犬细小病毒Proofman-LMTIA检测方法

为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术(LMTIA)检测核酸的性能,以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例,采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针,通过优化反应条件,对方法的特异性、灵敏度进行测试,再通过实时荧光定量PCR方法、微滴式数字PCR进行对比验证。结果表明,所建立的Proofman-LMTIA方法在最适反应温度为61℃时,与猫、犬等基因组DNA无交叉反应,灵敏度达到8拷贝/μL,且能够在20 min内完成检测,与实时荧光定量PCR和数字PCR方法结果具有一致性。该方法不仅在恒温条件下即可扩增,且具有快速、灵敏、高效等优点,适用于病毒的现场快速检测。

Proofman-LMTIA方法检测食品中玉米源基因研究

结合Proofman探针与梯型熔解温度等温扩增技术(LMTIA)建立检测食品中玉米源成分的方法.将玉米转录间隔区(ITS)作为靶序列,在Oligo 7软件上查找熔解温度曲线呈梯型结构的序列,并用Primer 3 Plus软件设计引物,进行温度优化,检测特异性和灵敏度.选择56℃反应条件下,建立的Proofman-LMTIA方法体系的特异性最强,最低检测限为10 pg/μL玉米基因组DNA,可检测质量百分比为0.1%的玉米成分的存在.该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优势,适合商业玉米成分快速检测.