免疫印迹法检测ENA及其在自身免疫性疾病中的诊断价值分析

目的探讨免疫印迹法(IBT)检测ENA抗体在自身免疫性疾病中的诊断价值。方法应用IBT和免疫斑点技术对临床常见的自身免疫性疾病(143例)和31例健康者做对照组进行了抗ENA抗体检查,同时观察了IBT和免疫斑点技术与间接免疫荧光法检查抗核抗体(IFANA)结果的相关性。结果 143例送检标本IBT法检测ENA多肽抗体谱总阳性率为80.4%,且检出一种或一种以上抗ENA抗体,系统性红斑狼疮27例(88.89%),皮肤炎和多发性肌炎16例(62.50%),干燥综合征28例(92.86%),混合性结缔组织病12例(91.67%),类风湿关节炎60例(66.68%);斑点法检测ENA多肽抗体谱总阳性率为54.54%,且检出一种或一种以上抗ENA抗体,其中系统性红斑狼疮27例(51.85%),干燥综合征26例(85.71%),类风湿性关节炎26例(43.33%),结缔组织病8例(66.67%),皮肌炎及多发性肌炎5例(31.25%)。结论免疫印迹技术(IBT)敏感性好,特异度高,并对自身免疫性疾病的诊断、治疗及预后有重要的参考价值,而ANA检测仍可作为自身免疫性疾病筛查的常规指标。

蛋白芯片技术对8种自身抗体的检测及其评价

目的 研究蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性及特异性,探讨其对自身免疫性疾病的鉴别诊断价值,并对其方法学进行评估。方法 用胶体金标法、间接免疫荧光法及蛋白芯片法检测抗 ds- DNA;用免疫印迹法、蛋白芯片法检测抗Sm 、抗u1RNP 、抗SSA、抗SSB 、抗Rib- P、抗 Jo -1及抗 Scl- 70 7 种自身抗体,对检测结果进行统计学分析。结果 抗dsDNA抗体检测,蛋白芯片法优于胶体金标法 (P<0.01);皮肌炎和多发性肌炎(DM/PM)组 Jo -1 抗体(P<0.01)、混合性结缔组织病(MCTD)组u1RNP抗体(P<0.01)、硬皮病(PSS)组 Scl- 70 抗体(P<0.05),蛋白芯片法与免疫印迹法检测结果存在显著性差异;在 DM/PM组、PSS组、MCTD组,蛋白芯片法与免疫印迹法对自身免疫性疾病的鉴别诊断有显著性差别(P<0.05)。4种方法的总体敏感性依次为蛋白芯片法、免疫印迹法、间接免疫荧光法、胶体金标法。结论 蛋白芯片法检测项目多、简便快速、敏感性好、特异性强、分析客观,值得推广使用。

自身抗体检测蛋白芯片制备条件的优化及初步应用

选择临床上常用的用于自身免疫性疾病抗体检测所对应的12种抗原,运用NBT/BCIP显色反应策略,研制一种可同时检测12种常用自身抗体的蛋白芯片检测系统。应用NBT/BCIP终点检测体系对每一种抗原的点样液、点样浓度、血清稀释度进行优化,制备出可同时检测12种自身抗体的蛋白芯片,并通过对678例病人血清和120例非病人血清的检测进行敏感度和特异度评价。优化的点样液为0.1%TBST,血清稀释度为1:4,12种抗原的最佳点样浓度分别为:ANA520μg/mL,Ro-60/SSa465μg/mL,La/SSb530μg/mL,Jo-1530μg/mL,Scl-70525μg/mL,Sm520μg/mL,Ro-52/SSa615μg/mL,RF340μg/mL,CCP465μg/mL,u1RNP410μg/mL,CENP-B490μg/mL,dsDNA580μg/mL;通过对678份阳性血清和120份阴性血清的检测,该蛋白芯片技术对12种自身抗体检测的敏感度在80%～96.3%之间,特异度在86.7%～100%之间,与传统的检测技术有较高的符合率。我们研究的自身抗体检测蛋白芯片技术体系具有快速、方便、高通量、廉价等优势,易于商业化,适合不同条件的临床需要。

蛋白芯片技术在检测自身抗体中的应用探讨

目的评价蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性,及其在常见自身免疫性疾病中的临床应用价值。方法采用蛋白芯片技术(在1张芯片上同时检测8项自身抗体),对214例自身免疫性疾病患者和43例健康体检者进行检测,并与免疫印迹法比较。结果检测抗Rib-P以蛋白芯片法的敏感性高于免疫印迹法(P<0.05),检测抗-SSB以蛋白芯片法的敏感性低于免疫印迹法(P<0.05),而抗-dsDNA、抗-Smith、抗-RNP、抗-SSA、抗Scl-70、抗J0-1的敏感性与免疫印迹法比较,差异无统计学意义(P>0.05),且这8项抗体的特异性均为100%。结论蛋白芯片法可同时检测8项自身抗体,操作方便、快速、敏感性高、特异性强,是常见自身免疫性疾病的辅助诊断方法 ,值得临床推广应用。

蛋白质芯片技术在自身免疫性疾病检测中的应用研究进展

自身免疫性疾病的检测诊断与发病机制非常复杂,蛋白质芯片技术成为研究以自身抗体为特征的自身免疫性疾病的快速、有效的工具,在定量检测和新标志物的发现中有着广泛的应用前景。蛋白质芯片是继基因芯片之后发展起来的一种后基因组研究技术,能够对样品蛋白进行高通量、高灵敏度、高特异性的分析,是蛋白质组学研究中强有力的工具。本文就蛋白质芯片及其在自身免疫系统疾病诊断与检测中的应用作一综述。

蛋白芯片技术在自身抗体检测中的应用

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法,并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)自身抗体检测试剂盒进行比对,验证抗核抗体谱检测蛋白芯片(抗SSA-52抗体、抗SSA-60抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗dsDNA抗体、抗rRNP抗体、抗着丝点抗体和抗核抗体)在临床应用中的敏感性和特异性。除抗Jo-1抗体阳性样品较罕见,仅检测阳性样品32份,其他10种自身抗体,每种选择各阳性样本70份,阴性样本294份;并对检测结果进行统计学分析。结果除抗SSA52抗体和抗SSB抗体的检测敏感度分别为95·7%和98·6%外,其他9种自身抗体的检测敏感度均为100%;除抗SSB抗体、抗RNP-68抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体、抗CENP-B抗体、抗核抗原提取物抗体(ANA)的检测特异度分别为98·0%、98·0%、99·7%、99·7%、99·7%、98·3%外,其他5种自身抗体的检测特异度均为100%。结论蛋白芯片技术检测11种抗核抗体谱自身抗体的检测敏感度(均>95·0%)和特异度(均>98·0%)均较高,且与IIF和ELISA法有较高的符合率,能满足临床检测自身抗体谱的要求。此外,蛋白芯片技术检测自身抗体时具有高通量、简单快速、敏感度好和特异度强等优点,值得临床推广应用。