耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌临床分布及耐药特点分析

目的:分析耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant pseudomonas aeruginosa,CRPA)在临床科室的分布情况,总结其耐药特点,探讨抗菌方法。方法:选取2022年3月~2023年2月CRPA菌株80株,设为观察组,采集同期不耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌80株,设为对照组,比较临床科室分布情况、CRPA耐药特点、MBL表型阳性率与基因检测结果。结果:临床分布比较,呼吸与危重症医学科、重症医学科与普外科CRPA检出率较高,差异显著(P<0.05);CRPA耐药特点显示,CRPA对替卡西林/克拉维酸耐药率显著高于其他药物,耐药率较低的常用抗菌药是阿米卡星与妥布霉素;MBL表型阳性率较高,为92.50%(74/80),MDR-PA占比53.75%(43/80),XDR-PA占比22.50%(18/80)。结论:CRPA较易发生在呼吸与危重症医学科和重症医学科,阿米卡星与妥布霉素等药物在CRPA感染中抗菌效果较好,CRPA抗感染治疗中应针对性用药。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制的研究

目的分析临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征及其对亚胺培南耐药机制。方法应用BD Phoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,头孢哌酮/舒巴坦采用K-B法;应用聚合酶链反应（PCR）方法检测碳青酶烯酶相关基因（IMP、VIM、GIM、SPM、OXA、GES）、膜微孔蛋白基因oprD2,采用Etest试验观察氰氯苯腙（CCCP）对亚胺培南最低抑菌浓度（MIC）的影响,以研究细胞内主动外排机制。结果耐亚胺培南铜绿假单胞菌除对阿米卡星100%敏感外,对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感率为48.0%~54.0%,对三代、四代头孢菌素、氨曲南、喹诺酮类等抗菌药物抗菌活性差,敏感率为3.0%~29.0%;对美罗培南29.0%敏感,对氨苄西林/舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药;检测到IMP阳性率17.6%,oprD2阳性率2.9%,其余耐药基因未检测到;当CCCP存在时,亚胺培南的MIC值下降4个浓度梯度,提示存在主动外排机制的菌株占11.8%。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌除阿米卡星外,对其他常用抗菌药物耐药严重;产IMP型金属β-内酰胺酶、细胞内主动外排机制以及膜微孔蛋白基因oprD2缺失,是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因,但膜微孔蛋白基因oprD2缺失,不是铜绿假单胞对亚胺培南耐药的主要机制。

2011年中国CHINET铜绿假单胞菌耐药性监测

目的了解2011年中国不同地区铜绿假单胞菌临床分离株的耐药性和耐药特征,指导临床合理使用抗菌药物。方法对全国15所医院临床分离的6012株铜绿假单胞菌按照统一方案,采用统一材料、方法(K-B法或自动化仪器)和判断标准(CLSI 2011年版),进行铜绿假单胞菌的耐药性监测,并用WHONET5.6软件进行数据分析。结果 2011年15所医院从临床标本中共分离6 012株铜绿假单胞菌,其中92.9%分离自住院患者,73.7%的菌株分离自呼吸道标本。铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率最低,为14.3%。耐药性最高的医院分离株对大多数抗菌药物的耐药率均高于30%,而耐药性最低的成人医院分离的菌株对大多数抗菌药物的耐药率均低于20%,2所儿童医院分离菌株对各种抗菌药物的耐药率均低于17%;分离自门诊的菌株对各种抗菌药物的耐药率均低于25%,而分离自ICU的菌株除了对阿米卡星的耐药率为16.1%外,对其他各种抗菌药物的耐药率均高于23%。各医院泛耐药铜绿假单胞菌的检出率平均为1.8%。结论我国不同地区、不同医院临床分离的铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药率仍处于较高水平,但近年耐药性增长趋势稳定。各地区、各医院、各科室患者的分离株对抗菌药物的耐药性相差较大,医疗机构应加强细菌耐药监测,指导临床合理使用抗菌药物。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及分子流行病学研究

目的了解广州市某医院烧伤科病房亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的耐药谱特点及分子流行病学情况。方法采用Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,应用随机扩增DNA多态性分析(RAPD)技术,对从不同患者连续分离到的48株耐药菌进行DNA分型。结果48株亚胺培南耐药菌株均为多重耐药菌,对临床常用的多种抗菌药物耐药,敏感率由高到低依次为CIP、TOB、AMK、GEN和FEP;RAPD图谱显示48株菌分别属于A、B、C、D 4个不同克隆,其中A型、B型是主要流行克隆。结论该院烧伤科病房亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的流行主要是医院感染所致,流行株呈多重耐药。

