血清PAPP-A、PP13和sFlt-1/PlGF比值检测对子痫前期高危孕妇患病的预测价值

目的分析血清妊娠相关α血浆蛋白(PAPP-A)、胎盘蛋白13(PP13)和可溶性胎盘血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)/胎盘生长因子(PlGF)比值检测对子痫前期(PE)高危因素孕妇PE发生的预测价值。方法选取2021年3月至2023年3月合肥市第二人民医院收治的187例具有PE高危因素的孕妇,根据妊娠20周后是否发生PE分为患病组(28例)和未患病组(159例)。收集所有孕妇一般资料,并采用酶联免疫吸附试验检测所有孕妇血清PAPP-A、PP13、sFlt-1、PlGF水平,采用Pearson相关分析各指标的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标对PE发生的预测价值。结果妊娠16周及分娩前患病组血清PAPP-A水平均低于未患病组,血清PP13水平均高于未患病组,sFlt-1/PlGF比值均高于未患病组,差异有统计学意义(t值介于4.198~8.173之间,P<0.05);患病组孕妇经干预治疗后血清PAPP-A水平升高,血清PP13水平降低,sFlt-1/PlGF比值降低,差异有统计学意义(t值介于2.024~3.671之间,P<0.05);血清PAPP-A水平与PP13、sFlt-1/PlGF比值均呈负相关性(r值分别为-0.836、-0.775,P<0.05),血清PP13水平与sFlt-1/PlGF比值呈正相关性(r=0.670,P<0.05);ROC分析结果显示,血清PAPP-A、PP13、sFlt-1/PlGF预测PE发生的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.805、0.798,均有一定的预测价值(P<0.05)。结论血清PAPP-A、PP13和sFlt-1/PlGF比值对PE高危因素孕妇发生PE有较高的预测价值。

miR-93-5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-93-5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1(protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法使用LipofectamineTM2000分别将质粒inhibitor NC、miR-93-5p inhibitor、pcDNA、pc-PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA组和pc-PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT-PCR检测细胞中miR-93-5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与PKMYT1的靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)的蛋白表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比,SPC-A-1细胞、A549细胞、LTEP-α-2细胞中miR-93-5p表达水平均升高(均P<0.01),PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.05),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-93-5p NC+3′UTR-WT组相比,miR-93-5p mimic+3′UTR-WT组细胞相对荧光素酶活性下降(P<0.001)。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc-PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.001),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。结论沉默miR-93-5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

下调PKMYT1表达对宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探究下调膜相关酪氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PKMYT1)表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:利用UALCAN数据库平台分析PKMYT1在宫颈癌组织的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PKMYT1在END1/E6E7细胞和宫颈癌细胞的表达。将c-33A细胞、SiHa细胞分为转染对照组(转染siRNA-NC)和siRNA-PKMYT1组(下调PKMYT1表达)。RT-qPCR和Western blot分析无翅型MMTV整合位点家族成员1(WNT1)、β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的mRNA和蛋白的表达。利用MTT、划痕实验和Transwell实验分析细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果:PKMYT1在宫颈癌组织和细胞表达上调(P<0.05)。siRNA-PKMYT1组c-33A和SiHa细胞中Wnt1、β-catenin和c-Myc表达水平均低于转染对照组,c-33A和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于转染对照组(均P<0.05)。结论:沉默PKMYT1可以抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭过程,并降低Wnt/β-catenin信号通路活性,表明PKMYT1在宫颈癌可能发挥抑癌作用。

