中国樱桃(Prunus pseudocerasus Lindl.)IRAP分子标记技术体系的建立

基于中国樱桃LTR类反转录转座子的反转录酶(RT)序列信息设计引物,并根据扩增谱带的数量、多态性和可重复性等指标筛选IRAP-PCR引物;采用5因素4水平L 16(45)的完全随机正交试验,对影响PCR体系的主要因子进行优化,建立了中国樱桃IRAP分子标记反应体系。结果表明,筛选出9条引物,可以扩增222个清晰位点,位点的平均多态性比率为90.09%。PCR的最佳反应体系为25μL,含2.0 mmol·L^-1 MgCl 2、1.0 U Taq酶、0.2 mmol·L^-1引物、20 ng模板DNA、0.3 mmol·L^-1 dNTP,采用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

‘红粉佳人’樱花对高温胁迫的生理响应

通过设置25℃、30℃、35℃、40℃、45℃等5个温度水平,每个温度水平分别胁迫处理2 h、4 h、6 h和8 h,测定温度胁迫下‘红粉佳人’樱花Prunus pseudocerasus×incisa叶片生理生化指标变化,探讨其在不同温度胁迫下的生理响应。结果表明,随着胁迫温度的升高,叶绿素、可溶性糖含量先下降后升高,超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)与可溶性蛋白含量呈先升后降趋势,过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性呈上升趋势。同一温度水平随着胁迫时间的延长,除CAT外其他指标均呈现显著差异。通过对生理指标进行主成分分析,表明POD活性、SOD活性及叶绿素、可溶性蛋白、可溶性糖含量是响应高温胁迫的主导指标。

黄樱桃复合低糖果酱的研制及其安全保健功能评价

【目的】以陇南产黄樱桃为材料复配油橄榄果粉、金针菇粉和纹党多糖等保健成分,添加木糖醇、柠檬酸、氯化钙和D-异抗坏血酸钠等食品添加剂研制低糖果酱,并进行安全和保健功能评价。【方法】根据感官评分,对油橄榄果粉、金针菇粉和纹党多糖添加量进行优化筛选,采用响应面设计试验,优化工艺和配方研制樱桃果酱,依据国家标准对果酱进行理化指标和微生物指标检验,开展安全评价,并考查了不同浓度的黄樱桃果酱对果蝇生育力和寿命的影响。【结果】用16%的油橄榄果粉、0.18%的金针菇粉和0.25%的纹党多糖用量的优化工艺配方所研制的低糖果酱呈鲜黄色,酱体状态均匀,具有黄樱桃和油橄榄的特殊果香,可溶性固形物含量59.39%、pH为4.21、总糖为28.99%、黏度为28.29cm/30s,检测的重金属含量和致病菌均低于国家安全标准,还能显著提高果蝇世代生育力,延长了寿命。【结论】研制的黄樱桃-油橄榄果粉-金针菇粉复合低糖果酱颜色鲜亮、组织状态良好,果香浓郁,具有很好的营养价值和保健功能,卫生指标符合国家标准。

生物炭对玛瑙红樱桃生长、果实品质及土壤矿质元素的影响

通过田间试验,研究不同施用量的生物炭对玛瑙红樱桃生长、果实品质及土壤矿质元素含量的影响。结果表明,施用生物炭可提高玛瑙红樱桃的生长量和果实品质。当施用量为1株5 kg时,植株干径生长量和冠幅生长量均达到最大,与对照相比,分别提高了37.5%和36.9%。当施用量为1株10 kg时,果实可溶性糖含量、可溶性固形物含量和维生素C含量均达到最大,与对照相比,分别提高了21.6%、25.8%和32.0%。施用生物炭显著提高了土壤交换性钙和交换性镁含量,但对有效铁含量、有效铜含量、有效锌含量和有效锰含量的影响因施用量不同而异。

玛瑙红樱桃离体快繁及组培苗的变异检测

以贵州玛瑙红樱桃的休眠芽为外植体,通过不同激素质量浓度组合的正交试验,建立了高效的离体培养体系;利用ISSR分子标记,对组培苗的遗传变异进行检测,结果表明:在引物检测范围内,玛瑙红樱桃离体快繁至第8代仍然能保持其遗传稳定性;DNA甲基化的MASP分析表明,组培苗的甲基化敏感多态性随继代次数的增加而逐步升高,第5代组培苗总甲基化率最高,为21.4%,全甲基化率为12.4%,半甲基化率为9.0%.

