脏。放免法检测血清醛固酮水平,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、纤连蛋白表达;RT-PCR、Western blot检测PCNA、FN、TGF-β1表达。结果血清醛固酮水平检测显示环孢素A组(318.83±95.72)ng.L-1较空白对照组(82.05±23.04)ng.L-1升高,依普利酮可明显抑制其分泌(149.50±36.20)ng.L-1。环孢素A组肾脏PCNA阳性细胞增多,纤连蛋白表达增强;PCNA、FN、TGF-β1蛋白及mRNA表达较空白对照组明显上调,依普利酮可抑制其表达。结论依普利酮可以抑制醛固酮的分泌、抑制细胞增殖,减轻环孢素A诱导的肾脏损伤。

肉苁蓉苯乙醇苷对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨肉苁蓉苯乙醇苷(Cistache deserticola phenylethanoid glycosides,CPhGs)对HepG2细胞增殖、凋亡的影响。方法实验以HepG2细胞为研究对象,采用MTT及平板克隆实验检测细胞增殖情况、Annexin V-FITC/PI、Hochest33258和线粒体染色法分析细胞凋亡、流式细胞术分析细胞周期,免疫印迹法检测Bcl-2、Cleaved-Caspase3及PARP表达情况。结果CPhGs可抑制HepG2细胞增殖,IC50为187μg/mL;平板克隆实验发现,CPhGs中、高剂量组对HepG2细胞有明显的抑制作用(P<0.01)。通过倒置显微镜、细胞核及线粒体染色发现,CPhGs各组均可诱导HepG2细胞发生凋亡。同时,Annexin V/PI双染实验结果表明,CPhGs各组均诱导HepG2细胞发生早期凋亡(P<0.01),且呈现一定的剂量依赖性;CPhGs各剂量组还可将HepG2细胞周期阻滞在S期(P<0.01)。Western-blot结果显示,CPhGs可诱到凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3及PARP表达的增加,同时还可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.01)。结论CPhGs对HepG2细胞具有一定的抑制增殖、诱导凋亡的作用,其机制可能与调控细胞周期、诱导细胞凋亡相关蛋白表达有关。

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞(mESC)增殖和凋亡的影响。方法 mESC分为完全培养基组(对照组),无叶酸培养基组(无叶酸组),无叶酸培养基+miR-302amimic组(miR-302a组),通过RT-PCR进行检测miR-302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR-302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR-302a mimic对mESC活力的影响,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞周期的影响;Western blot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27表达的影响。结果 RT-PCR证实无叶酸组中miR-302a表达量下降(P<0.01)。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无叶酸组比较,miR-302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

应用MTT测定PBMC增殖最佳条件的研究

对ＭＴＴ（噻唑蓝）测定离休ＰＢＭＣ（外周血单核细胞）增殖最佳实验条件进行了研究，结果表明，在测定由不同有丝分裂原（ＰＷＭ、ＳＥＢ和ＣｏｎＡ）诱导的ＰＢＭＣ增殖中，ＭＴＴ的Ｏ．Ｄ值和表示３￣Ｈ一ＴｄＲ摄取量的ｃｐｍ值呈正相关（ｒ＝０．９１５～０．９８２，ｐ＜０．０５，ｐ＜０．０１）。在ＰＢＭＣ密度为２．５×１０￣５／孔、孵育时间为４ｄ～６ｄ的条件下Ｐ／Ｈ比值最大，此外，细胞培养基中的血清种类及其浓度也是重要的影响因素。ＭＴＴ的浓度及催化形成噻唑盐的时间在达４ｈ后对Ｐ／Ｎ比值影响不大。所有这些表明，只要选择最佳条件，应用非同住素标记的ＭＴＴ法可在科研和常规检验时测定畜禽ＰＢＭＣ增殖。

