努比亚山羊(Capra nubiana)PROX1基因克隆及功能研究

为了克隆努比亚山羊(Capra nubiana)同源异形盒转录因子1(prospero-related homeobox protein 1,PROX1)基因和检测过表达PROX1基因对努比亚山羊骨骼肌成肌细胞分化和肌纤维类型转化相关基因mRNA表达的影响,为研究PROX1基因在骨骼肌发育中的调控作用提供参考,本研究以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板克隆PROX1基因,构建pEGFP-N1-PROX1真核表达载体,转染至努比亚山羊骨骼肌成肌细胞,24 h后更换分化培养基,收集分化6 d的细胞,通过RT-qPCR检测过表达PROX1基因后细胞分化标志基因、NOTCH信号通路相关基因以及骨骼肌肌纤维类型相关基因的表达情况。研究结果表明努比亚山羊PROX1基因编码区(coding sequence,CDS)序列长度为2214 bp,编码含737个氨基酸的多肽。RT-qPCR结果表明PROX1基因可以通过抑制NOTCH信号通路,上调细胞分化标志基因表达水平进而促进成肌细胞的分化(P<0.05),并介导CaN/NFAT信号通路,显著下调MYH2和MYH4基因的mRNA表达水平(P<0.05)。本研究初步确定努比亚山羊PROX1基因参与调控骨骼肌成肌细胞的分化和肌纤维类型的转化,研究结果为进一步丰富肌肉生长发育的分子机制提供理论数据。

Prox1基因在原发性肝细胞癌中的表达及其与病理学分级及临床分期的相关性研究

目的检测Prox1(prospero-related homeobox 1)基因在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨其与HCC病理学分级及临床分期的相关性。方法应用RT-PCR方法检测51例肝癌组织、癌旁组织和16例正常肝组织中Prox1基因表达,并分析其与HCC病理学分级和临床分期的相关性。结果 Prox1 mRNA在肝癌、癌旁及正常肝组织中均有表达,但肝癌组织(0.243±0.102)和癌旁组织(0.537±0.235)的表达量均明显低于正常肝组织(0.812±0.372),P<0.01或P<0.05,且肝癌组织中Prox1 mRNA表达量又明显低于癌旁组织(P<0.05)。肝癌组织中Prox1 mRNA的表达量在不同病理学分级(F=97.950,P<0.001)和临床分期(F=228.300,P<0.001)的肝癌组织中差异均有统计学意义,且各病理学分级和临床分期间两两比较,差异也均有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。Prox1 mRNA表达与肝癌的病理学分级(r=-0.930,P<0.01)和临床分期(r=-0.980,P<0.01)呈负相关。结论 Prox1 mRNA表达可能与HCC的发生、发展有关,然而其是否为HCC的抑癌基因有待进一步证实。

老年胃癌患者血清整合素β6和组织中Prox-1、FAT4表达变化及意义

目的探讨老年胃癌患者血清整合素β6和组织中同源异型盒基因转录因子(Prox)-1、脂肪非典型钙黏蛋白(FAT)4表达变化及对淋巴结转移的预测价值。方法选取老年胃癌患者80例为胃癌组,老年健康志愿者48例为对照组。采集空腹肘静脉血4 ml,双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清整合素β6浓度;术中采集老年胃癌患者的胃癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组化法检测Prox-1、FAT4表达。结果胃癌组血清整合素β6浓度明显高于对照组(P<0.01)。胃癌组织中Prox-1表达阳性率明显高于癌旁正常组织,FAT4表达阳性率明显低于癌旁正常组织(P<0.01)。肿瘤淋巴结转移分类(TNM)分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径>4 cm、分化程度未分化或低分化、有淋巴结转移的老年胃癌患者血清整合素β6浓度明显高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径>4 cm、分化程度未分化或低分化、有淋巴结转移的老年胃癌患者Prox-1阳性率明显高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者,FAT4阳性率明显低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清整合素β6及组织中Prox-1、FAT4表达水平单独和联合检测对老年胃癌患者淋巴结转移均具有较高的预测价值(P<0.05),其中血清整合素β6及组织中Prox-1、FAT4表达水平联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)=0.941],特异度和阳性预测值明显高于各指标单独检测(P<0.05)。结论老年胃癌患者血清整合素β6浓度升高,组织中Prox-1高表达、FAT4低表达,且与病理指标相关,联合检测可用于对患者淋巴结转移的预测。