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Studies on Prunus Necrotic Ringspot Virus (PNRSV) Occurring on Lily 被引量:3
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作者 HAN Li-juan LIU Wen-hong 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第10期1201-1208,共8页
This study was to molecular identify Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) occurring on lily. Lily corms were randomly selected and grown in the greenhouse. The total RNAs were extracted from younger leaves, and pa... This study was to molecular identify Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) occurring on lily. Lily corms were randomly selected and grown in the greenhouse. The total RNAs were extracted from younger leaves, and partial amplification of the CP gene was performed by RT-PCR with primer pairs specific for PNRSV. An expected cDNA fragment of about 450 bp was amplified from lily, cloned into pGEM-T-easy vector, sequenced, and shared 84.5-99.1% homology with the 27 PNRSV isolates reported previously at the nucleotide level, indicating that lily is a new natural host of PNRSV. 展开更多
关键词 LILY prunus necrotic ringspot virus RT-PCR IDENTIFICATION
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3种甜樱桃病毒PNRSV、PDV及LChV-2的多重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:16
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作者 宗晓娟 王文文 +4 位作者 魏海蓉 王甲威 陈新 徐丽 刘庆忠 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1111-1118,共8页
【目的】建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,PDV)、樱桃小果病毒2(Little cherry virus-2,LChV-2)的多重RT-PCR检测方法。【方法】以复合感染3种病毒的甜樱桃病株... 【目的】建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,PDV)、樱桃小果病毒2(Little cherry virus-2,LChV-2)的多重RT-PCR检测方法。【方法】以复合感染3种病毒的甜樱桃病株叶片为材料,采用CTAB法提取样本总RNA,选用随机六聚体引物对植物样本总RNA进行反转录,所得cDNA作为多重RT-PCR的扩增模板。根据GenBank中PNRSV、PDV、LChV-2基因组序列共设计6对特异引物,分别通过单一RT-PCR和多重RT-PCR筛选出可用于同时检测3种甜樱桃病毒的引物组合。对多重RT-PCR的退火温度及循环数进行优化,以筛选出各引物组合的最适扩增条件。分别以单一感染PNRSV、PDV、LChV-2、复合感染3种病毒、单一感染樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA)及甜樱桃无毒苗为样本,对多重RT-PCR引物的特异性进行分析。选取复合感染3种病毒的甜樱桃总RNA的反转录产物为初始模板,按照梯度稀释法依次将模板稀释为2、22、23、24、25倍,在相同PCR反应体系及反应条件下分别对各引物组合的灵敏度进行分析。多重RT-PCR的扩增条带经凝胶回收试剂盒回收纯化后连接至pMD18-T vector,克隆测序,以验证多重RT-PCR检测的准确性。并应用该方法对山东泰安地区甜樱桃生产园中间隔栽培的中国樱桃进行检测。【结果】筛选到2个可以应用的引物组合,组合1"PNRSV-S1/A1、PDV-S2/A2、LChV2-S1/A1"可分别特异性地扩增733、467、337 bp的片段。组合2"PNRSV-S1/A1、PDV-S3/A3、LChV2-S1/A1"可分别扩增得到733、265、337 bp的片段。扩增产物大小与预期相符。多重RT-PCR反应条件优化结果显示,在退火温度52℃、35个循环条件下,2个引物组合的检测效果均较为理想。特异性分析结果显示,2个引物组合均能特异性检测其各自的靶病毒。灵敏度分析结果显示,2个引物组合在cDNA的23×稀释液中仍能特异性扩增,但扩增条带的强度稍有差异,其对植物总RNA的反转录产物的最低检测浓度为107.9 ng·μL-1。克隆测序及序列分析表明,2个引物组合对各自靶病毒的检测结果可靠。应用该方法对9个中国樱桃样本进行检测,结果显示,测试样品均至少感染了2种病毒,其中5个样品复合感染了3种病毒,2个样品同时感染PDV和LChV-2,2个样品同时感染PNRSV和LChV-2。【结论】应用建立的多重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏的同时检测单一或复合侵染的3种甜樱桃病毒。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 李矮缩病毒 樱桃 果病毒-2 多重RT-PCR 病原检测
