阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响

目的探讨阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响。方法将合并BE的胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)患者的食管鳞状细胞(NES-B细胞)和无合并BE的GERD患者的食管鳞状细胞(NES-G细胞)暴露于酸和胆盐中,分别加入和不加入阿司匹林。采用蛋白质印迹法检测细胞内p65、p-p65、p50、IκB、p-IκB的蛋白表达;染色质免疫沉淀法检测p50和p65与CDX2启动子DNA的结合活性;荧光素酶报告基因检测NF-κB/p65的转录活性;免疫荧光技术检测p65蛋白的核转位情况;qRT-PCR法检测CDX2 mRNA的表达。结果NES-B和NES-G细胞在酸和胆盐暴露后均能激活NF-κB,但与NES-G细胞相比,NES-B细胞表现出更高水平的IκB和p65磷酸化,以及更强的NF-κB转录活性。阿司匹林阻断了酸和胆盐诱导的NES-B细胞中IκB磷酸化、p65核转位、CDX2启动子激活和CDX2表达。结论阿司匹林对酸和胆盐诱导的BE患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达具有抑制作用。

脂多糖通过NF-κb促CDX2表达在Barrett食管形成中的作用

目的探讨脂多糖通过NF-κb诱导食管鳞状上皮细胞CDX2的表达。方法采用免疫组化S-P法检测32例人正常食管组织和20例BE组织中NF-κb和CDX2的表达;体外培养正常食管鳞状上皮Het-1A细胞,采用不同浓度脂多糖(LPS)处理细胞,实时荧光定量PCR与蛋白印迹分析方法测定NF-κb和CDX2表达的变化。结果免疫组化检测发现:在20例BE组织中NF-κb阳性表达15例,阳性率75%,CDX2阳性表达16例,阳性率80%,与人正常食管鳞状上皮组织比较,BE组织中NF-κb、CDX2表达均增高(χ~2=20.734,P <0.05;χ~2=26.475,P <0.05)。Real-time PCR及Western Blot检测结果显示10ng/mL LPS组可轻微刺激食管鳞状上皮细胞NF-κb、CDX2的表达,与对照组无统计学意义。100ng/mL LPS和500ng/mL LPS组可明显增强NF-κb、CDX2的表达,且随浓度增强表达增强,差异有统计学意义(P <0.05)。结论脂多糖可能通过诱导食管鳞状上皮细胞NF-κb表达,上调BE标志性分子CDX2从而参与BE的形成。

CDX2基因通过NF-κB信号通路抑制结肠癌细胞增殖

目的观察过表达CDX2基因对人结肠癌细胞株增殖影响,并初步探讨其作用机制。方法通过基因转染技术将CDX2基因转染入结肠癌HT-29细胞株,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,RT-PCR和Western blot检测CDX2基因表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。Western blot检测CDX2过表达对HT-29细胞内Cyclin D1和NF-κB磷酸化水平的影响。结果经脂质体转染和筛选,建立了稳定过表达CDX2人结肠癌HT-29细胞株。转染CDX2组与未转染组和空白质粒组相比,细胞的生长速度减慢(P <0. 05),细胞周期中G1/G0期比例增加(P <0. 05),而S期比例则减少(P <0. 05);与未转染组和空白质粒组比较,转染CDX2基因组HT-29细胞的Cyclin D1和p-NF-κB活性明显降低。结论 CDX2基因可能通过抑制NF-κB通路抑制Cyclin D1活性,从而抑制人结肠癌HT-29细胞增殖。