西藏地区结直肠癌免疫治疗和靶向治疗相关分子标志物的检测及意义

目的研究西藏地区结直肠癌中SWI/SNF相关、基质相关、肌动蛋白依赖性染色质调节因子A亚科成员4(SMARCA4)/Brahma相关基因1、V-raf鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B(BRAF)、P53、程序性死亡受体1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)免疫组织化学表达和BRAF、神经营养因子酪氨酸受体激酶(NTRK)基因改变情况,为西藏地区结直肠癌患者的靶向治疗及免疫治疗提供依据。方法收集2015年1月至2021年7月西藏自治区人民医院经手术切除病理确诊为结直肠癌病例64例,全部病例均进行SMARCA4、BRAF、P53、PD-1、PD-L1免疫组织化学染色和NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因荧光原位杂交检测及BRAF V600E基因突变PCR检测。结果64例结直肠癌病例男女比例1.21∶1,平均年龄(56.59±13.27)岁;46例(71.88%)位于结肠,18例(28.12%)位于直肠;60例(93.75%)为腺癌,4例(6.25%)为其他类型;11例(17.19%)为T1或T2期,53例(82.81%)为T3或T4期;24例(37.50%)出现淋巴结转移。免疫组织化学方面,64例中1例(1.56%)SMARCA4部分肿瘤细胞表达减弱或缺失,4例(6.25%)BRAF肿瘤细胞阳性表达,35例(54.69%)P53为突变型表达;45例(70.31%)PD-1肿瘤相关免疫细胞阳性比例分数<10%,19例(29.69%)≥10%;52例(81.25%)PD-L1联合阳性分数<10,12例(18.75%)≥10。64例NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因检测均为阴性;4例(6.25%)检测到BRAF V600E基因突变;1例SMARCA4表达缺失病例未检测到SMARCA4基因改变。PD-L1的表达与错配修复缺陷/高度微卫星不稳定和PD-1的高表达呈显著正相关(χ^(2)=10.223,P=0.001;χ^(2)=11.979,P=0.001)。结论西藏地区结直肠癌中较少出现SMARCA4表达减弱或缺失及NTRK融合基因改变,少数病例有BRAF V600E基因突变,Pan-TRK和BRAF免疫组织化学可作为NTRK融合基因及BRAF基因突变的初筛方法。错配修复缺陷/高度微卫星不稳定的病例中更容易出现PD-L1蛋白高表达,这部分患者有望获益于免疫治疗。P53突变与PD-L1表达无相关性,PD-1的高表达和PD-L1的高表达呈正相关。

sFlt-1与LAMP-2在ANCA相关性肾炎患者血清中的表达水平及其相关性分析

目的探究可溶性血管内皮细胞生长因子受体1(sFlt-1)与溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)在抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性肾炎患者血清中的表达水平及其相关性。方法选择2016年10月至2017年10月间90例ANCA相关性肾炎患者作为研究组,根据24h尿蛋白水平分为低蛋白尿组和高蛋白尿组。选择同期单纯慢性肾小球肾炎患者共90例作为对照组以及50例健康者作为健康组。分别比较不同组间的血清和尿液中的sFlt-1和LAMP-2水平,并分别研究sFlt-1和LAMP-2水平与ANCA相关性肾炎以及24h尿蛋白的相关性。结果研究组血清和尿液中的sFlt-1和LAMP-2水平均显著高于对照组和健康组(P<0.05)。将尿液和血清中的sFlt-1和LAMP-2纳入Logistic多元回归分析,结果显示血清LAMP-2以及尿液LAMP-2是ANCA相关性肾炎的高危因素(P<0.05)。在ANCA相关性肾炎患者(研究组)中,高蛋白尿组患者血清和尿液中的sFlt-1和LAMP-2水平均显著高于低蛋白尿组(P<0.05),并且均显著高于健康组(P<0.05)。血清和尿液中sFlt-1和LAMP-2与ANCA相关性肾炎患者24h尿蛋白呈现显著的正相关性(P<0.05)。结论慢性肾小球肾炎患者血清和尿液中sFlt-1和LAMP-2水平显著升高,ANCA相关性肾炎患者LAMP-2水平显著高于慢性肾小球肾炎患者,并且血清和尿液中LAMP-2是ANCA相关性肾炎的高危因素。

慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力

目的研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响。方法应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况。应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrigel)检测体外迁移与侵袭能力的改变。反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制。结果成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株。K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果最好,利用该模型进行后续研究。台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P<0.01)。与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3%和28.6%;克隆形成抑制率分别为37.6%和34.1%。体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P<0.01)。CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降。结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关。

lncRNA-MALAT1基于p-PI3K/p-AKT通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探究血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,lncRNA-MALAT1)基于磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)/磷酸化-苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated threonine-protein kinase,p-AKT)通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法将培养的U87脑胶质瘤细胞分为脑胶质瘤组、空白组和转染组。采用PCR法检测lncRNA-MALAT1表达量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT检测细胞增殖率,Transwell检测细胞侵袭,Western blot法检测p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白水平。结果与脑胶质瘤组相比,空白组、转染组lncRNA-MALAT1表达量较低;与空白组相比,转染组lncRNA-MALAT1表达量较低。与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞凋亡率较高;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞增殖率较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞侵袭个数较少;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白表达量较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组MMP2、MMP9蛋白表达量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-MALAT1可有效降低p-PI3K/p-AKT信号通路相关蛋白的表达,继而有效抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,促进胶质瘤细胞的凋亡,降低MMP2、MMP9蛋白的表达量。

sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A在稽留流产中的表达及意义

目的研究可溶性FMS样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)在稽留流产中的表达及意义。方法选取2015年6月至2017年6月在重庆市两江新区第一人民医院接受治疗的稽留流产患者40例纳入稽留流产组;早期流产患者40例纳入早期流产组;另外选取进行体检的健康妊娠期产妇20例作为正常组。收集3组研究对象的绒毛组织,采用免疫组化染色处理,酶联免疫吸附测定sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A表达,并在显微镜下观察其阳性表达情况。结果正常组sFlt-1表达水平显著低于早期流产组和稽留流产组(P<0.05);稽留流产组sFlt-1表达水平低于早期流产组(P<0.05)。正常组IGFBP-3、PAPP-A表达水平显著高于早期流产组和稽留流产组(P<0.05);稽留流产组患者IGFBP-3、PAPP-A表达水平高于早期流产患者(P<0.05)。sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A三项联合检测敏感度、准确度高于sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A单一检测,特异度低于sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A单一检测(P<0.05)。结论sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A联合检测对稽留流产的诊断价值较高,sFlt-1、IGFBP-3、PAPP-A的异常表达参与了稽留流产的发展,为稽留流产的治疗提供一定的理论基础。

MARCH1通过PI3K/AKT信号通路对人胃癌细胞迁移和侵袭的促进作用

目的:探讨膜相关环状蛋白1(MARCH1)对胃癌细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:收集胃癌手术切除的20例胃癌组织和癌旁组织,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和Western blotting法检测不同组织中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平。选择人胃黏膜正常上皮细胞GES-1和人胃癌细胞BGC-823、BGC-803、AGS及SGC-7901,RT-qPCR法检测不同细胞中MARCH1 mRNA表达水平。取对数生长期的SGC-7901细胞系分为siNC(转染siNC)、siMARCH1-1组(转染siMARCH1-1)和siMARCH1-2组(转染siMARCH1-2),RT-qPCR法和Western blotting法检测各组细胞中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),与胃黏膜正常上皮细胞GES-1比较,人胃癌细胞BGC-823、BGC-803、AGS和SGC-7901中MARCH1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。与siNC比较,siMARCH1-1组和siMARCH1-2组细胞中MARCH1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与siNC比较,siMARCH1-1组和siMARCH1-2组细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05),细胞划痕愈合率和侵袭数均明显降低(P<0.01),细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.01),AKT蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MARCH1能够促进胃癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

肺腺癌转移相关转录本-1沉默对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的 探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默肺腺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)基因对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路影响。方法体外培养人喉癌细胞Hep-2、正常永生化表皮细胞Hacat,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中MALAT-1mRNA表达水平。采用RNAi技术将MALAT-1阴性对照质粒、si-MALAT1分别转染至Hep-2细胞,命名为si-NC组、si-MALAT1组,未处理组作为空白对照组,分别检测三组Hep-2细胞中MALAT-1及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、caspase-3mRNA表达水平、Bcl-2、Bax、caspase-3、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)蛋白表达情况以及细胞增殖及凋亡情况。结果 与正常细胞相比,喉癌Hep-2细胞中MALAT-1mRNA表达水平(3.24±1.02)升高(P<0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-MALAT-1组Hep-2细胞中MALAT-1mRNA表达水平(0.47±0.08)及Bcl-2mRNA(0.56±0.09)及蛋白(0.31±0.05)表达降低,细胞增殖抑制率及凋亡率[(20.48±3.41)%]均升高,Bax、caspase-3mRNA(3.02±0.50、2.58±0.43)及蛋白表达(0.86±0.14、0.94±0.16)均升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达(0.57±0.10、0.51±0.08)均降低(P均<0.05)。结论 MALAT-1沉默可抑制人喉癌细胞系Hep-2细胞增殖并提高其凋亡率,推测可能通过影响Akt信号通路诱导癌细胞凋亡。

利用综合治疗措施进一步提高肝癌肝移植疗效

超标准原发性肝癌(肝癌)病人的肝移植机会、符合标准的肝癌病人等待肝移植期间因肝癌进展脱失和肝癌肝移植术后复发是当前肝癌肝移植面临的重要问题。近年来仑伐替尼等系统治疗药物及其联合其它治疗的综合治疗在晚期肝癌治疗中获得了突破性疗效,也为肝癌肝移植的降期治疗、桥接治疗和肿瘤复发防治带来了新的希望。基于系统治疗药物的综合治疗可能是提高肝癌肝移植疗效的突破点,值得深入研究。本文介绍了肝癌肝移植的降期治疗、桥接治疗和肿瘤复发防治进展,旨在为临床治疗提供参考。

