黑色素瘤细胞外泌体通过Prospero同源异形盒蛋白1调控肿瘤淋巴转移机制的研究

目的探讨黑色素瘤外泌体(melanoma exosomes,MM-ex)携带的果蝇Prospero同源异形盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1),在调控淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法采用慢病毒转染实验构建低表达Prox-1黑色素瘤细胞株(MM^(shProx-1))。采用试剂盒法获取MM和MM-ex^(shProx-1)的外泌体(MM-ex和MM-ex^(shProx-1))。采用免疫荧光检测、蛋白质印迹法检测、细胞增殖及细胞迁移实验,观察MM-ex及MMex^(shProx-1)对LECs生物学特性的影响。采用免疫组化(IHC)法检测2015年9月至2021年4月江苏大学附属医院收治的32例皮肤黑色素瘤病理标本中Prox-1及淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor-1,LYVE-1)的表达情况,统计微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),并分析Prox-1及MLVD与黑色素瘤生物学特性的相关性。结果细胞实验:MM-ex促进淋巴管内皮细胞增殖及迁移,促进了淋巴管的成形。MM-ex^(shProx-1)对LECs无增殖及迁移的影响,对淋巴管成形无促进作用。临床研究:免疫组化的结果表明Prox-1、LYVE-1在黑色素瘤组织及肿瘤周围组织中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织。Prox-1信号在黑色素瘤淋巴结转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达率[87.50%(14/16)、79.17%(19/24)]明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组[37.50%(6/16)、12.50%(1/8)](均P<0.05)。LYVE-1在黑色素瘤转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达(9.30±4.65、5.15±1.72)明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组(5.66±1.69、5.30±1.65,均P<0.05)。Prox-1、LYVE-1的表达情况均与病人的年龄、性别无关(均P>0.05)。结论MM-ex通过Prox-1促进LECs的增殖及迁移,在肿瘤淋巴管再生中起到重要作用。Prox-1、LYVE-1及MLVD与黑色素瘤淋巴转移及预后呈明显相关性,为皮肤黑色素瘤的早期淋巴转移及预后提供一个新的判断指标,也为皮肤黑色素瘤的临床治疗提供新的方法和策略。

Prospero相关同源异形盒蛋白1在乳腺癌组织中的表达及与预后相关性分析

背景与目的:Prospero相关同源异形盒蛋白1(prospero-related homeobox 1,PROX1)作为同源域转录因子家族成员,参与多种恶性肿瘤的发生、发展过程,与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、迁移和侵袭过程密切相关。该研究探讨了PROX1在乳腺癌组织中的表达及与预后相关性分析。方法:选取2011年3月-2013年3月在郑州市第三人民医院择期行手术治疗且资料完整的乳腺癌患者85例,采用免疫组织化学染色法检测乳腺癌和癌旁组织中PROX1蛋白水平,所有患者术后随访。随访中,失访4例,随访截止日期为2018年3月31日,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验,乳腺癌患者预后影响因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果:乳腺癌组织中PROX1蛋白阳性率为71.76%,癌旁组织则为28.57%,差异有统计学意义(χ^2=32.600,P<0.001);乳腺癌组织中PROX1蛋白水平在不同分化程度、TNM分期、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、Ki-67标记指数和淋巴结转移患者之间的差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,PROX1阳性表达组平均生存时间为(36.73±2.73)个月,PROX1阴性表达组则为(56.36±2.13)个月,Log-rank检验结果差异有统计学意义(χ^2=11.803,P=0.001);Cox比例风险回归模型结果显示,分化程度、TNM分期、淋巴结转移和PROX1蛋白表达是影响乳腺癌患者预后的风险因素(P<0.05)。结论:PROX1蛋白在乳腺癌组织中呈高表达,且与乳腺癌发生、进展及预后密切相关,是影响患者预后的风险因素。

Prospero相关同源异形盒蛋白1在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨Prospero相关同源异形盒蛋白1(PROX1)在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法:用免疫组化染色法检测81例宫颈癌组织及其配对的癌旁组织中PROX1的表达水平。根据免疫组化染色结果将患者分为高表达组和低表达组,比较两组临床病理特征及生存预后。结果:癌组织中PROX1表达率为69.14%(56/81),明显高于癌旁组织表达率11.11%(9/81),差异有统计学意义(P<0.001)。高表达组组织低分化、深浸润和淋巴结转移率均高于低表达组(均P<0.05)。肿瘤低分化、浸润较深、淋巴结转移、未辅助化疗、PROX1高表达是宫颈癌患者不良生存预后的独立影响因素(均P<0.05)。高表达组5年生存率为40.74%,明显低于低表达组的71.73%(P<0.05)。结论:PROX1与宫颈癌的发生及发展有关,并且对生存预后的评估有一定价值。