血小板第4因子对造血细胞增殖的影响

目的研究血小板第４因子（ＰＦ４）预处理与造血干细胞（ＨＳＣ）及祖细胞集落增殖间关系。方法用小鼠骨髓及人脐血细胞经ＰＦ４预处理４８ｈ后接种在半固体培养基上，１２ｄ后对出现的细胞集落进行免疫组化染色及镜下分类计数。结果经ＰＦ４预处理后ＨＳＣ增殖力增强，所形成的细胞集落显著多于对照组，Ｐ＜０．０５。结论ＰＦ４不仅是巨核细胞形成的抑制性因子，而且是提高早期造血细胞比例的因子之一。

低功率微波对K562细胞增殖的影响

目的探讨低功率微波影响K562细胞活力的机制。方法将二种频率的低功率微波作用于K562细胞,测定细胞存活率,监测联苯胺染色、其他组织化学染色情况及光镜下观察形态。实验分组为0、15、30、45、60、75、90min组共7组。结果与对照组相比,二种频率的低功率微波辐射15min、75min和90min组,K562细胞活性降低,各组的光镜下形态和相应的组织化学染色无明显差别。结论低功率微波幅射对K562细胞有抑制增殖的作用。

胰岛素类似物生长因子1受体基因沉默对人肾上腺皮质癌细胞株SW13增殖凋亡的影响

目的探讨胰岛素类似物生长因子1受体(IGF1R)基因沉默对人类肾上腺皮质癌细胞株SW13增殖及凋亡的影响。方法依据人类IGF1R的cDNA序列合成其特异性SiRNA,通过脂质体将其转入SW13细胞,24h后通过实时定量Real time PCR检测SiRNA对靶基因mRNA下调作用,同时使用Western blot检测其靶蛋白的表达。通过MTT法测定转染后细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞凋亡状态。结果3种不同的针对IGF1R的SiRNA能够有效下调SW13细胞IGF1R mRNA,而通过Western blot也发现在蛋白水平出现类似结果。IGF1R基因沉默能够有效抑制SW13细胞增殖以及诱导细胞凋亡。结论IGF1R基因沉默能够诱导肾上腺皮质癌细胞凋亡,抑制其增殖,有望为肿瘤靶向治疗在ACC中应用提供相应的理论依据。

miR-105-3p在多囊卵巢综合征患者中的表达及对人卵巢颗粒细胞增殖凋亡的影响

目的观察microRNA-105-3p(miR-105-3p)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血中的表达特征及其对体外人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和凋亡的影响。方法选择PCOS患者作为PCOS组,同龄健康女性作为对照组,记录临床信息和生化指标,并采用荧光定量PCR(qRT-PCR)分析两组中miR-105-3p的表达量。再将miR-105-3pmimics转染KGN细胞,采用MTT比色法和酶联免疫吸附测定观察miR-105-3p表达改变对KGN细胞增殖和凋亡的影响。结果与对照组比较PCOS组患者体重指数、黄体生成素、雌二醇、催乳素、总睾酮、游离睾酮含量、卵巢体积和卵巢滤泡数均较高,而卵泡刺激素含量和每年月经数较低(P<0.05)。miR-105-3p在PCOS组中的表达量显著低于对照组(P<0.05)。KGN细胞转染后,miR-105-3p mimics中miR-105-3p的表达量显著高于mimics阴性对照(P<0.05)。MTT比色法显示体外转染miR-105-3p mimics至KGN细胞可显著抑制细胞增殖(P<0.05)。miR-105-3p mimics转染的KGN细胞中Caspase-3、Bax显著高于mimics阴性对照(P<0.05),Bel-2反之。结论miR-105-3p在PCOS外周血中表达下调,体外过表达miR-105-3p可显著抑制KGN细胞生长并促进凋亡,捉示miR-105-3p与PCOS病理过程密切相关,并可能作为PCOS诊治的新候选物标志物。

PA－MSHA菌苗对小鼠淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响

经基础研究和初步临床应用表明，ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗对肿瘤的生长有抑制作用。本文通过体外实验发现，该菌苗有刺激小鼠淋巴细胞增殖的作用，并对ＮＫ细胞杀伤靶细胞的活性有增强作用，其刺激增殖和活性增强作用，在一定范围内与菌苗的使用浓度成正比关系。提示ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗可能是一种良好的诱导增强淋巴细胞和ＮＫ细胞功能活性的刺激剂。

