Par4在去势大鼠腹叶前列腺中的表达

为探讨 Par4在去势大鼠腹叶前列腺中表达的规律及其与前列腺凋亡的相关性 ,将 90只大鼠随机分为 9组 ,分别于去势后 0、 1、 2、 3、 5、 7、 10、 14、 2 1d处死 ,取前列腺石蜡包埋切片后行免疫组化检测 Par4和增殖抗原(PCNA ) ,末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记术 (TUNEL )测定前列腺凋亡 ,并作连续切片 ,行计算机图像重建技术比较 Par4与凋亡及 PCNA表达的关系。结果表明 :正常大鼠前列腺 Par4表达较少 ,去势后则显著增加 ,与凋亡的变化及分布规律相似 ,其表达的阳性率与凋亡阳性率呈正相关 (r=0 .76 0 5 ,P<0 .0 1)。 Par4的表达和 PCNA无明显相关 (r=- 0 .4894,P>0 .0 5 )。 Par4在去势大鼠腹叶前列腺表达增高 ,与凋亡呈正相关 ,提示有促凋亡的作用。

慢性应激诱导的抑郁大鼠纹状体par-4基因的表达

为研究慢性温和应激诱导的抑郁大鼠纹状体内前列腺凋亡反应蛋白(prostate apoptosis response-4,par-4)的表达,及甲基化是否参与par-4基因表达的调控,将10周龄大鼠随机分为实验组和对照组,实验组接受慢性温和应激,对照组不接受实验性处理。于大鼠13周龄时,采用强迫游泳、糖水偏爱测验测定大鼠的抑郁水平,以实时定量PCR检测纹状体par-4及多巴胺D2受体(Dopamine receptor D2,DRD2)mRNA表达水平,免疫印迹法检测纹状体par-4蛋白质表达水平,用亚硫酸盐测序法检测par-4基因启动子区甲基化水平。结果发现,与对照组大鼠相比,实验组大鼠漂浮时间延长,糖水偏爱率降低,脑纹状体par-4、DRD2mRNA及par-4蛋白质表达水平均降低,par-4基因启动子区甲基化水平两组差异不显著。提示慢性温和应激诱导大鼠产生了抑郁样行为,并能抑制纹状体par-4基因的表达,而基因甲基化可能并不参与其调控机制。

新生儿缺氧缺血性脑病外周血淋巴细胞中前列腺凋亡反应基因4mRNA检测的临床意义

目的探讨测定新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)外周血淋巴细胞中前列腺凋亡反应基因4(Par4)mRNA表达量的临床意义。方法HIE患儿37例为实验组(轻度14例,中度15例,重度8例),正常新生儿8例为对照组。两组在生后24h抽取外周静脉血1mL,采用Rt PCR法测定淋巴细胞中Par4mRNA表达量。结果轻、中、重度HIE患儿外周淋巴细胞中Par4mRNA表达量均较对照组显著上调(P均<0.01)。重度HIE患儿Par4mRNA表达量最高(F=64.6P<0.01)。结论测定外周血淋巴细胞中Par4mRNA表达量,对HIE的早期诊断和疾病严重程度的判断有一定临床价值。

H_2O_2对PC12细胞par-4和NF-κBP65基因表达的影响

目的 探讨 H2 O2 对 PC12细胞前列腺细胞应答凋亡蛋白 - 4 ( prostate apoptosis response- 4 ,par- 4 )和核转录因子 - κBP6 5 ( NF- κBP6 5 )基因表达的影响。方法 用不同终浓度 H2 O2 ( 0～ 4 0 0 nm ol/ L)处理 PC12细胞 8h,或终浓度 2 0 0 nm ol/ L H2 O2 处理 PC12细胞不同时间 ( 0～ 8h) ,采用 RT- PCR检测 par- 4、NF- κBP6 5 m RNA表达变化 ,Western blot检测 Par- 4和 NF-κBP6 5蛋白表达的变化。结果 随 H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0 nmol/ L增加 ,par- 4、NF-κBP6 5 m RNA表达和 Par- 4、NF-κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;2 0 0 nm ol/ L H2 O2 作用 PC12细胞 0～ 8h,par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ,在 2～ 8h随时间延长表达增加 ;在 0～ 8h NF- κB P6 5 m RNA表达和 NF- κBP6 5蛋白表达无明显变化。结论 H2 O2 可时间、剂量依赖性的增加 par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6 5蛋白表达 ;NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6