Prospero相关同源异形盒蛋白1在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的:Prospero相关同源异形盒蛋白1(prospero-related homeobox 1,PROX1)是一种高度保守的转录调节因子,参与多种肿瘤的发生、发展。探讨PROX1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法:免疫组织化学法检测2011年1月—2013年6月在淄博市第一医院手术切除的86例NSCLC癌组织及其配对的癌旁组织中PROX1的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测人NSCLC细胞系A549、H460、H1229、H358和人支气管上皮细胞Beas-2b中PROX1的表达。采用克隆形成实验、细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验、transwell侵袭和迁移实验检测敲降PROX1对A549细胞生物学功能的影响。生存分析用Kaplan-Meier法,NSCLC患者生存预后的影响因素用COX比例风险回归模型。结果:癌组织中PROX1阴性、弱阳性、中等阳性、强阳性分别6例、25例、20例、35例;癌旁组织中分别48例、27例、8例、3例,癌组织中PROX1阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。与Beas-2b相比,A549、H460、H1229和H358细胞系中PROX1蛋白水平明显较高(P均<0.05)。PROX1高表达组淋巴结转移率和TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的占比明显高于低表达组(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移和PROX1高表达是NSCLC患者不良生存预后的独立影响因素(P<0.05)。PROX1高表达组生存时间明显短于低表达组(P<0.05)。敲降PROX1后A549细胞PROX1蛋白表达水平、克隆数目、培养第72和96 h时细胞增殖的吸光度(D)值、侵袭和迁移细胞数量明显降低(P<0.05)。结论:PROX1在NSCLC发生、发展中可能起到重要作用,敲降PROX1基因可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,PROX1高表达可能预示患者不良生存预后。

非小细胞肺癌患者癌组织和血清中SKA3、G3BP2、PROX1表达与临床治疗的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者癌组织和血清中癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3结合蛋白(G3BP)2和Prospero相关同源异形盒蛋白(PROX)1的表达与术后治疗的临床关系。方法选择内蒙古民族大学附属医院微创手术的非小细胞肺癌患者102例为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测非小细胞肺癌患者手术前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1蛋白含量;采用免疫组织化学染色法检测非小细胞肺癌患者癌组织、癌旁组织中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白阳性表达强度,分析癌组织中各指标与肿瘤临床病理特征的关系。结果与术前比较,术后非小细胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量均明显降低(P<0.05);非小细胞肺癌患者癌组织中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白阳性表达强度明显高于癌旁组织(P<0.05);不同组织学分型的非小细胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1的表达差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分型、临床分期、有无淋巴结转移的非小细胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1与患者临床病理特征密切相关,提示其可能成为非小细胞肺癌治疗的靶点及预测预后和复发的指标。

乳腺癌患者组织中PROX1的表达水平及与预后的相关性分析

目的 分析乳腺癌患者组织中Prospero相关同源异形盒蛋白1(PROX1)的表达水平及其与预后的相关性.方法 回顾性分析中国医科大学附属盛京医院大连医院2016年1月-2018年12月收治的70例乳腺癌患者的临床资料,采用免疫组化染色法检测乳腺癌及癌旁组织中的PROX1表达水平,随访1年,评估两组患者预后,分析PROX1表达水平与预后的相关性.结果 随访结果 显示,70例乳腺癌患者中,有40例未复发,有26例复发,有4例死亡;PROX1高表达患者中,中分化和高分化患者占比较高,TNM分期Ⅲ期患者占比较高,预后较差患者占比较高,差异有统计学意义(P<0.05);预后良好组的PROX1阳性率及平均灰度值均低于预后较差组,差异有统计学意义(P<0.05);经线性回归分析发现PROX1表达水平与预后的线性回归方程:Y=0.783+0.483X,结果 显示,PROX1表达水平可影响预后(P<0.05).结论 乳腺癌组织中PROX1水平呈高表达,PROX1阳性率及平均灰度值与乳腺癌患者预后密切相关,可通过检测上述指标,制定针对性治疗方案,评估患者预后.