生物炭对玛瑙红樱桃土壤微生物和养分的影响

以贵州省主栽樱桃品种玛瑙红为试材,探讨生物炭对土壤微生物和养分的影响,旨在为玛瑙红樱桃的丰产优质栽培及生物炭在果树上的应用提供理论依据。试验设置0(CK)、5(C1)和10(C2)kg/株3个生物炭施用量,结果显示:在始花期,C1处理显著提高细菌、反硝化细菌数量,C2处理显著提高好氧固氮菌数量;在盛花期,生物炭的添加显著提高了土壤微生物多样性和反硝化细菌数量;在结果期,C2处理显著提高真菌数量;添加生物炭处理提高了土壤pH值和有机质含量,但对土壤养分的影响因物候期而异。结果表明,生物炭的添加能提高玛瑙红樱桃土壤微生物量、微生物多样性、土壤养分,但提高效果与植物所处生长状态有关。

中国樱桃半野生种对樱的茎尖培养

以中国樱桃半野生种对樱茎尖为外植体进行试管繁殖 ,最佳灭菌方法为二次灭菌 (70 %乙醇30s→ 0 1%新洁尔灭 15min→ 0 1%升汞 3min)结合培养基添加抗生素羧苄西林二钠 5 0mg/L。最佳培养条件 :(1)初代培养基为F14+6 BA 0 5mg/L +IBA 0 2mg/L +GA3 0 5mg/L ;(2 )继代培养基为F14+6 BA0 5mg/L +IAA 1 0mg/L +GA3 0 5mg/L ,碳源采用白砂糖 2 0g/L +山梨糖醇 5g/L。同时研究表明 ,外植体种类、茎尖大小及抗氧化剂维生素C均影响茎尖初代培养成活率。

樱桃叶多糖的抗氧化活性研究

目的评价樱桃叶多糖(PPP)的体外抗氧化活性。方法以抗坏血酸(Vc)作为对照,体外实验研究PPP的总还原能力及其对羟自由基、超氧负离子自由基和有机自由基(DPPH)的清除作用以及对大鼠肝脏自发性和H2O2诱导的丙二醛抑制率。结果 PPP对羟自由基、超氧负离子自由基、有机自由基的IC50依次为100.5,991.4和135.1μg/mL;对大鼠肝脏自发性和由H2O2诱导的产生的脂质过氧化均有较好的保护作用。结论 PPP有着较强的体外抗氧化活性,和同等浓度下的Vc相比,其抗氧化能力效果稍弱,具有一定的开发价值。

高效液相色谱-串联质谱联用技术鉴定樱桃叶中的黄酮成分

采用高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS-MS)技术对樱桃叶中黄酮成分进行分离鉴别,流动相为0.1%甲酸溶液-甲醇溶液,梯度洗脱,在ESI负离子模式下采集数据,结合标准品对比,根据相对分子质量、质谱碎片等信息,从樱桃叶中鉴定出9种酚类成分,利用外标法及内标法对其进行定量,分别为:木犀草苷(14.42mg/g)、牡荆素(24.67mg/g)、芦丁(54.66mg/g)、金丝桃苷(56.74mg/g)、紫云英苷(44.20mg/g)、绿原酸(28.12mg/g)、奎宁酸(10.12mg/g)、槲皮素-3-芸香糖葡萄糖苷(20.15mg/g)、山奈酚-3-O-芸香糖苷(86.57mg/g)。建立的HPLC-MS-MS法快速有效可以用于鉴定樱桃叶中的化学成分。