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李属坏死环斑病毒怀柔分离物(PNRSV-HR)外壳蛋白基因片断的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 黄冲 李明福 张永江 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第B08期105-108,共4页
应用RT-PCR方法检测了采自北京市怀柔区的樱桃叶片,将此PCR扩增产物连接到pMD18-T载体上,通过转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,克隆了含有目的片段的重组质粒,并进行序列测定和分析。序列分析结果表明,认为该分离物外壳蛋白基因片断与李属... 应用RT-PCR方法检测了采自北京市怀柔区的樱桃叶片,将此PCR扩增产物连接到pMD18-T载体上,通过转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,克隆了含有目的片段的重组质粒,并进行序列测定和分析。序列分析结果表明,认为该分离物外壳蛋白基因片断与李属坏死环斑病毒的NRSiz8株系的同源性最高,为98%,与德国分离物Ring17的同源性达99%;通过进化关系分析,认为该分离物属于引起温和症状的group,认为该分离物的第5,62,81和126位氨基酸也与CH9血清型引起温和症状的保守的替换相同。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒(pnrsv) RT—PCR 克隆 序列分析
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李属坏死环斑病毒(PNRSV)RT-LAMP检测方法的建立 被引量:4
4
作者 韩剑 罗明 +2 位作者 殷智婷 周国辉 张祥林 《新疆农业大学学报》 CAS 2014年第4期327-332,共6页
针对李属坏死环斑病毒(PNRSV)外壳蛋白(CP)基因保守序列,设计了1套特异性识别CP基因中6个不同区段的环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化,建立了适用于PNRSV的RT-LAMP检测技术,对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果... 针对李属坏死环斑病毒(PNRSV)外壳蛋白(CP)基因保守序列,设计了1套特异性识别CP基因中6个不同区段的环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化,建立了适用于PNRSV的RT-LAMP检测技术,对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果显示,此方法能够特异性的检测出PNRSV,对马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、黄瓜花叶病毒(CMV)、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)的检测均为阴性,灵敏度高于RT-PCR 10倍。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒(pnrsv) 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP) CP基因 检测
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李属坏死环斑病毒(PNRSV)新疆巴旦木分离物外壳蛋白基因(CP)片断的克隆与序列分析 被引量:3
5
作者 殷智婷 韩剑 +3 位作者 周国辉 张祥林 罗明 潘亚南 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期740-746,共7页
【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)R... 【目的】为了查明新疆巴旦木果树病原病毒的种类,为病毒的分子检测提供基础。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),从巴旦木果树叶片中检测到李属坏死环斑病毒(PNRSV)。以阳性样品的总RNA为模板进行PNRSV外壳蛋白基因(CP)RT-PCR扩增,对预期430 bp大小的4个扩增产物进行克隆、测序和序列分析。【结果】结果表明,PNRSV新疆巴旦木分离物CP基因的核苷酸和氨基酸序列与世界各地已报道的分离物具有较高的同源性,分别为80.0%~97.2%和80.1%~94.1%,其中与阿根廷分离物AY217的同源性最高;而与同属03亚组的苹果花叶病毒(ApMV)同源性较低,仅为52.9%~55.4%和45.6%~48.6%。新疆PNRSV各分离物之间CP基因高度同源。序列比对与系统发生树的分析显示,PNRSV新疆巴旦木分离物的株系属于GroupⅠ组。【结论】确定了PNRSV为侵染新疆巴旦木果树的病原病毒。这是PNRSV在新疆发现的首次报道。 展开更多
关键词 巴旦木 李属坏死环斑病毒(pnrsv) 双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS—ELISA) RT—PCR CP基因
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侵染百合的李属坏死环斑病毒病(PNRSV)的研究 被引量:4
