烟草野火病菌Pseudomonas syringae pv.tabaci yuexi-1信号肽预测及分析

利用Signal P 4.0、Lipo P 1.0及TMHMM v2.0对烟草野火病菌Pseudomonas syringae pv.tabaci yuexi-1菌株基因组中信号肽的数量、长度和氨基酸组成进行了预测及分类。结果确定其中432个ORFs（Open reading frame）所编码的N端有信号肽序列,占全部ORFs的8.81%。其中351条分泌型信号肽（SPI）,81条脂蛋白型信号肽（SPII）。在分泌型信号肽中,信号肽的长度为11~42个氨基酸,以长度为22个氨基酸的信号肽最多。同源性分析结果显示,具有相同信号肽序列的不同蛋白序列之间是高度保守的。该研究提供了野火病原菌致病因子的备选基因,提高该病菌致病因子的筛选效率。

云南烟草野火病病原细菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)鉴定

对云南省各大烟区烟草叶片上引起褪绿晕圈的病原细菌从形态学、培养性状、生理生化反应、抗菌素反应、抗血清反应、遗传性状等方面进行了鉴定。结果表明 :该菌为烟草野火病菌 [Pseudomonassyringaepv .tabaciWolf&Foser (1917)Young ,Dye&Wilkie (1978) ]。

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)对烟草细胞内5种防御酶系统的影响

定期测定了感病品种红花大金元接种烟草野火病菌后叶片内 5种酶活性的动态变化 ,研究结果表明 :烟草接种病菌后 ,SOD活性先上升 ,后在 8d下降 ,低于对照 ;POD活性接种后在 1d略低于对照 ,后上升较快 ,10d达到高峰 ,此后一直高于对照 ;PPO活性在接种后 1d低于对照 15 .8% ,但此后上升 ,16d达到高峰 ,18d下降低于对照 ;CAT活性变化与POD相似 ,接种 1d低于对照 ,但此后一直高于对照 ,并于 6d达到高峰 ,10d虽有所下降 ,但接着升高 ;PAL活性与CAT、POD变化相似 ,接种后 1d活性低于对照 2 8.3% ,其后上升 ,10d达到高峰 ,是对照的 2 .11倍 。

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)诊断试剂盒的制备及应用

本研究通过筛选致病力强的烟草野火病菌株作为抗原 ,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清 ,研制出SPA ELISA、间接 ELISA 2种诊断试剂盒 ,使检测真正作到了简便、快速、灵敏、准确。同时 ,应用这 2种诊断试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子进行检测 ,明确了云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根围。

中微量元素对烟草野火病的控制效果及其对烟草生物学性状的影响

通过设计小区试验,选择适当的时间对烟草必需的8种矿质营养元素(钙、铁、硼、锰、锌、钼、铜、镁)进行叶面喷施,研究了不同营养元素对烟草野火病的控制作用及其对烟草生物学性状的影响。结果表明,处理3(H3BO3)和处理6(Na2MoO4)对烟草野火病具有较好的防控效果分别为60.14%和71.76%;同时它们具有促进烟草叶面积增加的作用。

烟草野火病菌对细菌杀星的敏感性测定及敏感基线建立

从黑龙江省和吉林省烟草主要种植区获得烟草野火病菌（Pseudomonassyringaepv．tabaci）菌株61个，采用抑菌圈法对50％细菌杀星WP进行了敏感性测定。结果表明：不同地理来源的烟草野火病菌对细菌杀星敏感性有一定差异，EC50=1．070-1．517μg／mL，平均1．421t．,μg／mL；黑龙江省鸡西的菌株h28为最敏感菌株，其ECν50为1．070μg／mL，而黑龙江宁安菌株h40敏感性最低，其ECν50值为1．517μg／mL。同时确定了两省烟草野火病菌对细菌沙星的敏感基线为1．421μg／mL，可用于对烟草野火病菌对细菌杀星的抗药性监测；烟草野火病菌对细菌杀星未产生抗药性。

