云南白药水提取物抑制铜绿假单胞菌AlgR2-AlgR1双组份调控系统磷酸化研究

目的:研究亚致死剂量的云南白药水提取物(Aquatic Extract of Yunnan Baiyao,AEYB)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa,PA)AlgR1-AlgR2双组份调控系统的磷酸化、海藻酸盐的生物合成及生物膜形成的影响。方法:通过放射性同位素标记方法研究AEYB对AlgR1-AlgR2磷酸化的影响;采用real-time PCR分析YBX海藻酸盐合成酶基因algD转录的影响;用咔唑法和结晶紫法分别对海藻酸盐和静态生物膜进行定量测定。结果:AEYB并不抑制AlgR2的自磷酸化,但能抑制AlgR2的磷酸基团向AlgR1转移,从而抑制AlgR1的磷酸化。AEYB可显著下调algD基因的转录,并抑制alginate的合成,最终减少PA静态生物膜的形成。结论:云南白药可通过抑制AlgR1-AlgR2系统的磷酸化的途径来减少PA的alginate的生物合成,对PA生物膜的形成具有抑制作用。

铜绿假单胞菌生物膜分散的研究近况

细菌分泌胞外多糖附着在物体表面组成一个结构性群体即生物膜,导致对抗生素的强抵抗性和感染的迁延不愈。反过来,已形成的生物膜也可以分散为游离菌,许多环境物质能够促进该分散过程,并且这些物质与抗生素合用对生物膜有强大的对抗作用。从生物膜到浮游菌是个复杂的过程,目前关于铜绿假单胞菌生物膜分散的特征、机制、诱导分子等已经引起了学者的强烈兴趣,随着问题的深入研究必然会给人类治疗生物膜所致的难治性感染带来更大的意义。

野生型铜绿假单胞菌PAO1和粘液型铜绿假单胞菌PA17播种型扩散的研究

目的:探讨PA17和PAO1生物膜形成过程中播种型扩散发生的相关机制。方法:SYTO9/PI双染色后,在激光共聚焦显微镜下观察1、3、5、7、9、11d时PAO1及PA17生物膜形成的情况,real-time RT-PCR检测不同时间点PAO1及PA17的algR的表达。结果:PAO1 3d时形成生物膜,但PA17此时尚未形成生物膜。PAO1在第11天出现播种型扩散,PA17于7d时出现播种型扩散的现象。浮游状态下PA17的algR基因表达高于PAO1,随后两株菌的algR基因表达量逐渐降低,5d时出现升高,PA17 7d时表达量最高,PAO1于11d时algR表达量最高。结论:PAO1的播种型扩散晚于PA17,AlgR与播种型扩散的发生有关。

抗微生物肽CRAMP联合抗生素分散铜绿假单胞菌生物被膜的增效作用研究

【目的】研究修饰后的鼠源抗微生物肽CRAMP联用抗生素对铜绿假单胞菌PAO1成熟生物被膜的分散作用,为临床联合应用抗生物被膜药物提供理论依据。【方法】采用微量肉汤稀释法测定CRAMP修饰肽和抗生素对PAO1的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和生物被膜最小根除浓度(MBEC);采用时间杀菌曲线(time-kill curve,TKC)法测定CRAMP修饰肽及抗生素单用和联用对PAO1成熟生物被膜的杀菌活性;采用菌落计数法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)评估CRAMP修饰肽联用抗生素对PAO1成熟生物被膜的分散作用。【结果】与单用抗生素组相比,除2种碳青霉烯类药物和4种β-内酰胺类药物,其他抗生素联合CRAMP修饰肽后的MBEC值均有不同程度的下降,万古霉素、罗红霉素和阿奇霉素下降倍数最明显(4倍)。TKC试验结果表明,CRAMP修饰肽分别联用万古霉素、罗红霉素和阿奇霉素均具有比单用药更快且更强的杀菌作用,尤其是与万古霉素联用仅在3h时杀灭了全部(100%)的生物被膜细菌。随后,通过CLSM观察发现生物被膜数量、体积、面积和单位面积荧光强度均有明显的变化。【结论】CRAMP修饰肽对铜绿假单胞菌PAO1成熟生物被膜具有分散作用,与万古霉素联用具有明显协同增效作用,且作用PAO1成熟生物被膜1 h时协同效应最大。