6
作者 韩丽娟 刘文洪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1943-1951,共9页
【目的】在分子水平上鉴定百合上发生的李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)【方法】对待测百合种球随机抽样,在温室内种植并观察,长出叶片后,用RNA Extraction Kit(Sangon,China)从幼嫩的叶组织中提取核酸,将反转... 【目的】在分子水平上鉴定百合上发生的李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)【方法】对待测百合种球随机抽样,在温室内种植并观察,长出叶片后,用RNA Extraction Kit(Sangon,China)从幼嫩的叶组织中提取核酸,将反转录出的cDNA用PNRSV的特异性引物进行PCR扩增,电泳PCR产物得到了450bp的目的片段。低熔点胶回收并克隆至pGEM-T-easy载体测序后进行序列比对分析。【结果】从百合中所扩增的450bpcDNA的核苷酸序列与27个早期已报道的PNRSV分离物的CP基因的同源性为84.5%~99.1%。【结论】百合是PNRSV的一新寄主。 展开更多
关键词 百合 李属坏死环斑病毒 RT-PCR 检测
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李属坏死环斑病毒扬州分离物CP基因的原核表达及抗血清制备 被引量:1
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作者 王智磊 纪开燕 +5 位作者 赵景奎 丁诗文 徐小伟 秦朗 张坤 贺振 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期140-146,共7页
李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a... 李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-CP^(PNRSV),转化大肠埃希菌Rosetta菌株,IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳检测显示,在分子量约25 ku处有蛋白质条带,符合预期大小。镍柱亲和纯化PNRSV CP蛋白,以其纯化蛋白质免疫健康新西兰白兔,制备多克隆抗血清。Western blot、ELISA、Dot blot检测结果显示,制备的抗血清能检测到PNRSV CP基因在感病植物叶片中表达,而在健康植株中未检测到;制备的抗血清滴度稀释至1∶64000时,仍能与纯化蛋白质发生特异性反应。综上,制备的PNRSV抗血清特异性强、效价高,可用于PNRSV的快速检测。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 CP蛋白 原核表达 抗血清
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RT-PCR检测李坏死环斑病毒的研究 被引量:24
8
作者 孔宝华 陈海如 +3 位作者 常胜军 朱水芳 黄文胜 刘进元 《植物检疫》 北大核心 2000年第5期257-260,共4页
为了从植物组织中快速检测李坏死环斑病毒 (PNRSV) ,根据该病毒RNA 3序列设计引物 ,对感病和健康组织总RNA进行RT PCR ,结果从感病组织中扩增出了大约 45 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。将此PCR产物连接到 pGEM T easy载体 ,... 为了从植物组织中快速检测李坏死环斑病毒 (PNRSV) ,根据该病毒RNA 3序列设计引物 ,对感病和健康组织总RNA进行RT PCR ,结果从感病组织中扩增出了大约 45 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。将此PCR产物连接到 pGEM T easy载体 ,转化大肠杆菌DH5 5α菌株 ,得到了含有目的片段的重组子 ,并采用双脱氧终止法进行序列分析 ,结果与美国报道的李坏死环斑病毒RNA3序列对应部分核苷酸基本一致 (其同源性达 93.6 %) ,这表明应用RT PCR来检测李坏死环斑病毒是可行的 ;PCR产物克隆作为RT PCR反应的阳性对照解决了检疫对象不能扩散的问题 ,从而建立了RT 展开更多
关键词 李坏死环斑病毒 RT-PCR 品岸植物检疫
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浙江海宁月季上发现李属坏死环斑病毒 被引量:7
9
作者 朱良俊 商晗武 +1 位作者 郑丹 黄特跃 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期366-369,共4页
采用双夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),对杭州、嘉兴、绍兴3市6县(市、区)的果树园林植物进行李属坏死环斑病毒病的病情调查,采集检测样品包括樱桃、桃、李、杏和月季等12种寄主植物共计102个。结果表明,10个海宁月季样品的ELISA结果呈... 采用双夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA),对杭州、嘉兴、绍兴3市6县(市、区)的果树园林植物进行李属坏死环斑病毒病的病情调查,采集检测样品包括樱桃、桃、李、杏和月季等12种寄主植物共计102个。结果表明,10个海宁月季样品的ELISA结果呈阳性,其他样品呈阴性;阳性样品经RT-PCR检测和CP基因测序验证,确认海宁月季感染了李属坏死环斑病毒。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒病 双夹心酶联免疫吸附法 RT-PCR 疫情 CP基因