β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞前列腺凋亡反应蛋白-4和bcl-2基因表达的影响

目的观察β-淀粉样肽(25—35)(β-amyloidpeptide25—35,Ap25-35)诱导PC12细胞凋亡及对前列腺凋亡反应蛋白-4(prostateapoptosisresponse-4,par-4)和bel-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达变化,Westernblot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达变化。结果随Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率降低,荧光染色可见细胞核固缩、核碎裂,par-4mRNA及蛋白表达增加,bcl-2mRNA及蛋白表达降低。结论在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中Par-4和Bcl-2蛋白分子可能起重要作用。

新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达

目的:观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后,不同脑组织中的表达。方法:制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变,利用Westernblot检测在缺氧缺血24h后,海马组织大脑额叶皮质和小脑中Par-4蛋白表达量的改变。结果:①海马组织和大脑额叶皮质中的Par-4mRNA在脑缺氧缺血后2h已明显升高,至6h已达高峰。而小脑未见表达;②在新生大鼠脑缺氧缺血24h后,海马组织及大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量显著升高,并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量。而小脑未见其蛋白表达。结论:缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同,Par-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程。

过表达前列腺凋亡反应因子-4对NIT-1细胞的影响

目的:构建携带前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,PAR-4)基因PRKC apoptosis WT1 regulator(pawr)表达的重组腺病毒载体,研究PAR-4对胰岛β细胞株NIT-1的影响。方法:利用Oligo Designer3.0设计Pawr模版引物,通过RT-PCR扩增出pawr基因片段,使用双酶切克隆至腺病毒载体ADV1,构建重组载体质粒p Ad Track-pawr-CMV。线性化p Ad Track-pawr-CMV和p Ad-Easy-1共同转化到感受态大肠杆菌构建重组腺病毒载体质粒p Ad Track-pawr。将NIT-1细胞分为4组:低糖组、高糖对照组、低糖+PAR-4过表达组以及高糖+PAR-4过表达组,Western blot检测各组PAR-4蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测经葡萄糖刺激后的各组细胞胰岛素分泌功能。结果:克隆的pawr基因片段测序正确。高纯度质粒中量抽提试剂盒抽提重组腺病毒载体质粒成功,单酶切鉴定,质粒转染HEK293细胞后有GFP表达,扩增48 h后出现细胞病变效应,病毒滴度测定为1×109 pfu/ml,低糖和高糖过表达PAR-4后均较相应对照组PAR-4表达明显升高,高糖培养+过表达PAR-4组细胞增殖能力均较低糖(P=0.000)和高糖对照组细胞(P=0.000)明显下降,较低糖(P=0.003)和高糖对照组细胞(P=0.001)胰岛素分泌明显下降。结论:成功构建高滴度pawr基因表达的重组腺病毒载体并转染NIT-1细胞,转染PAR-4后高糖培养的NIT-1细胞增殖能力和胰岛素分泌功能明显下降。

前列腺凋亡应答蛋白4促凋亡和肿瘤特异性抑制作用的研究进展

前列腺凋亡应答蛋白4(Par-4)作为促凋亡因子,最先在雄性激素不依赖型前列腺癌细胞(AT-3)中发现。内源性Par-4使癌细胞对凋亡刺激更敏感化,但是外源性Par-4可选择性地直接导致癌细胞凋亡,并通过基因突变实验发现该活性依赖于它的核心结构域SAC。Par-4和SAC可特异性地导致癌细胞凋亡,因此是潜在的癌症靶点治疗药物。本文综述了Par-4的发现、结构、功能及其在细胞内信号通路,最后讨论了Par-4和SAC在癌症临床治疗中的应用前景以及在基础研究和临床应用中存在的问题。