子宫内膜癌组织PROX1、FABP6表达及与临床病理特征的相关性研究

目的探究子宫内膜癌(EC)组织Prospero相关同源异形盒蛋白1(PROX1)、脂肪酸结合蛋白6(FABP6表达及与临床病理特征的相关性。方法以2018年2月至2020年2月在云南省第一人民医院诊治的96例EC患者为EC组,收集根治性手术切除的癌组织。同时期收集手术过程中获取的正常子宫内膜组织96例;比较癌组织及正常子宫内膜组织中PROX1和FABP6表达;分析PROX1、FABP6与临床病理的相关性及影响EC患者预后的危险因素。结果相较于正常组织,EC癌组织中PROX1、FABP6表达水平显著升高(P<0.05);肌层浸润深度≥1/2、肿瘤直径≥2 cm、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、病理分级G2~G3、有淋巴结转移EC患者癌组织中PROX1、FABP6阳性表达比例高于肌层浸润深度<1/2、肿瘤直径<2 cm、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、病理分级G1、无淋巴结转移患者(P<0.05);PROX1与FABP6阳性表达患者总生存率均显著低于阴性表达患者总生存率(P<0.05);FIGO分期(Ⅲ~Ⅳ)、有淋巴结转移、PROX1和FABP6阳性表达均是影响EC患者预后的危险因素。结论EC患者癌组织中PROX1、FABP6表达水平显著升高,两者与临床病理特征及患者预后密切相关。

沉默PROX1基因对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的影响

目的探讨沉默prospero相关同源异形盒蛋白1(PROX1)基因对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法将TPC-1细胞分别转染NC-siRNA(NC-siRNA组)和PROX1-siRNA(PROX1-siRNA组)。Western blot检测PTC细胞系BCPAP、TPC-1、K1、IHH4和正常甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-ori-3-1中PROX1蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测Notch1信号通路相关蛋白(hes1、hes5、NICD)表达水平。结果与正常甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-ori-3-1比较,PTC细胞系TPC-1、BCPAP、K1和IHH4中PROX1蛋白表达水平明显较高(P<0.05),其中TPC-1最高。与NC-siRNA组比较,PROX1-siRNA组PROX1蛋白表达水平及细胞增殖、侵袭、迁移能力较低,细胞凋亡率较高(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,PROX1-siRNA组hes1、hes5和NICD蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论沉默PROX1可通过抑制Notch1信号通路进而抑制TPC-1细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡。

基质细胞衍生因子-1α和白细胞介素-1β诱导淋巴管内皮表型的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)及白细胞介素-1β(IL-1β)诱导内皮细胞表达淋巴管表型的作用。方法 SDF-1α和IL-1β分别诱导内皮细胞株CRL-1730,用Real-time PCR、Western blotting及免疫细胞化学等方法检测其内皮及淋巴管标志物,的表达情况。结果 SDF-1α诱导培养之后,CRL-1730细胞株的内皮细胞标志物血管性血友病因子(vWF)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)2随其浓度增高而表达降低,淋巴管标志物平足蛋白(podoplanin)、同源异形盒蛋白-1(Prox-1)和淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)随其浓度增高而表达增高。IL-1β诱导之后,CRL-1730细胞株的vWF、VEGFR2和podoplanin、prox-1、LYVE-1的变化趋势同SDF-1α,而VE-cadherin的表达量基本不变。结论 SDF-1α和IL-1β都能够诱导血管内皮细胞表达淋巴管标志物。

PROX1对早期非小细胞肺癌微创切除术后复发的预测意义

目的分析Prospero相关同源异形盒蛋白1(PROX1)对早期非小细胞肺癌(NSCLC)微创切除术后复发的预测意义。方法选择2019年12月至2021年12月我院收治的54例拟接受微创切除术的NSCLC患者,采用免疫组织化学染色法检测患者NSCLC癌组织和对应癌旁组织中PROX1表达情况。统计NSCLC复发情况,比较复发者与未复发者临床资料,采用Logistic多因素回归分析影响NSCLC患者术后复发的因素,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析NSCLC癌组织中PROX1表达水平预测术后复发。结果癌组织中PROX1表达水平比癌旁组织高(P<0.05),癌组织中PROX1高表达例数比癌旁组织高(P<0.05);13例患者复发(24.07%)。复发患者淋巴结转移、PROX1高表达、TNM分期为Ⅱ期例数比未复发患者高(P<0.05);Logistic多因素回归分析显示PROX1高表达、淋巴结转移、TNM分期为Ⅱ期是NSCLC术后复发危险因素(P<0.05);ROC分析显示,癌组织中PROX1表达水平预测NSCLC术后复发的最佳截点为8.36,灵敏度为84.78%,特异度为89.13%。结论NSCLC癌组织PROX1高表达,PROX1蛋白表达是NSCLC术后复发的危险因素,为预测NSCLC术后复发的指标。