人血液酪氨酸蛋白激酶的研究(Ⅱ)人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的鉴定与性质

以人工合成的多肽poly(Glu-Ala-Tyr)_(6:3:1)为底物测定了人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的活性,并对其性质进行了初步研究。发现Mg^(2+)对该酶的激活远远大于Mn^(2+),且Mg^(2+)最大激活浓度为50mmol/L左右。在5mg/ml的多肽底物浓度下,TPK达到最大反应速度,其Km值约为2.5mg/ml;对ATP、TPK的Km值大约为19μmol/L。多肽底物磷酸化氨基酸分析表明,仅有酪氨酸残基被磷酸化。

电针足三里、内关穴抑制mTOR信号通路缓解大鼠脑缺血损伤作用的研究

目的探讨电针(EA)刺激足三里、内关穴对脑缺血大鼠的影响及对mTOR信号通路的调控作用。方法将75只大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型3 d组、EA干预3 d组、MCAO模型7 d组、EA干预7 d组,每组15只。除Sham组外,其余组采用Longa线栓法构建永久性MCAO大鼠模型,EA干预组术后每日治疗内关和足三里穴20 min。于相应时间点对各组行神经功能缺损评分,采用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色分析脑梗死体积,HE和尼氏染色评估脑缺血后病理改变,Western blot法检测梗死侧大脑皮层中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子蛋白激酶B(AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、总mTOR蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测梗死侧大脑皮层中LC3B、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)mRNA的表达。结果与Sham组相比,MCAO模型组各时间点神经功能缺损评分升高(P<0.05),大脑皮层区出现大片坏死及炎性浸润,大量神经元坏死,细胞排列紊乱,完整神经元数量显著减少(P<0.05),LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著降低(P<0.05),MCAO模型7 d组的Bax mRNA表达显著增加(P<0.05),并且mTOR磷酸化水平(p-mTOR/t-mTOR)显著高于MCAO模型3 d组(P<0.05)。与MCAO模型组相比,EA干预7 d组大鼠神经功能缺损评分降低,EA干预3 d组和7 d组脑梗死面积百分比均明显降低(P<0.05),大脑皮层区坏死灶显著减小,炎性浸润改善,细胞排列不规律,完整神经元数量显著增加(P<0.05)。与MCAO模型7 d组相比,EA干预7 d组LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著增加,Bax mRNA表达显著降低,p-mTOR/t-mTOR水平显著降低(均P<0.05)。AKT蛋白在各组中表达无明显差异。结论EA刺激足三里、内关穴对脑缺血性损伤具有神经保护作用,并诱导自噬发生,抑制凋亡反应,其机制可能与抑制mTOR信号通路活化有关。

白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法将白花蛇舌草、半枝莲按质量1∶1进行3次煎煮,获得水提物,后取适量浸膏用石油醚回流脱脂,再以乙酸乙酯进行多次萃取,获得白花蛇舌草-半枝莲药对组分,并计算得率。实验分为对照组(正常培养Lovo细胞)、白花蛇舌草-半枝莲药对组分低剂量组(10 mg/L)、中剂量组(30 mg/L)及高剂量组(50 mg/L)。通过噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞培养24、48、72 h后的增殖抑制率。各组细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Grb2相关结合蛋白1(Gab1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、苏氨酸激酶(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果化学萃取后的白花蛇舌草-半枝莲药对中主要含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种化合物,组分得率为0.61%。与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率升高,G1期肿瘤细胞比例增加,细胞凋亡指数增高,侵袭细胞数和划痕闭合率明显减小(均P<0.05),细胞中Gab1、VEGFR-2、PI3K、Akt、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,Bax表达升高(均P<0.05),且存在剂量依赖性。结论白花蛇舌草-半枝莲药对组分可抑制结肠腺癌Lovo细胞的增殖,降低其迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Gab1/VEGFR-2/PI3K/Akt信号通路活化有关。