宜宾烟区烤烟野火病的致病力分化、生物学特性及抑菌药剂筛选

为了更有效地防治烟草野火病,对采自宜宾市烤烟种植区的具有典型野火病症状的烟叶样品进行了组织分离、培养和形态特征观察。采用针刺结合无针头注射接种法测定分离菌株的致病性,同时采用病菌生长速率法测定了不同致病力的菌株pv-xs-y-2(强)、pv-xt-y-2(中)和pv-gy-y-1(弱)的生物学特性及4种杀菌剂对强致病力菌株pv-xs-y-2的室内抑制效果。结果表明:14个菌株的形态特征均与烟草野火病病菌的形态特征一致,但各菌株间的致病力有明显的差异,平均病情指数为23.33~72.22。聚类分析结果显示,14个菌株在鉴别寄主(K326)上的致病力划分为强(病指为60~72.22)、中(病指为34.44~53.33)和弱(病指为23.33)3种类型,其中以中等致病力类型的菌株为主,占测试菌株的71.43%。在人工培养条件下,病菌的最适生长温度为28℃,pv-xs-y-2、pv-xt-y-2和pv-gy-y-1菌株的OD_(600)值分别为1.285、1.105和0.977;最适生长湿度为100%,pv-xs-y-2、pv-xt-y-2和pv-gy-y-1的OD_(600)值分别为0.694、0.555和0.505;最适pH值为7,说明野火病菌适宜在中性环境中生长。不同药剂对野火病室内毒力的测定结果依次为3%噻霉酮>4%春雷霉素>72%硫酸链霉素>20%噻菌铜,3%噻霉酮的有效中浓度(EC_(50))为9.401μg·mL^(-1)。

云南烟草野火病菌菌系分化研究

研究采用24个采自云南省各大烟区的烟草野火病菌对24个普通烟草品种及2种野生品种长花烟和黄花烟进行致病性接种试验。根据这26个烟草品种对烟草野火病菌株的抗性反应,将接种后形成病斑的直径进行聚类分析,筛选了一套烟草野火病生理小种的鉴别寄主。并以此为依据将24个病原菌株划分为两个生理小种,即0号和1号,为抗病育种工作提供了依据。

烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗菌活性物质研究

研究从黑龙江省健康烟草植株及其根际土壤和海南三亚采集的20种杂草中分别分离到287和98个细菌分离物，筛选出对烟草角斑病菌有拮抗活性的菌株22个，其中来自三亚稗草叶片中的一株细菌PA-2的抑菌效果最好，抑菌效果稳定。经形态学、生理生化及分子生物学鉴定， PA-2为铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aeruginosa）。筛选出最佳实验室发酵配方：氮源1%（牛肉膏？？蛋白胨=5？？3），葡萄糖0.3%， NaCl 0.5%， KNO30.3%；最佳培养条件：发酵温度28℃，培养基pH 7.0~7.5，接种量4%，装液量为250 mL三角瓶中装液50 mL。PA-2优化发酵液的田间防效达69.77%，比农用链霉素防效提高24.47%。采用硫酸铵分级沉淀法分离抑菌活性物质，结果表明，在（NH4）2SO4浓度为30%~90%各浓度梯度下均有抑菌活性物质沉淀，其中60%~70%（不含60%）是抑菌活性物质的最适盐析饱和度。抑菌活性物质具有较强的热稳定性、较好的蛋白酶耐受性、较好的耐碱性、较差的耐酸性，能溶于部分有机溶剂，经乙醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮萃取后，该抑菌活性物质抑菌活性下降范围为1.4%~4%。确定该抑菌活性物质为小分子碱性、水溶性脂肽类物质。

香料烟细菌性斑点病病原鉴定

2004～2005年在云南保山香料烟上发现一种由细菌侵染引起的新病害,称为香料烟细菌斑点病。该病主要危害叶片,初为黑褐色水浸状圆形或多角形小斑点,以后病斑扩大、连片,形成不规则的较大坏死斑。从病叶上分离到了28株细菌菌株,菌株接种于香料烟上,发病症状与田间自然症状一致,并从回接病株上重新分离得到此病病原细菌。经过革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、LOPAT试验、生理生化特性分析和16S-23S rDNA序列分析,以及病原菌寄主范围测定,确定该病原菌为丁香假单胞菌烟草致病变种[Pseudomonas syringae pv.tabaci(Wolfet al.)Young et al.]。

