油果实中查尔酮合成酶基因PsCHS的克隆表达分析及其启动子的分离

从成熟果实均一化全长cDNA文库中分离了编码CHS基因的全长cDNA序列,命名为PsCHS,根据其序列设计引物,采用Genome Walking方法从基因组DNA中分离获得PsCHS基因上游的调控序列,命名为PsCHSp,PsCHS基因全长1 442bp,其中ORF 1 176bp,编码392个氨基酸;采用APA-Walking技术,获得该基因的5ˊ端调控区,经在线软件预测,启动子序列含有典型的结构特征元件TATA-box和CAAT-box,还包含光响应元件、厌氧诱导元件、胚乳表达相关元件、MYB结合位点以及激素响应元件;RT-PCR结果显示,PsCHS基因在果实发育的前期表达量较高,花后40d表达量最高,随后开始下降,果实成熟期表达量较低。分离获得的PsCHS基因属于查尔酮合成酶基因家族成员之一,查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS,EC 2.3.1.74)是类黄酮合成途径中的一个重要酶,该基因可能对类黄酮的合成起到调控作用。

油初始坐果机制研究

以成年油木奈树为材料,对其初始坐果进行了研究。结果表明,盛花后2周内,油木奈出现大量的落花落果;幼果(子房)低水平的GA1+3与油木奈的落花落果高峰关系密切,而内源细胞分裂素ZRs和[diH]ZRs以及ABA与幼果(子房)的生长呈显著的正相关;初始坐果期,油木奈的雌配子体发育缓慢,且有相当数量的胚囊中途退化、败育,无法正常受精,从而导致其大量的落花落果。文中就油木奈的初始坐果机制进行了讨论。

WRKY同源基因的分离与表达分析

以(Prunus salicina Lindli.var cordataJ.Y.Zhang et al.)为试验材料,采用稀释池PCR法,筛选叶片全长均一化cDNA文库,获得了WRKY同源基因的12个全长cDNA分别命名为PsWRKY7、PsWRKY14、PsWRKY20、PsWRKY21、PsWRKY22、PsWRKY29、PsWRKY31、PsWRKY32、PsWRKY33、PsWRKY40、PsWRKY46和PsWRKY75,长度分别为1 517、1 798、2 098、1 177、1 242、1 396、2 135、1 760、2 113、1 047、1 258和700bp,ORF长度分别为1 095、1 572、1 764、1 068、1 071、1 002、1 944、1 602、1 770、963、1 077和672bp,分别编码364、523、587、355、357、333、647、533、589、320、358、223个氨基酸。荧光定量结果显示,12个WRKY同源基因在1.0mmol/L水杨酸处理后,所获得的PsWRKY表达量均显著上调,表明WRKY基因可能是水杨酸诱导防御反应的重要调控因子。

李花粉生活力试验

采用发芽法和３ 种不同的染色法对木奈李、普通李和普通桃的花粉生活力进行了测定，同时对花粉生活力测定时的培养条件和测定方法进行了研究比较。结果表明品种类型、 Ｇ Ａ 浓度等试验因素、花粉生活力测定的方法等都会对花粉生活力的高低产生显著的影响。

李细菌性黑斑病病菌侵染过程研究

为培育和筛选李抗病品种提供理论依据 ,对李细菌性黑斑病病菌侵染李的过程和组织病理解剖进行了研究 .结果表明 :病原细菌从伤口、气孔和皮孔侵入李果实、叶片和枝梢 ;病斑深达中果皮数层细胞 ,自果皮向果心可分为 3层 ,第 2层被大量细菌定殖 ,第 3层下缘呈扩散状 ,接近内果皮 ;电镜观察表明病原细菌定殖于细胞间隙 ,使细胞膜和细胞壁离解 ,叶绿体受损 .

捺细菌性根癌病菌生物型鉴定及生物防治

从福建的古田、沙县和长汀等地采集到的捺细菌性根癌病标样上分离到１２株能致癌的菌株，经细菌学鉴定后认为属根癌土壤杆菌生物型Ⅱ，其中有１０株菌株对土壤杆菌素８４（ａｇｒｏｃｉｎ８４）敏感．用Ｋ８４菌液浸捺砧木的根部３０ｍｉｎ后种植在用分离到的致癌病菌接种过的土壤中，株发病率为２．９６％；用清水处理的砧木种植在用致癌病菌接种过的土壤中和不接种的土壤中，株发病率分别为１９．８９％和３．８２％。