蛋白酪氨酸激酶在IL-1β和TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MAPKs活化中的作用

目的 比较类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)与骨关节炎 (osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞 (fibroblast likesynoviocytes,FLS)蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异 ;探讨RAFLS中 ,蛋白酪氨酸激酶 (proteintyrosinekinase,PTK)在IL 1β和TNF α作用下有丝分裂原活化蛋白激酶 (mito genactivatedproteinkinase ,MAPKs)活化中的作用。 方法 滑膜细胞原代培养 ,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别 ,提取蛋白进行SDS PAGE单相电泳和ICE PAGE双相电泳分离后 ,用Westernblots检测FLS蛋白磷酸化的状态。结果 滑膜细胞培养至第三代时 ,CD3、CD14、CD2 0、CD11b、vonWillebrandfactor阳性细胞比例小于 1% ;RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度是OAFLS的 4～ 6倍 ;IL 1β和TNF α可以瞬时引起RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加 ,并在短时间内激活MAPKs(ERK2 ,JNK2 和p38为主 ) :genistein对ERK2 活化抑制作用显著 ,而对于JNK2 、p38,活化的抑制则较弱。 结论 原代培养的滑膜细胞当传代至第三代时即可以获得型别均一的成纤维样滑膜细胞 ;RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化状态较OAFLS明显增高 ;IL 1β和TNF α可以瞬时引起RAFLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加 ,激活MAPKs通路 (EPK2 、JNK2 、p38) 。

聚嘧啶束结合蛋白相关剪切子高表达对视网膜微血管内皮细胞的影响

目的观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪切子(PSF)高表达对低浓度4-羟基壬烯醛(4-HNE)诱导下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的影响,初步探讨其可能存在的机制。方法将体外培养的对数生长期HRMECs分为4-HNE处理组、PSF高表达联合4-HNE组(PSF+4-HNE组)、PSF高表达+核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385)联合4-HNE组(PSF+ML385+4-HNE组)、磷酸肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后4-HNE联合PSF组(LY294002+4-HNE+PSF组)。4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组细胞培养基加人10μmmol/L4-HNE刺激12h,PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000将1.0μgpcDNA-PSF真核表达质粒导入细胞中转染24h后,PSF+ML385+4-HNE组加入ML385(5μmol/L)预处理48h。LY294002+4-HNE+PSF组,除采用LY294002预处理外,4-HNE浓度、刺激时间以及质粒转染时间同前。Transwell检测PSF对HRMECs迁移能力的影响;Matrigel体外三维成型法检测PSF对HRMECs管腔形成的影响;流式细胞仪检测PSF对HRMECs中活性氧(ROS)水平的影响;蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测PSF、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白相对表达量以及磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(pAkt)蛋白相对表达量。两组间比较采用t检验。结果4-HNE处理组、PSF+4-HNE组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数分别为(1.70±0.06)、(0.80±0.13)个,(24.00±0.58)、(10.00±0.67)个和(725.00±5.77)、(318.70±12.13)个。两组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数比较,差异均有统计学意义(t-12.311、15.643、17.346,P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组ROS水平分别为816.70±16.67、416.70±15.44、783.30±17.41;组间两两比较,差异均有统计学意义(t=16.311、14.833、18.442,P<0.001)。Westernblot检测结果显示,4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、LY294002+4-HNE+PSF组HRMECs中pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量分别为0.08±0.01、0.57±0.04、0.35±0.09,0.17±0.03、1.10±0.06、0.08±0.11,0.80±0.14、2.50±0.07、0.50±0.05。与PSF+4-HNE组比较,LY294002+4-HNE+PSF组pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(t=17.342、16.813、18.794,P<0.001)。结论PSF高表达通过活化磷酸肌醇3激酶/Akt通路上调HO-1的表达,从而抑制低浓度4-HNE诱导的HRMECs增生迁移和管腔形成。

探究新型基因突变对儿童神经母细胞瘤存活的影响及其相关机制

目的分析髓鞘转录因子1激酶抗体(PKMYT1)和腺苷同型半胱氨酸水解酶(AHCY)突变对重组人类n-myc原癌基因蛋白(MYCN)基因扩增的儿童神经母细胞瘤存活的影响及其参与的调控机制。方法实验组用CRISPR-Cas9系统实现PKMYT1和AHCY的定点突变,对照组为野生型。用流式细胞术检测实验组和对照组细胞凋亡的能力,用克隆形成实验和异种移植模型验证实验组和对照组细胞存活和增殖能力的能力,用Western blot检测PKMYT1和AHCY突变参与的信号通路。结果野生型和C1358T1的凋亡比例分别为(7.23±0.32)%和(5.71±0.23)%,差异有统计学意义(P<0.05);野生型和G367A的凋亡比例分别为(9.24±0.54)%和(6.62±0.43)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PKMYT1突变主要通过激活MYCN扩增的神经母细胞瘤的同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白通路(mTOR)通路来抑制细胞的凋亡,而AHCY突变主要是通过激活MYCN扩增的神经母细胞瘤的转化生长因子-β(TGF-β)通路来抑制细胞的凋亡。