云南烟草野火病菌遗传多样性分析

应用Rep -PCR分子指纹技术结合传统植物病理学分析了 5 1个采自云南各大烟区的烟草野火病菌 (Pseudomonassyringaepv.tabaci)以及其他不同致病变种、不同种、不同属的植物病原菌的群体遗传多样性。用REP ,ERIC ,BOX ,IS1112和IS 1113等 5组专化性的引物对以上菌系基因组DNA进行PCR扩增 ,并对扩增指纹图谱综合进行UPGMA聚类分析 ,在相似水平 0 .92时 ,可将云南烟草野火病菌分为 3个群 ,即YN 1,YN 2 ,YN 3。

烟草野火病的研究进展

烟草野火病是世界普遍发生的一种病害 ,本文对该病害的病原、病害流行、致病机制及综合防治进行了综述。

几个烟草种质材料对野火病的抗性研究

通过用针刺结合无针头注射法,在温室条件下对烟草野生种Nicotianalongiflora,普通烟草(N.tabacum)中的白肋烟品种Ky14,烤烟品种Kutsaga110、SpeightG-140、中烟90和云烟85,杂交组合(SpeightG-140×Ky14)F1、(中烟90×Ky14)F1和(云烟85×Ky14)F1进行烟草野火病菌的接种,对这几个烟草种质材料对野火病的抗性进行了鉴定。结果表明,N.longiflora对野火病免疫,(云烟85×Ky14)F1、(中烟90×Ky14)F1和(SpeightG-140×Ky14)F1高抗野火病,Ky14和Kutsaga110抗野火病,SpeightG-140、中烟90和云烟85易感野火病。

应用生物技术提高烟草对野火病抗病性的研究进展

自 8 0年代中后期以来 ,在应用生物技术提高植物抗病性方面取得了重大进展。

烟草野火菌毒素致病作用的研究进展

烟草野火病是一种世界普遍发生的病害。烟草野火病菌毒素是一种重要的致病因子,从该毒素的结构,合成,致病机制及研究现状等方面概述了其在致病过程中的作用。

防治烟草野火病拮抗细菌菌株的筛选

从多种植株根际土壤中和烟草叶面分离到188个细菌分离物,室内抑菌圈法测定抑菌效果,温室测定防效,结果筛选出有明显抑菌作用的菌株21个,温室采用高压喷雾接种烟草野火病菌株,普通喷雾接种生防菌菌株,建立了以病斑减轻率和病斑扩展抑制率2个指标的活体筛选方法,温室防效试验筛选出防效较好的菌株6个,其中2 e',1 010 D防效较好,其次为C 3和3 g'.病斑减轻率为58%～91%,病斑扩展抑制率为56.58%～78.08%.这为生产上防治烟草野火病提供了新思路.

烟草野火病菌初侵染源的研究

为探明烟草野火病菌的初侵染源,应用SPA-ELISA,间接-ELISA反应试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子等进行了检测,明确云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根部残体.

云南省烟草野火病菌毒素的致病性评价

主要通过对烟草野火病菌菌株(Pseudom onas syringae pv. tabaci)致病力与其粗毒素毒力的相关性的研究,评价了烟草野火病菌毒素在致病过程中的作用。结果表明:①野火菌毒素毒力与其菌株的致病力呈极显著相关性,相关系数r达0.928;②高感和中感品种K326,云85对病原菌的感病性与对菌毒素的敏感性在P<0.05的水平上有相关关系;③从病斑处可以分离到该毒素,再接种能重现野火病症状;④抑菌物质对病原菌和病菌毒素的抑制作用相一致。

烟草野火病菌在不同衬底上吸附的原子力显微镜研究

为了筛选植物病原细菌原子力显微镜(AFM)制样方法,对烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)在云母、硅、玻璃和硅烷化玻璃等衬底上的粘附情况进行了系统观察,结果表明硅烷化玻璃衬底能够较好地固定烟草野火病菌。

云南省烟草野火病菌生理小种分化的研究

通过从云南省主要产烟区收集到的 45个烟草野火病菌菌株在 15个供试烟草品种上的接种试验研究,筛选到一套烟草野火病菌生理小种鉴别寄主体系。同时,以发病率作为抗感划分标准,可将供试菌株划分为 4个生理小种 (即生理小种Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。