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中国苹果花叶病病原研究现状分析 被引量:7
10
作者 邢飞 王红清 李世访 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1953-1963,共11页
我国是世界上最大的苹果生产国,苹果花叶病是苹果栽培中最常见的病毒性病害,在我国各大苹果产区发生普遍。感病苹果叶片常表现花叶、坏死、沿脉形成不均匀分布的条纹等症状,栅栏组织细胞排列松散、叶绿体畸变、膜结构遭到破坏,最终影响... 我国是世界上最大的苹果生产国,苹果花叶病是苹果栽培中最常见的病毒性病害,在我国各大苹果产区发生普遍。感病苹果叶片常表现花叶、坏死、沿脉形成不均匀分布的条纹等症状,栅栏组织细胞排列松散、叶绿体畸变、膜结构遭到破坏,最终影响叶片光合能力和果实品质形成,严重威胁苹果产业的可持续健康发展。近年来的研究表明,从感花叶病苹果叶片中新鉴定的苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)与我国苹果表现花叶病的相关性较高,可能是引起我国苹果花叶病的主要病原。但也有研究指出,同属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus)的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)和李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)也被认为可能是引起我国苹果花叶病的重要病原。为此,笔者依据前人研究基础及本研究室前期研究结果,系统综述了ApNMV与我国苹果花叶病的关系及其研究进展,并分析了ApMV和PNRSV在我国表现苹果花叶病的苹果样品中的侵染状况,旨在进一步明确引起我国苹果花叶病的主要病原,为该病害的科学防控提供参考。 展开更多
关键词 苹果花叶病 苹果坏死花叶病毒 苹果花叶病毒 李属坏死环斑病毒
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侵染昆明玫瑰的李坏死环斑病毒的鉴定及其分子检测 被引量:2
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作者 李春艳 丁元明 +2 位作者 何月秋 赵明富 秦绍钊 《植物检疫》 2007年第3期142-145,共4页
采集昆明地区种植的花叶症状明显的玫瑰样品,运用现代分子生物学技术与常规技术相结合的方法,初步鉴定引起玫瑰花叶病的主要病毒病原为李坏死环斑病毒。该病毒引起玫瑰植株的系统花叶、畸形和皱缩等症状;电镜下病毒粒体为球形,直径为22... 采集昆明地区种植的花叶症状明显的玫瑰样品,运用现代分子生物学技术与常规技术相结合的方法,初步鉴定引起玫瑰花叶病的主要病毒病原为李坏死环斑病毒。该病毒引起玫瑰植株的系统花叶、畸形和皱缩等症状;电镜下病毒粒体为球形,直径为22~23nm;ELISA检测发现该病毒在植株芽、花粉和顶部叶片的浓度最高;同时,根据外壳蛋白的保守区利用Primer5.0设计该病毒的特异引物,对该病毒进行分子检测,得到450bp的预期DNA片断,并在此基础上,进行了巢式RT-PCR的分子检测,表明巢式RT-PCR的检测能力最强。并通过序列的同源性分析得知该病毒的外壳蛋白与已知PNRSV的同源性为98.0%,进一步证明了该病毒为李坏死环斑病毒。 展开更多
关键词 玫瑰 李坏死环斑病毒(pnrsv) 巢式RT-PCR
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用RT-PCR技术检测澳大利亚杏仁树李坏死环斑病毒 被引量:2
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作者 马万里 G.T.Mekuria +1 位作者 M.Wirthensohn G.Collins 《内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)》 CAS 2005年第2期197-199,共3页
用RT-PCR技术检测澳大利亚杏仁树李坏死坏斑病毒,对92个待测样品的病毒RNA进行扩增和检测,其中有79个呈阳性,表明检验样品的染病率较高.RT-PCR技术检测病毒的方法灵敏、准确,是检测苗木是否感染病毒的有效方法之一.
关键词 RT-PCR 技术检测 澳大利亚 李坏死环斑病毒 杏仁 检验样品 有效方法 RNA
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苹果花叶病病原鉴定中遇到的问题及其可能的病原探究 被引量:10
13
作者 梁鹏博 张志想 +3 位作者 刘斐 卢美光 李世访 王红清 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期332-339,共8页
【目的】探究苹果花叶病的病原。【方法】从北京、陕西(延安、渭南)、山东临沂共采集140份苹果叶片样品,其中表现花叶症状的111份,无症状的29份。选取一个带有苹果花叶病的样品和一个不带任何症状的样品进行s RNA(small RNA)高通量测序... 【目的】探究苹果花叶病的病原。【方法】从北京、陕西(延安、渭南)、山东临沂共采集140份苹果叶片样品,其中表现花叶症状的111份,无症状的29份。选取一个带有苹果花叶病的样品和一个不带任何症状的样品进行s RNA(small RNA)高通量测序分析。基于高通量测序分析和RT-PCR验证结果,对所有样品进行苹果花叶病毒、苹果茎沟病毒、苹果茎痘病毒、苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒5种病毒的RT-PCR检测。【结果】高通量测序分析、验证与田间调查均未发现苹果花叶病毒。其中高通量测序分析结果中:对带有花叶病样品所构建的s RNA文库中与李属坏死环斑病毒同源的s RNA份数(194份)多于健康样品文库中同源的s RNA的份数(4份)。田间调查结果显示:李属坏死环斑病毒在花叶病的样品中带毒率为90%,远高于不带症状样品的7%。【结论】因此,苹果花叶病毒可能不是引起苹果花叶病的唯一病毒病原,李属坏死环斑病毒可能会引起苹果花叶病。 展开更多
