生米卡链霉菌变株丙酰化酶基因的克隆和表达

麦迪霉素产生菌生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)变株具有丙酰化酶活性,可以将螺旋霉素转化为丙酰螺旋霉素。为了进行丙酰化酶基因克隆,本实验以质粒pIJ702为载体通过鸟枪克隆法将变株DNA片段克隆至变铅青链霉菌TK54(Streptomyces lividanTK54),经薄层层析和高压液相色谱分析结果表明,在转化子中,No.9菌株可以将螺旋霉素转化为丙酰螺旋霉素,这证明丙酰化酶基因已在变铅青链霉菌TK54中克隆并得到初步表达,No.9重组质粒插入DNA片段为4.16kb,经Soutnern杂交表明确实来源于变株。此外还构建了No.9重组质粒的限制酶酶切图谱。

生技霉素小组分的研究 Ⅱ.生技霉素A_0、B_3和C_2的结构鉴定

生技霉素中除了主要组分 4 " -异戊酰螺旋霉素 、 、 (生技霉素 A1 、B1 、E1 )和小组分 4 " -丁酰/异丁酰螺旋霉素 (生技霉素 A2α/ A2β)以外 ,还含有其它 4 " -酰化螺旋霉素和少量杂质。经过 U V、IR、SI-MS、1 H- NMR、1 3C- NMR、1 H- 1 H COSY等光谱分析 ,并与生技霉素已知组分的光谱数据进行对照 ,确定了生技霉素 A0 为普拉特霉素 A1 ,生技霉素 B3为 4 " -丙酰螺旋霉素 ,生技霉素 C2 为 4 " -丙酰螺旋霉素 ,并对各组分所有碳氢信号的化学位移作出了明确的归属。

丙酰螺旋霉素I的分离与鉴别

用大孔吸附树脂等方法分离丙酰螺旋霉素（ＰｒｏＳＰＭ），除得到以前分离的丙酰螺旋霉素ＩＩＩ（ＰｒｏＳＰＭＩＩ）外，又得到一个新成分。根据其理化性质和波谱［ＵＶ，ＨＲＭＳ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ（含ＤＥＰＴ）和１Ｈ１３ＣＣＯＳＹ］数据，并与ＰｒｏＳＰＭＩＩ比较，ＰｒｏＳＰＭＩＩ仅Ｃ３酰基不同，命名为丙酰螺旋霉素ＩＩ（ＰｒｏＳＰＭＩＩ）。

用麦迪霉素产生菌变株的固定化细胞研究螺旋霉素的丙酸化

用海藻酸钙包埋麦迪霉素产生菌的一株无活性变株var.T100,经培养后得到固定化var.T100细胞,成功地使螺旋霉素转化为C_4~″-O-单丙酰螺旋霉素,转化率可达30％以上,且连续发酵批次可达6次。发酵周期比游离菌丝缩短一半。 固定化var.T100细胞适宜转化条件:菌丝浓度为0.05％的固定化细胞经36小时培养增殖,在pH5左右的培养基中转化;固化细胞浓度为60ml/100ml培养基:螺旋霉素浓度为200γ/ml :最适温度为28℃,但在28℃～37℃的范围内影响不大。