酪氨酸和苏氨酸蛋白激酶在结直肠癌发生发展中的表达变化及其与预后的关系

摘要目的探讨酪氨酸和苏氨酸蛋白激酶（TTK）在结直肠癌发生发展中的表达变化及与结直肠癌患者预后的关系。方法联合应用氧化偶氮甲烷（AOM）和葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导C57BL/6小鼠发生结肠炎相关的结肠癌，得到结肠癌发生发展的4个不同阶段的小鼠模型（分别为炎症恢复期、轻度不典型增生、腺瘤、腺癌），同时设立无任何处理的对照组。应用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测不同阶段小鼠结肠和24对结直肠癌及其配对的癌旁组织中TTK mRNA和蛋白的表达水平。从美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因表达公共数据库中获取结直肠癌全基因组芯片数据，分析TTK的表达与结直肠癌患者预后的关系。结果AOM-DSS结肠癌小鼠模型的结肠全基因组表达芯片显示，TTK mRNA的表达水平随着结肠癌的发生发展逐渐升高。实时荧光定量PCR检测结果显示，对照组、炎症恢复期、轻度不典型增生、腺瘤和腺癌小鼠结肠组织中TTK mRNA的表达水平分别为1.05±0.42、1.10±0.03、1.38±0.15、1.33±0.17和2.12±0.22，轻度不典型增生、腺瘤和腺癌小鼠结肠组织中TTK mRNA的表达水平均明显高于对照组（均P〈0.05）。免疫组化检测对照组、炎症恢复期、轻度不典型增生、腺瘤和腺癌小鼠结肠组织中TTK蛋白的表达变化与TTK mRNA的检测结果一致。24例结直肠癌患者肿瘤组织中TTK mRNA的表达水平为0.71±0.10，明显高于配对的癌旁组织（0.18±0.04，P〈0.001）。免疫组化检测5例结直肠癌患者肿瘤组织中TTK蛋白的阳性表达率为80.0%，明显高于配对的癌旁组织（30.8%，P＝0.014）。全基因组芯片网络数据（GSE17536）分析显示，TTK的高表达与结直肠癌患者的不良预后有关。结论在结肠癌的小鼠模型中，TTK的表达随着肿瘤的发生发展逐渐升高；在临床结直肠癌标本中，TTK的高表达与患者的不良预后相关。

丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白在肿瘤发生发展中的作用研究进展

丝氨酸苏氨酸激酶受体相关蛋白（STRAP）由Datta教授最先发现并命名。起初发现STRAP能够与转化生长因子-β（TGF-β）受体和Smads家族蛋白中的Smad7相互作用而负性调节经典的TGF-β信号通路转导。由于Smad依赖的TGF-β信号通路能够抑制细胞生长，而且许多研究报道STRAP在多肿瘤组织中表达上调，比如结肠癌、肺癌及乳腺癌等。因此，早期的生物学功能研究结果表明STRAP具有促癌基因的特性。随着研究深入，人们发现STRAP作为WD40超家族蛋白成员之一，不仅仅起到促肿瘤生长的作用，而且具有多样化的生物学功能。WD40结构域具有的转角平台结构为STRAP与其他蛋白相互作用提供了作用平台，为STRAP调节多种蛋白的功能提供了结构基础。由于STRAP自身不具有酶活性，使得STRAP调节的生物过程都是通过与其他蛋白相互作用实现的。在本文中我们将对STRAP在肿瘤中的作用研究进展进行系统综述。

肿瘤坏死因子受体相关因子6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4在未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎发病中的机制

未足月胎膜早破是产科常见的妊娠期并发症。未足月胎膜早破与感染密切相关,严重影响母儿结局。肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在炎症通路里起着关键的枢纽作用,最近研究发现丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(MST4)可以动态应答细菌感染,并调节TRAF6的活性,抑制过度炎症反应。笔者就TRAF6和MST4在炎症通路中的作用机制以及其可能在未足月胎膜早破合并组织学绒毛膜羊膜炎中的重要意义进行综述。