温度对中国樱桃花芽萌发的影响

[目的]研究温度对中国樱桃(Prunus pseudocerasus)花芽萌发的影响。[方法]在相同夜温条件下,通过设置6个不同的昼温度处理,研究了不同温度对中国樱桃花芽萌发过程中花器官发育的影响。[结果]温度对樱桃花芽萌发的形态和生理有显著影响。温度越高,花芽发育越快,开花越早。在35/10℃处理条件下,绝大多数花芽到达花序可见期便停止生长,不能正常开花而脱落;30/10℃处理极显著抑制了花冠、雄蕊及雌蕊的发育,花药不能正常开裂散粉。在进行温度处理前,花药已发育到小孢子母细胞阶段。昼温30℃以上处理15 d,小孢子母细胞不能进行正常减数分裂而导致雄性败育;25/10℃处理能进行减数分裂,形成四分体,但形成的花粉粒部分败育。35/10、30/10、25/10℃处理下,MDA含量均是在花序可见期后开始升高;20/10、15/10、10/10℃3个处理相对稳定,表明昼温高于25℃造成了膜脂过氧化伤害。[结论]该研究为科学制定设施栽培中花期温度管理提供了依据。

樱桃叶黄酮的微波提取及抗氧化性质的研究

考察了影响微波辅助提取樱桃叶黄酮的主要因素,测定了樱桃叶黄酮的总抗氧化能力、清除超氧阴离子自由基能力、清除羟自由基(.OH)能力、清除DPPH自由基能力和对卵黄脂蛋白过氧化的抑制能力。通过与常见的抗氧化剂维生素C进行比较,对樱桃叶黄酮抗氧化和清除游离基活性进行了评价。结果表明,微波辅助提取樱桃叶总黄酮的最佳工艺为:微波时间5min、功率300W、75%乙醇、料液比1∶25(g/mL)和提取温度80℃。樱桃叶黄酮具有良好的抗氧化效果,在一定浓度范围内,樱桃叶黄酮在清除.OH和对卵黄脂蛋白脂质抗氧化的能力优于维生素C,但清除超氧阴离子自由基、清除DPPH自由基和总体抗氧化能力略逊于维生素C。

草原樱桃和对樱杂交后代的分子鉴定

草原樱桃具有较强的抗寒、抗旱、抗病虫害性,而对樱是北京当地的中国樱桃品种。为了培育出适合北京及华北地区的抗逆性强的砧木,分别在2005年和2006年将草原樱桃和对樱杂交,共得到17个杂交后代。现采用SRAP技术验证了草原樱桃和对樱的17个杂交后代的杂种真实性。聚类分析结果表明:17个杂交后代的遗传基础更多的来自于草原樱桃。

4种贵州樱桃的高效离体再生

通过探讨植物生长调节剂对试管苗增殖、壮苗及生根的影响,建立了4种贵州樱桃的离体繁殖技术.结果表明:供试材料以MS+1.5-2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IBA增殖效果良好,添加1.0mg/L GA能明显促进增殖;添加0.5mg/L GA利于壮苗;NAA最适合供试材料组培苗生根,沿河樱桃和凯里樱桃生根培养基为1/2MS+1.0mg/L NAA,赫章樱桃和红水樱桃为1/2 MS+1.0mg/L NAA+0.5mg/L GA.

樱桃叶多糖的提取、鉴别及定量测定

[目的]提取樱桃叶多糖,并对其进行定性鉴别和含量测定。[方法]先将樱桃叶经石油醚和乙醇脱脂、脱杂后,再采用水提醇沉法提取樱桃叶粗多糖(PPP),然后以Sevag法除去粗多糖中的蛋白,并用Molish试验(α-萘酚试验)、葸酮-硫酸法试验、Fehling试验与红外光谱分析、淀粉的碘试验对其进行定性鉴定;以硫酸-蒽酮法测定樱桃叶多糖的含量。[结果]经过鉴别可知,所提灰白色物质为多糖;经测定,其含量为29.7 mg/g。[结论]该方法简单,灵敏度高,重现性好,结果准确。

