用质粒pUC18在大肠杆菌中表达人蛋白质二硫键异构酶

用质粒ｐＵＣ１８在大肠杆菌中表达人蛋白质二硫键异构酶高音，王志珍（中国科学院生物物理研究所，生物大分子国家重点实验室，北京１００１０１）蛋白质二硫键异构酶（ｐｒｏｔｅｉｎｄｉｓｕｌｆｉｄｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＤＩ）催化蛋白质分子内天然二硫键的形成，...

人蛋白质二硫键异构酶cDNA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从人胚胎肝组织中分离纯化出总ＲＮＡ，在总ＲＮＡ中提取ｍＲＮＡ，经逆转录得到ｃＤＮＡ第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物，进行ＰＣＲ合成人蛋白质二硫键异构酶（Ｐｒｏｔｅｉｎｄｉｓｕｌｆｉｄｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＤＩ）ｃＤＮＡ基因，将所得ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＵＣ１８上，转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞，进行诱导表达筛选和活性筛选。将筛选的基因克隆到载体ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌细胞中表达，产物以溶解形式在胞浆中表达。表达产物经硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱层析分离，产物的纯度与活性分别为９０％、１１００ｕ／ｇ。

玉米蛋白质二硫键异构酶(PDI)基因的特征和表达(英文)

蛋白质二硫键异构酶(PDI)对蛋白的折叠和二硫键的形成起重要的作用.此外,PDI还执行许多其他的生物功能,是1个多功能酶.本文通过研究玉米中1个PDI基因的特征和表达,探讨它的功能作用.玉米中的PDI基因编码513个氨基酸.同源分析表明,该基因和水稻、小麦的PDI基因聚为一类,有很高的蛋白相似性.蛋白结构分析表明,该基因具有明显的PDI基因的结构特点,包括硫氧还蛋白活性位点(CGHC)以及内质网定位信号(KDEL).Northern杂交分析显示,该基因在发育种子的表达量高,同时受干旱、冷、ABA和盐等逆境胁迫诱导表达.PDI与GFP融合表达研究基因的亚细胞定位,表明该基因定位在除细胞膜外的细胞质和细胞器上.

小麦品种“陕253”PDI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化

为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典型的异构酶活性的催化位点-CGHC-和内质网驻留信号肽-KDEL-。构建该基因的原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中经IPTG诱导表达融合蛋白,并对表达蛋白进行了纯化。SDS-PAGE及Western-blot检测证实融合蛋白诱导表达并纯化成功。

人类一条新的类蛋白质二硫键异构酶cDNA的克隆和表达

利用 SMART技术构建了人胎脑 c DNA文库 ,通过大规模测序筛选出一条 16 45 bp的人类 c DNA。此c DNA含有一个 888bp的开放阅读框 (ORF) ,编码一个 2 96个氨基酸的蛋白质 ,预测分子量 34 .0 KD。与目前数据库中序列比较 ,该 c DNA编码的蛋白质与蛋白质二硫键异构酶的同源性达 36 % ,命名为类蛋白质二硫键异构酶(PDI- L)基因。多组织 Northern blot分析显示 PDI- L c DNA在心、脑、肝、肾等组织中均有表达。该 c DNA的读框片段正确插入到改造后的 p BV2 2 0表达载体中 。

脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建

通过构建脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株 ,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化物异构酶表达水平不仅与其KfPDI基因拷贝数有关 ,而且与该基因是否整合入宿主染色体也密切相关。

沟叶结缕草蛋白质二硫键异构酶(ZmPDIs)基因家族耐盐功能分析

蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)及其类蛋白,是硫氧还蛋白超家族的重要成员,具有分子伴侣活性及钙离子结合位点,负责催化蛋白质二硫键的氧化、还原和异构。本研究从沟叶结缕草基因组中鉴定获得了5个蛋白质二硫键异构酶(ZmPDIs)基因,对其进行了系统进化与基因结构的生物信息学分析,利用同源基因缺失酵母突变体对其耐盐功能进行了初步分析。荧光定量RT-PCR结果表明5个ZmPDIs基因的表达均受到盐胁迫的诱导。这些结果为进一步研究ZmPDIs的耐盐生理功能及分子机制提供参重要参考。