Par-4特异诱导肿瘤凋亡及其机制的研究新进展

前列腺凋亡反应基因-4(prostate apoptosis response gene-4,par-4)基因是最早在前列腺癌细胞中发现,这个基因在正常细胞和肿瘤细胞中均可表达,其编码产物前列腺凋亡蛋白-(prostate apoptosis response protein,Par-4)可通过内源性和外源性途径选择性的诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有影响。Par-4发挥作用可包括内源性Par-4裂解和磷酸化、内源性Par-4转运Fas/Fas L并激活Fas/Fas L促凋亡通路、及外源性的Par-4和细胞膜上的GPR78结合诱导细胞凋亡等过程。特别是Par-4的外源性途径在肿瘤的靶向治疗中有很重要的应用价值。本文就Par-4诱导凋亡机制及外源性Par-4在肿瘤治疗方面的最新研究进展进行综述。

肾母细胞瘤中Par-4的表达及过表达Par-4对肿瘤细胞的杀伤效应

目的:研究肾母细胞瘤中Par-4的表达及过表达Par-4对肿瘤细胞的杀伤效应。方法:收集肾母细胞瘤组织及肿瘤旁正常组织,测定Par-4的表达量;培养SK-NEP-细胞,转染Par-4质粒后,测定Par-4的表达量、细胞生长情况以及凋亡相关基因的表达量。结果:肾母细胞瘤组织中Par-4的表达量显著低于肿瘤旁正常组织,不同组织分型肿瘤组织中Par-4的表达量无差异,TNM III-IV期、有淋巴结转移肿瘤组织中Par-4的表达量显著低于TNM I-II期、无淋巴结转移的肿瘤组织;转染不同浓度的Par-4质粒后,细胞的生长受到显著抑制,100μg/mL质粒的抑制效应最为显著;转染100μg/mL的Par-4质粒,NF-kB的表达量低于阴性对照组,FasL、Fas、Caspase-3、Caspase-8的表达量高于阴性对照组。结论:肾母细胞瘤中Par-4的表达量显著降低,过表达Par-4能够抑制肿瘤细胞的生长、具有杀伤效应。

Par-4基因过表达调节肾母细胞瘤顺铂敏感性的实验研究

目的:研究Par-4基因过表达对肾母细胞瘤顺铂敏感性的调节作用。方法:培养肾母细胞瘤SKNEP-1细胞并分为四组,对照组用不含血清及药物的RMPI-1640处理,顺铂组用含有5μg/mL顺铂的无血清RMPI-1640处理,Par-4组用无血清RMPI-1640转染Par-4过表达质粒,顺铂+Par-4组用含有5μg/mL顺铂的无血清RMPI-1640转染Par-4过表达质粒。处理后测定细胞的增殖活力及促凋亡基因、迁移及侵袭基因的表达量。结果:不同条件处理后8h、16h、24h,顺铂组、Par-4组、顺铂+Par-4组的细胞增殖活力值均显著低于对照组,顺铂+Par-4组的细胞增殖活力值显著低于顺铂组、Par-4组;不同条件处理后24h,顺铂组、Par-4组、顺铂+Par-4组细胞中Bim、PDCD4、WT1、RGS4、Axin、KAI1、E-cadherin、PPARγ、PTEN的mRNA表达量均显著高于对照组,GDNF、GFRα1、TUBB3、NME1、FGF1的mRNA表达量均显著低于对照组;顺铂+Par-4组细胞中Bim、PDCD4、WT1、RGS4、Axin、KAI1、E-cadherin、PPARγ、PTEN的mRNA表达量显著高于顺铂组、Par-4组,GDNF、GFRα1、TUBB3、NME1、FGF1的mRNA表达量显著低于顺铂组、Par-4组。结论:Par-4基因过表达能够增加肾母细胞瘤对顺铂的敏感性,降低细胞增殖活力并促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭。

