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低氧诱导启动子PsADH2在毕赤酵母中的调控特性 被引量:2
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作者 乔雪锋 陆俊杰 +2 位作者 肖慈英 储炬 钱江潮 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期559-564,577,共7页
树干毕赤酵母(Pichia stipitis)乙醇脱氢酶Ⅱ(Alcohol dehydrogenaseⅡ)基因PsADH2的启动子是低氧诱导型启动子。利用透明颤藻血红蛋白(VHb)基因vgb、绿色荧光蛋白(GFP)基因gfp和β-半乳糖苷酶(Gal)基因lacZ作为报告基因,从转录和蛋白... 树干毕赤酵母(Pichia stipitis)乙醇脱氢酶Ⅱ(Alcohol dehydrogenaseⅡ)基因PsADH2的启动子是低氧诱导型启动子。利用透明颤藻血红蛋白(VHb)基因vgb、绿色荧光蛋白(GFP)基因gfp和β-半乳糖苷酶(Gal)基因lacZ作为报告基因,从转录和蛋白水平初步探讨了PsADH2启动子在毕赤酵母中的调控特性。结果表明:3个报告基因在PsADH2启动子的调控下,转录和蛋白水平均随溶氧的降低而升高,报告基因的表达对菌体生长无影响,这为构建新的诱导表达系统提供了有益的数据。 展开更多
关键词 psadh2启动子 低氧诱导 透明颤藻血红蛋白 毕赤酵母
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利用透明颤菌血红蛋白在低氧条件下提高毕赤酵母中植酸酶的表达 被引量:2
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作者 唐辉桂 黄火清 +3 位作者 罗会颖 王亚茹 杨培龙 姚斌 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第3期84-89,共6页
为了提高毕赤酵母(Pichia pastoris)中重组植酸酶的表达,在来源于Pichia stipitis的低氧诱导启动子PsADH2控制下,进行了透明颤菌血红蛋白基因vgb在重组P.pastoris中与植酸酶的共表达研究。结果表明,PsADH2启动子在低氧条件下被诱导启动... 为了提高毕赤酵母(Pichia pastoris)中重组植酸酶的表达,在来源于Pichia stipitis的低氧诱导启动子PsADH2控制下,进行了透明颤菌血红蛋白基因vgb在重组P.pastoris中与植酸酶的共表达研究。结果表明,PsADH2启动子在低氧条件下被诱导启动,表达的血红蛋白VHb对P.pastoris宿主细胞生长无明显影响,但使重组P.pastoris中共表达的植酸酶APPA活性提高了3倍。 展开更多
关键词 psadh2启动子 透明颤菌血红蛋白VHb 低氧诱导 植酸酶 毕赤酵母
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pGL3-BMP2荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定
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作者 钟良英 丁红珂 +3 位作者 刘敏 黄彬 何小洪 陈培松 《中国优生与遗传杂志》 2013年第9期15-17,28,F0002,共5页
目的扩增BMP2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统。方法在所设计的上下游引物的5’端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DN... 目的扩增BMP2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统。方法在所设计的上下游引物的5’端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DNA中扩增BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列。首先将扩增的目标片段与PGEM-T载体连接,连接产物转化DH5α感受态细菌,经蓝白斑筛选出的阳性克隆通过电泳、酶切鉴定后进行测序验证是否为插入的目标序列,测序正确后提取重组质粒。利用限制性内切酶BamHⅠ同时酶切插入目标序列的质粒和pGL3-promoter载体,将酶切完全的目标序列与线性pGL3-promoter空质粒载体在Solution I快速连接酶的作用下进行连接反应,构建目标序列的真核表达载体。结果经过酶切和测序证实含有4.8kb长的目标序列的分子克隆和真核表达载体构建成功。结论实验成功克隆了BMP2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列,并构建了pGL3-promoter-enhancer真核表达载体,为进一步验证该序列可能的调控功能奠定了基础。 展开更多
关键词 BMP2基因 非编码区域 长片段分子克隆 pGL3-promoter载体
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Electrosynthesis of Arylsulfonamides from Amines and Sodium Sulfinates Using H2O-Nal as the Electrolyte Solution at Room Temperature
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作者 Chen Zhang Yibin Chen Gaoqing Yuan 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2016年第12期1277-1282,共6页
With H2O as the solvent and NaI as the supporting electrolyte, a green and efficient electrochemical route has been developed to synthesize arylsulfonamides via I2 electrogenerated in situ at a graphite anode to promo... With H2O as the solvent and NaI as the supporting electrolyte, a green and efficient electrochemical route has been developed to synthesize arylsulfonamides via I2 electrogenerated in situ at a graphite anode to promote the reaction of sodium sulfinates with aromatic or aliphatic primary and secondary amines. The target products could be obtained in good to excellent yields at room temperature. 展开更多
关键词 sulfonamindes I2-promoted sodium sulfinates ELECTROSYNTHESIS
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毕赤酵母中表达透明颤菌血红蛋白提高重组脂肪酶的表达 被引量:7
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作者 汪小锋 孙永川 +4 位作者 申旭光 柯锋 徐莉 刘云 闫云君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1755-1764,共10页
解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2(YlLip2)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了改善高密度发酵生产YlLip2过程中的溶氧限制,提高YlLip2的表达量,将YlLip2基因lip2和透明颤菌血红蛋白(VHb)基因vgb分别置于AOX1启动子和PsADH2启动子的调控之... 解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2(YlLip2)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了改善高密度发酵生产YlLip2过程中的溶氧限制,提高YlLip2的表达量,将YlLip2基因lip2和透明颤菌血红蛋白(VHb)基因vgb分别置于AOX1启动子和PsADH2启动子的调控之下,进行YlLip2和VHb在毕赤酵母中的共表达。PsADH2启动子来源于树干毕赤酵母Pichia stipitis,在低氧条件下能被激活。SDS-PAGE和CO-差式光谱分析表明,YlLip2和VHb在重组菌中成功实现了共表达。在氧限制性条件下,VHb表达的细胞(VHb+,GS115/9Klip2-pZPVT)与对照细胞(VHb?,GS115/9Klip2)相比,摇瓶和10 L发酵罐中YlLip2表达量分别提高了25%和83%。此外,在低氧条件下,VHb+细胞在10 L发酵罐中的生物量也比VHb?细胞高。文中也获得了一株表达了VHb的并携带有多个lip2基因拷贝的克隆子GS115/9Klip2-pZPVTlip2 49#,在低氧条件下,该克隆子在10 L发酵罐中的最高脂肪酶水解活力达33 900 U/mL。因此,在毕赤酵母中用PsADH2启动子表达VHb,同时增加lip2基因的拷贝数是提高YlLip2表达量的一种有效策略。 展开更多
关键词 脂肪酶 透明颤菌血红蛋白 psadh2启动子 解脂耶氏酵母 毕赤酵母 表达
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