自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路抑制A549肺癌细胞增殖

目的 探讨自噬基因Beclin-1过表达对A549肺癌细胞自噬和增殖的影响以及其作用机制.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1 mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝（MTT）法检测各组A549细胞生长增殖;单丹磺酰戊二胺（MDC）法检测各组A549细胞自噬的变化;Western blot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4（ECRG4）蛋白表达变化.结果 与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,A549细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,Beclin-1过表达组细胞群体平均倍增时间[（46.0＆#177;2.4）h]显著延长（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,自噬细胞阳性数量[（10.0＆#177;1.5）个]显著增加（P＜0.05）;与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,ECRG4蛋白表达增加（P＜0.05）.结论 自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路抑制A549肺癌细胞增殖.

二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及蛋白激酶B/叉头框蛋白O1（Akt/FoxOl）信号通路磷酸化水平的影响.方法 将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为培养液处理的空白对照组和用含不同浓度二甲双胍培养液处理的实验组,给药后48 h采用CCK-8比色法检测细胞增殖,western blot技术检测Akt 、FoxO1的磷酸化水平,羟脯氨酸试剂盒检测胶原的合成.结果 二甲双胍可显著抑制成纤维细胞的增殖,用30、60、90、120 mmol/L不同浓度的二甲双胍处理成纤维细胞后,成纤维细胞的抑制率依次升高为（13.30±2.04）％、（22.64±4.70）％、（54.00±5.34）％和（63.12±3.48）％,呈明显的剂量依赖性.与空白对照组比较,二甲双胍处理后的成纤维细胞中Akt、FoxO1磷酸化水平降低,胶原蛋白产生减少,并且呈剂量依赖性（P ＜0.05,P＜0.01）.结论 二甲双胍可显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成,其机制可能与调控Akt/FoxOl信号通路的磷酸化水平有关.

肉苁蓉苯乙醇总苷对Bel-7405肝癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对Bel-7405肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度CPhGs干预Bel-7405肝癌细胞后,计算其IC_(50),根据IC_(50)设置后续实验干预浓度分别为0、35、70和140μg/ml,采用MTT与划痕实验检测CPhGs对Bel-7405肝癌细胞活性及增殖情况、Annexin V-FITC/PI、Hochest33258及线粒体染色检测细胞凋亡变化,Western blot检测Pro-PARP、cleaved-PARP、Pro-Caspase-9、cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3等凋亡蛋白表达情况。结果CPhGs对Bel-7405肝癌细胞的IC_(50)为298μg/ml,随着CPhGs浓度增加,Bel-7405细胞增殖抑制作用逐渐增强(P<0.01);细胞在24 h及48 h迁移率随CPhGs剂量的增加而减少(P<0.01);CPhGs各剂量组均可诱导Bel-7405肝癌细胞凋亡,且有一定的剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33258及线粒体染色发现,CPhGs各剂量组均可诱导细胞凋亡;凋亡相关蛋白Pro-PARP、Cleaved-PARP、Pro-Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、Pro-Caspase-9及Cleaved-Caspase-9表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CPhGs对Bel-7405肝癌细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关,但其具体细胞凋亡机制还需进一步探讨。

芒柄花素对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的研究芒柄花素(Formononetin,Formo)对血小板源性生长因子BB型(PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能的机制。方法组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,结晶紫染色法观察芒柄花素(0.3、1、3、10μM)对PDGF—BB(40ng/ml)所致的VSMC增殖的影响;BrdU摄取法考察芒柄花素对PDGF—BB所致DNA合成率的影响;划痕实验研究芒柄花素对PDGF—BB所致细胞迁移活力的影响;免疫沉淀法检测芒柄花素对PDGFR磷酸化水平的影响。结果芒柄花素在1-10μM浓度范围内呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和DNA合成(p<0.05),芒柄花素在3、10μM浓度下抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移(p<0.05)。芒柄花素抑制PDGF-BB对PDGFR受体磷酸化的激活作用。结论芒柄花素抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移和增殖,其作用机制可能与其抑制平滑肌细胞上PDGFR受体磷酸化有关。