体外法研究不同油脂对瘤胃原虫吞噬细菌微循环的影响

【目的】研究体外培养条件下,不同油脂对瘤胃原虫吞噬细菌微循环及微生物群体的影响。【方法】3头瘤胃瘘管山羊提供瘤胃液,分别以菜籽油(A)、豆油(B)、玉米油(C)和花生油(D)为底物培养瘤胃微生物,同时设空白对照组,培养10h时用荧光标记瘤胃细菌法进行原虫吞噬细菌试验。【结果】原虫密度以对照组最高,显著高于A、B、C组(P<0.05);细菌密度以B组最高,为4.906×109cells·mL-1,显著高于对照组(P<0.05);原虫蛋白在组间差异不显著(P>0.05),细菌蛋白组以B组最高,B、C、D均高于对照组(P<0.05)。各组原虫的吞噬速率分别为:267.6(对照组)、196.2(A组)、244.4(B组)、274.4(C组)、285.4(D组)cells/(cell·h),组间差异显著(P<0.05)。吞噬细菌N的速率分别为1.445、1.059、0.320、1.482、1.541pgN·(cell·h)-1。【结论】估算每天每头山羊细菌蛋白循环量分别为121.64(对照组)、56.64(A组)、78.39(B组)、87.04(C组)和95.06(D组)mg蛋白·(d·头)-1,B组较低,仅为对照组的64.45%,且该组微生物量最大。在本试验的基础上认为4%的豆油对微循环的调控效应最好。

植物钙调素的免疫金标记电镜技术

本文用玉米根尖作为实验材料,建立了植物钙调素免疫胶体全电镜定位技术。采用Epon812常规包埋方法;以脱脂奶粉作为封闭试剂;用过碘酸钠处理切片,使之恢复抗原性。所用的兔抗小麦钙调素抗体对植物钙调素具有较高的亲和力和专一性。本方法具有操作方便。标记特异性较强,超微结构保存较好等特点。

氚离子束标记新技术

本文介绍一种先进的氚离子束标记技术,用于蛋白质、肽和非挥发性有机化合物的氚标记。在该技术中,加速受激发的氚离子束,去轰击固体样品,发生氢-氚交换反应。氚化大豆胰蛋白酶抑制剂、核糖核酸酶A、弹性蛋白和茯苓聚糖等十一种化合物已用此法输备。氚化粗产物经透析、离子交换色层和凝胶过滤等方法纯化后,蛋白质和聚糖的比活性一般可达37GBq/mmol以上,没有放射性副产物和具有与天然物质相同的生物活性。氚化蛋白质的氨基酸分析表明,在蛋白质中,His、Tyr和Phe残基具有较高的比活性而Val、Ile和Ser残基的比活性较低。

离子束氚标记装置及其初步实验

研制了一台采用氚离子束标记技术的新型装置。装置由真空室、离子源、靶座、排气系统和充气系统筹组成。可移动多位冷冻靶座是水装置的独特的部件,它使被标记样品的生物活性保持良好,并大大缩短了进行标记的时间。使用水装置对亮氨酸脑啡肽样品进行标记取得了良好的效果。

拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

【目的】优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础。【方法】采用PEG-Ca Cl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(Hm B)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果。【结果】gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/m L;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中Hm B含量为600μg/m L时可获得稳定的强转化子。【结论】筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性。

化学发光技术在不同硒化合物毒理研究中的应用

本文采用化学发光技术,测定了不同浓度不同硒化合物对淋巴细胞ATP含量及GSH—PX活性的影响,并对~3H、^(14)C、^(125)I三标记参入DNA、RNA、蛋白质分析法的硒毒理研究结果作了简要的对此分析。结果表明,三种受试硒化合物在受试浓度范围内(10^(-8)～10^(-4)M),均使ATP含量有不同程度降低,使GSH—PX活性有不同程度升高,对DNA、RNA、蛋白质的参入呈现明显的双相性影响。

汉坦病毒体外感染乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞

目的证实乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞是汉坦病毒属（HV）汉滩病毒（HTNv）和汉城病毒（SEOV）感染的靶细胞，观察病毒感染星形胶质细胞后的动态变化。方法建立乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外培养体系，用HTNV76-118和SEOVL99分别感染乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞，免疫荧光染色、Western印迹和RT-PCR检测病毒感染细胞后病毒NP和S基因片段的变化。结果成功建立了乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外培养体系，并通过免疫荧光染色、Western印迹和RT-PCR证实HTNV76—118和SEOVL99可以感染离体培养的乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞，随感染时间推移，病毒感染细胞数和病毒量显著增加。结论乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞可作为HTNV和SEOV感染的靶细胞，这为研究。肾综合征出血热发病机制提供了实验平台。