瓜尔胶与中草药纹党可食用复合膜对大樱桃常温贮藏的效果

以瓜尔胶和中草药纹党为涂膜基质,以CaCl2、甘油和柠檬酸为成膜助剂,配制成可食用复合涂膜,研究常温（25-28℃）,相对湿度（65%-75%）下该复合膜对大樱桃品质及其生理生化变化的影响。结果表明：常温下经2种复合膜保鲜的大樱桃与对照组相比,果实裂果率、霉烂率、失重率明显降低,抑制果实的呼吸;有机酸、维生素C等营养成分转化、流失的速度减慢,有效的降低MDA、花青素和相对电导率的升高;使SOD、PPO、POD和PAL酶活性处于较低的水平,延缓果实的衰老,从而延长货架期。综合考虑,添加纹党成分复合膜的效果最优。

樱桃果实贮藏研究

对樱桃(Prunus pseudocerasus)果实贮藏处理表明,简易自发气调(MA)冷藏35天,好果率为74.27%～94.61%,且无霉烂、褐变、软化和保持果实新鲜度。其最佳贮藏期为28天.其中,SP 膜剂+薄膜包装处理效果最佳。此外,还对樱桃贮藏期间营养成分的变化和 POD、CAT、电导率等生理指标作了相关性测定.

不同光质对中国樱桃叶片离体再生的影响

以中国樱桃(Prunus pseudocerasus Lindl.)组培苗为试验材料,采用新型照明光源—T5(28 W蓝光和红光)处理,日光灯为对照,对中国樱桃叶片再生的形态指标、叶绿素含量、POD活性、MDA含量、可溶性蛋白含量进行测定,分析新型照明光源(蓝光、红光、蓝光∶红光=1∶2)对中国樱桃叶片再生各项指标的影响。结果表明,新型照明光源处理的组培苗各项形态指标与日光灯光照处理具有明显差异,叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量、类胡萝卜素含量、可溶性蛋白含量均高于对照组。POD活性、MDA含量与日光灯光照处理差别不大。新型照明光源对中国樱桃叶片再生具有一定的有利影响,值得推广应用。

利用多聚半乳糖醛酸酶反义基因转化选育耐贮中国樱桃

目的:利用多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因转化选育耐贮中国樱桃。方法:以2个中国樱桃品种为实验材料,研究了激素浓度、叶片生理状态、光照条件等因素对叶片再生的影响,建立了中国樱桃叶片培养高频再生体系。以继代生长40d左右的组培苗顶部充分展开的叶片为外植体,整片放在含6-BA1.5mg/L、IBA0.5mg/L、KT0.5mg/L和腺嘌呤30mg/L的MS分化培养基上,在适宜的光照和处理条件下,芽分化率高达80%以上。以上述叶片为受体,用含有PG反义基因的农杆菌进行侵染。结果:经PCR和PCR-Southern检测证明PG反义基因已整合进樱桃核基因组中。结论:以培养的叶片为受体,用农杆菌介导法进行转基因在中国樱桃上是可行的。

中国樱桃品种“对樱”再生体系的优化和转基因初探

优化了中国樱桃品种“对樱”不定根离体再生体系,用农杆菌介导法,将抗菌肽B基因导入“对樱”,通过抗性筛选获得了44株抗性转化植株。PCR检测有9株为阳性,初步说明抗菌肽基因已整合到“对樱”基因组中。

中国樱桃授粉结实和果实发育的研究

中国樱桃短柄和尖嘴品种在日平均气温4～5℃花芽开始萌动,12℃左右开花,14℃左右盛开。在10～25℃范围内花粉发芽率随气温上升而增高。在15℃条件下花粉经过4～8h开始发芽。短柄樱桃花粉发芽适应的气温范围广,低温下发芽率高于尖嘴樱桃。雌蕊授粉结实能力一般持续4～5 d,阴雨潮湿天气相应延长。以开花后1 d授粉的座果率为最高,第6 d明显下降。开花后4 d内平均气温和座果率呈直线回归,达到显著水平。以自然传粉的授粉方式,座果率为最高,同品种不同单株授粉座果率低,但高于自花授粉。樱桃有3次落果高峰,采前落果严重。果实生长期从盛花至果熟约47～55d.果实鲜重增长最快时间在采前10～15d.果肉干重在采前15d达到高峰。果实纵横径增长均表现为迅速生长。