蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性、亚细胞分布与KBV200细胞株多药耐药(MDR)的关系。方法MTT法检测KB和KBV200细胞对细胞毒药物的耐药性,32P掺入法检测两株细胞的PKC活性。结果长春新碱(VCR)、阿霉素(ADR)对KBV200细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别是KB细胞的65.03和19.8倍;KBV200细胞的膜组分、胞质组分的PKC活性均高于KB细胞(P<0.01),KBV200细胞PKC总活性是KB细胞的2.12倍;佛波酯可升高KBV200细胞总或膜组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值升高(P<0.01);十字孢碱可降低KBV200细胞两种组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值降低(P<0.01),对VCR、ADR的逆转倍数分别是5.46和1.96倍。结论PKC与KBV200细胞株的MDR表型关系密切,PKC可能介导了KBV200细胞的MDR。

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。

基于P38 MAPK/JNK信号通路研究二甲双胍对脓毒性心肌病的保护作用机制

基于丝裂原活化蛋白激酶P38(P38 MAPK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路探讨二甲双胍对脓毒性心肌病的保护机制。本文为动物实验研究设计,于2023年1—12月在中南大学湘雅医院完成。采用随机数字表法将48只8周龄雌性C57BL/6小鼠分为4组:A组(对照组)、B组(模型组)、C组(模型+盐酸曲美他嗪)、D组(模型+二甲双胍组),每组12只。B、C、D组均以LPS(15 mg/kg)腹腔注射构建脓毒性心肌病小鼠模型,建模24 h后,A组、B组予以腹腔注射等量生理盐水,C组予以20 mg/kg盐酸曲美他嗪灌胃,D组予以腹腔注射二甲双胍200 mg/kg,均连续干预14 d。采用超声成像系统检测心功能,采用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠心肌组织中P38 MAPK/JNK信号通路JNK、P38 MAPK mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组小鼠血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑利钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)含量;采用蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)、小窝蛋白-3(Cav-3)的蛋白表达。结果显示,与A组左心室射血分数(LVEF)(79.51±6.62)%、左室短轴缩短率(FS)(45.66±4.13)、细胞凋亡率(4.34±0.36)%、JNK(0.96±0.06)、P38 MAPK(1.01±0.03)、CK-MB(2.37±0.13)μg/L、BNP(21.36±3.47)ng/L、TNF-α(176.22±19.24)ng/L、IL-6(35.43±3.84)ng/L、PKCε表达(1.98±0.26)、Cav-3表达(1.04±0.03)相比,B、C、D组细胞凋亡率(28.22±4.49、22.45±3.69、15.88±3.27)%、JNK(1.68±0.11、1.32±0.18、1.13±0.14)、P38 MAPK(2.47±0.71、1.77±0.35、1.49±0.05)、CK-MB(16.55±2.16、12.63±1.98、5.27±0.61)μg/L、BNP(48.92±5.67、33.78±4.11、27.55±3.84)ng/L、TNF-α(463.71±24.81、335.71±36.71、214.78±22.53)ng/L、IL-6(78.57±6.36、63.71±5.66、52.47±5.47)ng/L表达均升高,而LVEF(49.38±5.27、55.47±5.03、62.26±5.14)%、FS(24.36±2.17、30.43±3.29、33.57±2.72)%、PKCε表达(1.33±0.21、1.54±0.23、1.75±0.22)、Cav-3表达(0.47±0.06、0.76±0.05、0.85±0.04)均下调(F=113.020、67.657、219.539、206.222、227.977、88.455、6285.186、135.877、65.924、96.362、17.532、314.419,P<0.05);与B组相比,C、D组细胞凋亡率、JNK、P38 MAPK、CK-MB、BNP、TNF-α、IL-6表达均降低,LVEF、FS、PKCε、Cav-3表达均上调,且D组优于C组(P<0.05)。综上,二甲双胍对脓毒性心肌病具有一定的保护作用,其机制可能与抑制P38 MAPK/JNK信号通路的活化及上调PKCε、Cav-3表达有关。