关键词 苹果花叶病 高通量测序 苹果花叶病毒 李属坏死环斑病毒
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李属坏死环斑病毒CP基因在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备 被引量:4
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作者 陈招荣 马云霞 +1 位作者 范在丰 李怀方 《植物检疫》 2006年第2期73-75,共3页
本实验用RT$CPCR的方法获得李属坏死环斑病毒的cp基因,并将其连接到表达载体pET-22b(+)上,得到重组质粒pETPNRSVCP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDSPAGE和Westernblot分析结果表明,cp基因在大肠杆菌中获得了高效表达,... 本实验用RT$CPCR的方法获得李属坏死环斑病毒的cp基因,并将其连接到表达载体pET-22b(+)上,得到重组质粒pETPNRSVCP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDSPAGE和Westernblot分析结果表明,cp基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子量约为29.0kDa。将该融合蛋白免疫兔子,获得PNRSV特异性抗血清。酶联法(ELISA)测定的效价为1/1024。为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清 ELISA
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西安地区樱桃李属坏死环斑病毒病鉴定和田间发生规律 被引量:6
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作者 张涛 吴云锋 +7 位作者 曹瑛 冯渊博 惠军涛 李钢 张良 郭鹏飞 李婷 张毅 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期319-323,共5页
通过实验室鉴定、田间定点监测和大田调查,发现樱桃李属坏死环斑病毒病可通过嫁接、汁液摩擦等途径传播,病毒形态为球形,大小30 nm,无包膜;在西安地区年发生消长历经始发期、快速增长期、稳定期、衰退期4个阶段,一年具有两个发病高峰,... 通过实验室鉴定、田间定点监测和大田调查,发现樱桃李属坏死环斑病毒病可通过嫁接、汁液摩擦等途径传播,病毒形态为球形,大小30 nm,无包膜;在西安地区年发生消长历经始发期、快速增长期、稳定期、衰退期4个阶段,一年具有两个发病高峰,相邻年份病害发生差异不大,但有一个缓慢增长的过程。川道、密度大、管理粗放有利于樱桃李属坏死环斑病毒病的发生,目前种植的大樱桃品种发病较重,当地小樱桃品种发病较轻。 展开更多
关键词 樱桃 李属坏死环斑病毒病 鉴定 发生规律
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樱桃李属坏死环斑病毒病PCR检测技术研究
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作者 杨桦 吴云锋 +5 位作者 严勇敢 付宏岐 杨铭 王雅丽 周靖华 杨少雄 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期9-11,共3页
通过用2种RNA提取方法提取甜樱桃植株样品总RNA,并对其进行电泳分析.结果表明,用方法A提取的RNA完整性比方法B较好,出现了较为典型的RNA带型.以方法A提取的甜樱桃总RNA为模板,用设计一对特异性引物进行RT-PCR反应,可见其DNA谱带与预期... 通过用2种RNA提取方法提取甜樱桃植株样品总RNA,并对其进行电泳分析.结果表明,用方法A提取的RNA完整性比方法B较好,出现了较为典型的RNA带型.以方法A提取的甜樱桃总RNA为模板,用设计一对特异性引物进行RT-PCR反应,可见其DNA谱带与预期的一对引物应扩增的片断吻合,说明PCR检测是特异的.通过30份样品经RT-PCR扩增有2份表现出清晰、明显的特异带,占总样品数的6.7%. 展开更多
关键词 樱桃 李属坏死环斑病毒病 PCR 检测技术
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3种核果类果树病毒多重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:1
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作者 赵世恒 王吉腾 +2 位作者 李雪娇 高润蕾 云晓鹏 《北方农业学报》 2018年第3期37-41,共5页
根据李痘病毒(PPV)、李坏死环斑病毒(PNRSV)和李矮缩病毒(PDV)3种检疫性病毒的外壳蛋白基因保守序列设计特异性引物,在建立各种病毒单个RT-PCR技术的基础上,通过优化多重RT-PCR反应条件,初步建立了同步检测这3种病毒的多重RT-PCR检测体... 根据李痘病毒(PPV)、李坏死环斑病毒(PNRSV)和李矮缩病毒(PDV)3种检疫性病毒的外壳蛋白基因保守序列设计特异性引物,在建立各种病毒单个RT-PCR技术的基础上,通过优化多重RT-PCR反应条件,初步建立了同步检测这3种病毒的多重RT-PCR检测体系。结果表明:3对引物特异性较强,分别可以扩增出172,675,945 bp的目的片段,该方法快速、灵敏、准确,为同时检测多种检疫性病毒提供了参考。 展开更多
关键词 病毒检测 李痘病毒 李坏死环斑病毒 李矮缩病毒 多重RT-PCR
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李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP基因的克隆、原核表达及其抗血清制备 被引量:1