铜绿假单胞菌耐药基因的分子流行病学研究

目的了解不同地区临床分离铜绿假单胞菌耐药基因的流行现状。方法对临床分离的104株铜绿假单胞菌采用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种和K—B法测定抗菌药物的敏感性，利用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（16种）和多分子标志法聚类分析菌株的亲缘性。结果3个地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率依次为51．3％、80．0％和100．0％，对第三代头孢菌素的耐药率为48．2％～100．0％，耐药基因oprD2缺失率为90％～100％；多重耐药基因标志的菌株显示存在克隆传播现象，但绍兴地区流行耐药株以oprD2的缺失为主，湖州地区则以TEM、oprD2缺失、aac（3）-Ⅱ、ant（3”）-Ⅰ、qacEΔ1为主。结论3个地区临床分离的铜绿假单胞菌呈多重耐药，并由克隆传播导致医院感染，但耐药的机制并不相同。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染现状及监测

目的探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染现状及其对13种常用抗菌药物的耐药性,指导临床合理选用抗菌药物。方法用常规方法对289株铜绿假单胞菌临床株进行鉴定,并采用Kirty-Bauer法选用13种抗菌药物进行药物敏感试验。结果106株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分离率为36.7%,主要来源于痰标本,占78.3%;其在临床病区分布中居前3位者依次为呼吸内科、神经外科、老年病科;106株铜绿假单胞菌对氯霉素、复方新诺明等8种抗菌药物均表现出>50%的耐药率。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染严重,对抗菌药物呈多重耐药,治疗此类细菌感染宜参考细菌药敏结果合理选用抗菌药物。

铜绿假单胞菌群体感应系统中lasR/rhlR基因缺陷对生物膜形成的影响

目的研究lasR/rhlR基因缺陷对铜绿假单胞菌(PAE)体外生物膜形成的影响。方法采用生理盐水-吸痰管系统进行铜绿假单胞菌体外生物膜的培养,于3 d后用扫描电子显微镜观察PAEO1野生型、PAEO1 lasR、PAEO1 rhlR、PAEO1 lasR rhlR基因缺陷型菌株形成生物膜的情况。结果3 d后PAEO1野生型可形成较厚、有孔状通道的成熟生物膜结构,PAEO1 lasR、PAEO1 rhlR、PAEO1 lasR rhlR基因缺陷型黏附、聚集形成明显稀薄的早期生物膜结构。结论lasR rhlR基因缺陷可影响铜绿假单胞菌体外形成生物膜的能力。

急诊重症监护病房患者下呼吸道感染铜绿假单胞菌的研究

目的 探讨急诊重症监护病房（EICU）下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌分布特征及其耐药性。方法 对2005年8月-2006年2月间，在医院EICU收治的25例下呼吸道感染患者的临床资料进行分析。结果 在EICU的25例下呼吸道感染患者中，共分离出病原菌81株，革兰阳性菌32．1％，革兰阴性菌43．2％，真菌24．7％；其中铜绿假单胞菌占13．6％；铜绿假单胞菌药敏结果表明头孢噻肟、庆大霉素、复方新诺明、米诺环素、左氧氟沙星、加替沙星等抗菌药物耐药。结论 铜绿假单胞菌感染与耐药是EICU中下呼吸道感染患者治疗中的重要问题，应引起重视。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacEΔ1基因检测研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考。方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacEΔ1基因存在状况。结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ和ant(2″)Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacEΔ1基因检出率也达到94.3%。结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂。