叶片乙醇酸氧化酶基因全长cDNA的分离与表达研究

乙醇酸氧化酶(glycolate oxidase,GLO)是植物光呼吸途径中的一种限速酶,催化羟乙酸盐氧化成乙醛酸盐和H2O2,与植物的诱导抗病性密切相关。试验从已构建好的(Prunus salicina Lindl.var.cordata J.Y.Zhang et al.)5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库中分离得到了一个乙醇酸氧化酶(GLO)基因,命名为PsGLO。序列分析表明,PsGLO基因cDNA全长为1 531 bp,开放阅读框为1 122 bp,编码374个氨基酸。氨基酸多重序列比对表明,该基因与陆地棉乙醇酸氧化酶基因相似性最高,为90%。荧光定量PCR分析表明,PsGLO基因在叶中木奈叶芽、展开叶、幼叶、成熟叶、老叶5个不同生长发育时期中都有表达,其中,老叶中表达量最高,叶芽最低。

叶片中烯脂酰-CoA还原酶基因PsECR的筛选及其启动子的克隆表达分析

【目的】探讨ECR基因在调控蜡质形成过程中分子机制及其启动子的克隆和功能,为其抗病机理研究和基因表达调控模式研究奠定基础。【方法】从已构建好的5个不同生长发育时期叶片的均一化全长cDNA文库中分离得到了一个烯脂酰-CoA还原酶(ECR)基因,命名为PsECR,然后,根据其序列设计引物,采用Genome Walking方法从基因组DNA中分离获得PsECR基因上游的启动子序列,命名为PsECRp。【结果】PsECR序列分析结果表明,该基因的cDNA全长为1 717 bp,5′非翻译区长447 bp,3’非翻译区长337 bp,开放阅读框(ORF)为933 bp,编码311个氨基酸。通过蛋白质序列对比发现PsECR与蔷薇科植物苹果的ECR蛋白质同源性达到93%,荧光定量PCR分析表明,PsECR在幼叶、老叶中的表达量相对其他3个时期明显最低,而叶芽、展开叶、成熟叶中表达量处于同一水平。将得到的PsECRp序列用在线软件plantcare和plant分析表明,该序列除含有启动基本元件,如TATA-Box、CAATBox外,还含有2个防御相关元件(MYB1LEPR)、2个抗病响应元件(BIHD10S)、1个病原菌应答元件(W-Box)、1个真菌诱导反应元件(Box-w1)、2个茉莉酸甲酯响应元件(CGTCA-motif)、1个响应逆境胁迫富TC的重复序列(TCrich repeats)等响应元件。【结论】筛选得到了PsECR基因全长序列,对该基因在叶片的不同生长发育过程中的动态表达分析显示,PsECR基因可能参与叶片蜡质合成的调控。由获得的PsECRp启动子的序列分析表明,可以推测ECR在植物应答抵抗病原菌和逆境胁迫方面起着非常重要的作用。

湖南永州奈李果实一种新病害的病原鉴定

【目的】明确危害湖南永州奈李果实新发生病害的病原物种类，为更好地识别并防控该病害提供理论依据。【方法】用常规分离方法对湖南永州奈李果园发病样品进行病原菌分离，通过形态学特征观察，ITS、TUB、CAL和ACT序列和系统发育进化树分析及致病性测定，对分离获得的病原菌进行鉴定。【结果】分离获得的病原菌形态学特征与大豆拟茎点霉（Phomopsislongicolla）一致；其ITS、TUB、CAL、ACT序列与P．10ngicolla同源性分别为98％、99％、99％和98％。室内人工接种病原菌3～5d后果实形成椭圆形至不规则形褐色病斑、后转腐烂等症状，与田间果实危害症状一致。【结论】初步确定危害湖南永州奈李果实的病原菌为PlongicollaYZ。

壳寡糖处理对采后油彽果实活性氧代谢的影响

研究分子量为3 000 Da、浓度为10 g/L的壳寡糖处理对采后油彽果实活性氧代谢的影响。结果表明,壳寡糖处理延缓了油彽果实贮藏期间O_2^-·生成速率、MDA含量和细胞膜透性的上升,此外,经壳寡糖处理的果实超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)等活性氧清除酶活性以及还原型抗坏血酸(As A)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著高于对照果实。据此认为,壳寡糖处理增强了采后油彽果实的活性氧清除能力、减轻了活性氧伤害,从而延缓了果实的衰老。