活性小分子提高Par-4水平的研究进展

新兴的化疗药使肿瘤治疗从传统的细胞毒性药物治疗时代跨越到精准分子靶向治疗时代。在众多促凋亡抑癌基因中,前列腺凋亡反应基因-4编码的前列腺凋亡反应蛋白-4(Par-4)与肿瘤细胞表面过表达受体——葡萄糖调节蛋白78结合,通过胞内线粒体凋亡途径、死亡受体凋亡途径和胞外旁分泌通路共同诱导肿瘤细胞凋亡而不进攻正常细胞,在体外和体内显示出良好的抗肿瘤活性,无明显的细胞和全身毒性。来源于植物和微生物衍生物以及人工合成的活性小分子可调节Par-4水平,这些活性小分子通过结合细胞内的波形蛋白,将Par-4从波形蛋白中置换出来,从而发挥抗肿瘤活性。但目前关于这类活性小分子的报道较少,未来应进行深入研究。

阿魏酸钠对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡保护作用的研究

目的探讨阿魏酸钠(sodium femlate,SF)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)引起的PC12细胞凋亡保护作用的可能机制。方法在H_2O_2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析检测细胞存活率,RT-PCR检测前列腺凋亡响应基因Par-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)和核转录因子-κB p65(nuclear factor-kappaB,NF-KB)mRNA表达,Westem blot检测Par-4和NF-κBp65蛋白表达。结果不同剂量SF预处理1h可提高PC12细胞的存活率,降低Par-4和NF-κBp65的mRNA表达以及蛋白表达。结论SF可剂量依赖性地对抗H_2O_2的神经素毒性作用,其机制可能与凋亡基因Par-4表达有关,与NF-κB的关系尚需进一步探讨。

鼻咽癌放疗过程中前列腺凋亡反应因子的表达及意义

目的探讨前列腺凋亡反应因子(Par-4)对鼻咽癌放疗敏感性的意义。方法对40例初治、无远处转移的鼻咽癌患者分别于放疗前、放疗中(40Gy)、放疗后(70Gy)取活检标本,并将10例慢性鼻咽炎患者作为对照,用SP法检测各组前列腺凋亡反应因子蛋白的表达水平,并用SPSS13.0分析数据。结果鼻咽癌组织中前列腺凋亡反应因子蛋白的表达与放疗时间剂量成正相关(r=0.46,P<0.05),与患者年龄、性别无关。结论前列腺凋亡反应因子可作为预测鼻咽癌临床放射敏感性的指标。

Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中ERK_(1/2)的下调作用及其抗凋亡作用

目的研究par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中ERK1/2活性的下调作用及其抗凋亡作用。方法利用脂质体将par4反义寡核苷酸转染入PC12细胞。谷氨酸诱导PC12细胞凋亡。利用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率。Western印迹测定par4的蛋白质表达量和磷酸化的ERK1/2的蛋白表达量。结果(1)谷氨酸诱导PC12细胞中par-4蛋白表达上调,Par4反义寡核苷酸呈剂量依赖性地拮抗其上调(组间比较,P<0.01)。(2)谷氨酸诱导PC12细胞中磷酸化(Thr202/Tyr204)的ERK1/2蛋白水平下调,par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(组间比较,P<0.01)。(3)Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,如予ERK1/2阻断PD98059预处理,则其拮抗作用被下调(组间比较,P<0.05)。结论Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与ERK的活化有关。

胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中Par-4基因表达的影响及其相关信号转导机制

目的研究胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par4表达的影响及其相关信号转导机制。方法制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型,侧脑室给予胶质细胞源性神经营养因子(0.1、1.0、5.0μg/μl)。Westernblot测定Par4蛋白表达水平。结果新生大鼠窒息后纹状体中Par4蛋白表达上调、(P<0.01)。胶质细胞源性神经营养因子呈剂量依赖性地抑制缺氧缺血诱导的Par4蛋白表达上调(P<0.01)。给予200μmol L的P42/P44MAPK活性阻断剂PD98059预处理,胶质细胞源性神经营养因子对Par4表达的抑制作用由43%下调至22%(P<0.01)。结论胶质细胞源性神经营养因子抑制新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par4的表达,其机制可能与P42/P44MAPK的活化有关。

鱼藤酮致PC12细胞凋亡中Par-4蛋白的表达

目的探讨鱼藤酮致大鼠多巴胺能嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡中前列腺凋亡反应蛋白(Par-4)表达变化,为帕金森病(PD)的基因治疗提供新的靶点。方法以1、5、10μmol/L的鱼藤酮分别作用于PC12细胞6、24 h,采用MTT比色法检测细胞存活率;采用Western blot法筛选出Par-4表达改变明显的鱼藤酮浓度和作用时间,给予信号转导抑制剂,检测Par-4表达量的变化。结果1、5、10μmol/L鱼藤酮干预后,PC12细胞出现不同程度的受毒形态改变,6 h后,10μmol/L组光密度比值显著升高(P=0.029 646);20μmol/L c-jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制剂Ginestin预处理1 h,光密度比值与单纯鱼藤酮作用组比较显著降低(P=0.013 1);24 h后,PC12细胞的存活率降低显著,1、5μmol/L 2组光密度比值均升高,与对照组差异有统计学意义(P=0.018 461,P=0.043 415)。结论鱼藤酮可诱导PC12细胞Par-4凋亡蛋白表达升高,具有时间和浓度依赖性,JNK通路参与其信号转导途径。

靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义

目的研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义。方法利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs。采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平。采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡。采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率。Westernblot检测hBMSCsCD2AP蛋白表达量。应用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCsPar-4-mRNA水平,抑制率为88%(P<0.01)。而非抑制的对照序列未见抑制作用(P>0.05)。2.流式细胞术检测结果显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P<0.01)。而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P<0.01)。3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P<0.01)。结论靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调。

前列腺凋亡反应蛋白-4抗肿瘤作用研究进展

前列腺凋亡反应基因-4(prostate apoptosis response gene-4,par-4)是从凋亡的前列腺癌细胞中分离出来的一种基因,该基因编码的产物是前列腺凋亡反应蛋白4(Par-4)。Par-4可通过细胞内、外途径调节各种分子表达,诱导癌细胞凋亡,选择性抑制肿瘤细胞生长,因此,Par-4的表达与肿瘤的发生、发展及预后有密切的联系。Par-4在治疗恶性肿瘤中表现出良好的肿瘤细胞靶向杀伤效应,对正常组织细胞无明显影响,故具有极其重要的应用价值。就Par-4特异性诱导肿瘤细胞凋亡及其潜在抗肿瘤作用的进展进行综述。

Par-4反义寡核苷酸对谷氨酸诱导PC12细胞STAT_3活性下调的抑制作用

目的:研究Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中信号转导子和激活子3(STAT3)活性的下调作用及其抗凋亡意义。方法:脂质体将Par-4反义寡核苷酸转染PC12细胞。谷氨酸诱导PC12细胞凋亡。吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态。流式细胞分析评价凋亡百分率。Western blot测定Par-4的蛋白表达量,凝胶迁移改变实验测定STAT3的DNA结合力。结果:谷氨酸诱导PC12细胞中蛋白表达上调,Par-4反义寡核苷酸呈剂量依赖性地拮抗其上调(P<0.01)。谷氨酸诱导PC12细胞中STAT3的DNA结合力下调,Par-4反义寡核苷酸拮抗其下调(P<0.01)。Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。如予Jak/STAT3信号通路阻断剂AG-490预处理,则其拮抗作用被下调。结论:Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与STAT3活化有关。