酸性氧化电位水对铜绿假单胞菌的杀菌机制研究

目的探讨酸性氧化电位水(EOW)对铜绿假单胞菌的杀菌机制。方法以铜绿假单胞菌作为研究对象,从蛋白质渗漏,核酸和细胞膜钙离子通透性等方面对EOW的杀菌机制进行研究,同时以2%戊二醛作为阳性对照组,以生理盐水(NS)作为阴性对照组。结果以EOW、2%戊二醛对铜绿假单胞菌作用30 s杀灭率>99.99%,作用60 s杀灭率可达100.00%。EOW、NS、2%戊二醛作用铜绿假单胞菌60 s后,经BCA法检测蛋白渗漏,分别为(96.00±7.42)、(94.15±7.49)、(216.97±10.35)μg/mL,总体比较,差异有统计学意义(F=613.20,P<0.01),2%戊二醛组高于EOW组、NS组;蛋白渗漏量不随作用时间增加而改变(均P>0.05)。随机多态性扩增DNA电泳图谱显示,EOW组与NS组均在500~1 000 kb间显示亮度较高的密集条带,2%戊二醛组无扩增条带。EOW及2%戊二醛作用后钙离子荧光强度均低于NS组。结论 EOW可能的杀菌机制是使铜绿假单胞菌细胞膜通透性受到一定程度的损伤,致使Ca2+泄漏,但未能造成蛋白质泄漏,对其核酸损伤作用不明显,DNA可能并非EOW杀菌靶点。

磷霉素与五种氨基糖苷类抗菌药物对20株铜绿假单胞菌的联合药敏研究

目的:评价磷霉素分别与五种氨基糖苷类抗菌药物(阿米卡星,异帕米星,庆大霉素,奈替霉素,妥布霉素)对20株临床分离铜绿假单胞菌的体外联合抗菌效应。方法:采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定。测定不同浓度组合的5组抗菌药物对20株临床分离的铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度,并计算FIC指数判定联合效应。FIC≤0.5为协同作用,0.5<FIC≤1为相加作用,1<FIC≤2为无关作用,FIC>2为拮抗作用。结果:磷霉素与5种氨基糖苷类药物联合应用后,药物MIC50显著降低。FIC指数分布:FIC≤0.5占65%～85%;0.5<FIC≤1占10%～20%;1<FIC≤2为5%～15%;FIC>2为0。结论:磷霉素与氨基糖苷类抗菌药物联合用药后,对铜绿假单胞菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无关作用较少,更无拮抗作用。

医院感染铜绿假单胞菌对抗菌药物多重耐药基因的研究

目的了解某院铜绿假单胞菌(PA)医院感染菌株的多重耐药情况和有关机制。方法采用微量肉汤法对分离自临床标本的37株PA进行药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)法对多重耐药的PA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、耐消毒剂和磺胺基因检测,并对耐药基因进行测序。结果β-内酰胺酶基因TEM、CARB、VIM的阳性率分别为24.32%(9/37)、43.24%(16/37)、5.41%(2/37),而SHV、CTX-M、OXA-10group、PER、GES、VEB、DHA、IMP均阴性,oprD2缺失率为86.49%(32/37);氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ阳性率分别为8.11%(3/37)、43.24%(16/37)、18.92%(7/37)、40.54%(15/37);耐消毒剂和磺胺基因qacE△1-sul1阳性达51.35%(19/37)。结论医院感染PA存在多种耐药基因,严重影响临床的抗感染疗效,应采取有效措施控制耐药菌株的出现。

活性氧消毒剂制备技术及空气消毒效果的研究

文中对活性氧消毒剂的制备工艺及其对于空气的消毒效果进行了阐述 ,说明其制造工艺是一种原子经济反应 ,新型的环境友好化工过程 ,对白色念球菌 (Pseudomonasaeruginosa)、金黄色葡萄球菌 (Sylococcusccureus)的杀菌效果均高达 99 90 % ,通过相关的试验数据说明消毒剂的性能稳定 ,无毒 ,对皮肤无刺激性。

含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌生物被膜特性的研究

目的研究含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌(PAE17)在不同条件下形成的生物被膜,以了解新的mucA突变基因对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法采用PIA平板法鉴定3种铜绿假单胞菌的黏液表型,色氨酸反应法测定其胞外多糖蛋白复合物的合成量;刚果红染色法和静态培养法分别观察其在固态及液态条件下形成的生物被膜;采用电转化法将绿色荧光蛋白表达质粒(pGFPuv)导入上述3种病原菌中,应用改良平板法建立体外生物被膜模型,激光共聚焦显微镜观察不同时间点生物被膜的形成。结果PAE17与PDO300呈现明显的黏液表型,其胞外多糖的产量(101.6μg/ml、118.3μg/ml)显著高于PAEO1(56.3μg/ml),但无论在固态、液态和改良平板法体外生物被膜模型中,PAE17形成的生物被膜均与PDO300迥异,而表现类似PAEO1。结论新的mucA突变基因可能存在藻酸盐以外的其他途径调节生物被膜的形成。