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作者 李明福 陈洪俊 +3 位作者 陈定虎 邱德义 杨雷亮 赵世恒 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期29-33,共5页
本研究通过RT-PCR技术获得了包含李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP蛋白基因的DNA片段,构建了针对pET29a载体的两种表达质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达了带不同融合肽段的PNRSV1(25 ku)和PNRSV2(29 ku)融合蛋白。经过Ni-NTA... 本研究通过RT-PCR技术获得了包含李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP蛋白基因的DNA片段,构建了针对pET29a载体的两种表达质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达了带不同融合肽段的PNRSV1(25 ku)和PNRSV2(29 ku)融合蛋白。经过Ni-NTA亲和柱与SDS-PAGE分离纯化,获得大量表达融合蛋白,并免疫家兔制备了融合表达蛋白的特异性抗体。间接ELISA测定其效价分别为8×103和3.2×104。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 外壳蛋白 原核表达 蛋白纯化 抗体
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李坏死环斑病毒诱导的桃PpPDS沉默体系的优化及验证 被引量:1
19
作者 潘佳佳 张东梅 +4 位作者 孟建 高苏南 朱凯杰 刘军伟 李国怀 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1587-1600,共14页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是在桃(Prunus persica)上进行基因沉默的主要手段,现有VIGS体系效率较低,亟待开发针对桃的高效沉默体系。以桃八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因PpPDS为指示基因,探... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是在桃(Prunus persica)上进行基因沉默的主要手段,现有VIGS体系效率较低,亟待开发针对桃的高效沉默体系。以桃八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因PpPDS为指示基因,探究不同侵染方式、病毒载体、温度、接种苗龄和菌液浓度对桃叶片VIGS效率的影响。结果表明,在侵染方式上,叶片注射是有效的方式;李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)载体(pCaRNA1/2和pCaRNA3)优于烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)改造后的TRV载体(pTRV1和pTRV2);温度为22℃左右PpPDS的沉默效率较高;苗龄为5~6片完全展开叶的桃苗沉默效率较高,达到85%;菌液浓度为OD600=1.0时沉默效率较高。以优化好的VIGS体系参数,选择桃叶绿素合成基因(PpGluTR和PpPOR)为目标基因进行验证,结果显示PpGluTR和PpPOR的表达均被显著抑制,叶片颜色变化明显。这些结果表明优化的VIGS体系稳定性好且沉默效率高,可用于桃基因功能的研究。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 李坏死环斑病毒 八氢番茄红素脱氢酶 叶绿素合成基因
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四个李属坏死环斑病毒分离物的检测鉴定及CP基因序列分析 被引量:3
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作者 朱良俊 商晗武 +1 位作者 姜永厚 周京花 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期403-409,共7页
采用RT-PCR方法,从北京昌平、云南昆明、陕西西安和浙江海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到李属坏死环斑病毒,为分析我国李属坏死环斑病毒分子生态学特性,克隆了病毒分离物的CP基因并进行序列分析。结果显示,北京分离物的CP基因长675nt... 采用RT-PCR方法,从北京昌平、云南昆明、陕西西安和浙江海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到李属坏死环斑病毒,为分析我国李属坏死环斑病毒分子生态学特性,克隆了病毒分离物的CP基因并进行序列分析。结果显示,北京分离物的CP基因长675nt、编码224aa,而西安、昆明和海宁分离物的CP基因均为681nt、编码226aa。序列相似性分析表明,4个分离物的CP基因之间具有很高的同源性,各个分离物间的核苷酸同源性在94.8%~99.3%之间,氨基酸同源性在94.2%~98.7%之间。序列比对与系统发生树的分析结果显示,北京分离物属于GroupⅡ组,昆明、西安和海宁分离物属于GroupⅠ组。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒(pnrsv) RT—PCR 外壳蛋白(CP)基因 系统发生树分析
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