43株临床铜绿假单胞菌exoS、exoU基因的携带及其耐药性

目的研究43株临床分离的铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒素基因exoS、exoU携带情况以及细菌的耐药性。方法采用聚合酶链反应(PCR)法检测毒素基因的分布,K-B纸片扩散法检测细菌的耐药性。结果 43株临床铜绿假单胞菌中,37株(86.05%)exoS基因阳性,6株(13.95%)exoU基因阳性,无同时携带2种基因菌株。携带exoU的临床株对9种抗菌药物的耐药率均高于携带eroS菌株,其中对头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率差异有显著性(P<0.05)。结论携带毒素基因exoU的铜绿假单胞菌临床株所占比例较低,但耐药率高。

乐果降解菌的分离、筛选和鉴定

筛选高效的有机磷农药乐果的降解菌。采集福建省福农生化有限公司排污口,沟口及草坪土壤进行乐果降解菌的分离鉴定。经含乐果的培养基分离培养、脂肪酸鉴定,总共得到17个属23株细菌,对这些菌通过消解试验进行复筛,得到4株对乐果有较好降解能力的菌株,沙门氏菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌,在乐果浓度为1000mg/L时,48h的降解率分别为27.3%、26.6%、22.9%和18.1%。对乐果有降解作用的菌株存在种类多样性的特点。

铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建

目的构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。方法分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3′、5′侧翼序列,将clpP基因及其3′、5′侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37bp^453bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoRⅠ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。结果经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功。结论本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础。

重症加强护理病房碳青霉烯类抗菌药物用药频度与非发酵菌检出情况的相关性分析

目的:研究重症加强护理病房(intensive care unit,ICU)碳青霉烯类抗菌药物用药频度(defined daily dose system,DDDs)与非发酵菌检出情况的相关性,探索碳青霉烯类抗菌药物管理的有效指标,为合理应用该类药物提供依据。方法:统计2015年7月至2016年12月河南省胸科医院ICU碳青霉烯类抗菌药物的季度使用量、非发酵菌检出菌株数及检出率,具体指标包括碳青霉烯类抗菌药物、亚胺培南及美罗培南的DDDs、人均DDDs,非发酵菌、鲍曼不动杆菌、耐药鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌及耐药铜绿假单胞菌检出菌株数及检出率,对上述数据进行相关性分析。结果:非发酵菌季度检出菌株数、检出率与亚胺培南的人均DDDs呈正相关性,相关系数分别为0.898、0.910,与美罗培南的DDDs呈负相关性,相关系数分别为-0.835、-0.815,差异均有统计学意义(P<0.05);鲍曼不动杆菌和耐药鲍曼不动杆菌的季度检出菌株数、检出率与亚胺培南的人均DDDs呈正相关性,相关系数分别为0.815、0.816和0.813、0.816,差异均有统计学意义(P<0.05);其他数据之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:碳青霉烯类抗菌药物的DDDs、人均DDDs与非发酵菌特别是鲍曼不动杆菌的检出情况存在相关性,是监测碳青霉烯类抗菌药物合理应用的有效指标。

某县级医院铜绿假单胞菌的分布及耐药性变迁

目的：了解近年某县级医院铜绿假单胞菌的分布及耐药特点，为临床合理用药提供依据，并有助于医院感染预防与控制。方法对该院2010-2012年临床各类标本分离的铜绿假单胞菌的资料进行统计分析。结果3年共分离铜绿假单胞菌369株，主要检出自痰液及咽拭子（234株，63．41％）、尿液（41株，11．11％）和伤口拭子（28株，7．59％）标本；在病区，主要分布于重症监护室（146株，39．56％）、呼吸内科（51株，13．82％）和神经外科（37株，10．03％）。铜绿假单胞菌对多粘菌素B无耐药；对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和阿米卡星的耐药率较低（6．81％～22．73％）；各年度相比，除多粘菌素B外，对其他抗菌药物的耐药率均有不同程度上升，部分抗菌药物具统计学意义（P＜0．05）。结论该院铜绿假单胞菌主要分离自呼吸道标本，以收治危重症患者的科室分布较多；对多种抗菌药物具有较高的耐药性，且有上升趋势，临床应加强监控。